聯系電話
上海勁馬實驗設備有限公司
中級會員·17年
- 聯系人：
- 馮經理
- 電話：
- 021-60521817
- 手機：
- 13817140470
- 售后：
- 86-021-61107441
- 傳真：
- 86－021－64881400
- 地址：
- 上海市松江區(qū)漕河涇研展路455號B座
- 個性化：
- www.shjmsw.com
- 手機站：
- m.shjmsw.com
- 網址：
- www.shjmsw.com
掃一掃訪問手機商鋪
一、實驗原理
將抗C單克隆抗體包被固相聚苯乙烯板，加入經聚乙二醇(PEG)處理的待測樣本，然后依次加入兔抗人C-IgC多克隆抗體和過氧化物酶標記的豬抗兔IsC，再加入底物2，2’-連氮-雙(3-乙基苯駢唑啉-6-磺酸鹽)(ABTS)和H2O2顯色，于酶標儀405mn處測定每分鐘光密度增加量(OD/min)，以OD/min為縱坐標，C標準晶濃度為橫坐標繪制標準曲線圖，求出待測樣本中C的含量。
二、實驗試劑
1.PBSPH7.2，9mmol/L磷酸鹽緩沖液含140mmol/L NaCl。
2.PBS-Tween pH7.2 PBS含0.05％Tween20，簡稱PBS-T。
3.底物溶液：100mL 2mmol/L ABTS溶液中含100mmol/L醋酸鈉，50mmol/L磷酸鈉，2.5mmol/L H2O2。
4.沉淀劑：①：100mL pH8.0，20mmoL/L Tris-甘氨酸-HCl緩沖液中含20g PEG 4 000，0.8g Rivanol；沉淀劑②：100mLpH2.0.100mmol／L甘氨酸-HCl緩沖液中含20g PEG4000。
三、實驗步驟
1.用鹽和/或PEG沉淀血漿中C5：在微量反應板中加入EDTA抗凝血漿100gL，然后加人100/uL沉淀劑，用下述三種方法中任何一種沉淀血漿中C5。
① 在微量反應板中加入100uL 2mol/L HCl與100uL EDTA抗凝血漿混合，室溫5h。加入HCl后血漿pH值在1.0-1.5之間。上清用4倍體積的0.29mol/L Tris調節(jié)至pH7.1-7.4。
②在微量反應板中加入100uL沉淀劑①，室溫30min。
③ 在微量反應板中加入100uL沉淀劑②(血漿pH值在4.0-4.5之間)。室溫30min。用方法2)和方法3)沉淀C5后，上清加入4倍體積的含0.05％Tween 20 pH7，10.21mol/L Tris-HCl緩沖液，血漿被稀釋10倍。
2.用抗C單克隆抗體(McAb)包被酶標反應板：用pHl0.6，50mmol/L碳酸鈉溶液將抗CMcAb稀釋成10ug/mL，每孔加100uL，4℃ 16h。次日取出每孔加含1％(W/V)明膠的PBSl50gL，室溫lmin；然后用PBS-Tween 20洗滌一次。
3.樣本中CSa的檢測：
洗滌后的酶標板，每孔加入方法1)、2)或3)處理的血漿樣本zoot&，4℃16h，用PBS-Tween20洗滌1次，每孔加入用含0．1％明膠的PBS-T稀釋的兔抗人CSa-IgC．多克隆抗體(46ug/mL)100t&，室溫2h，用PBS-Tween20洗滌3次；每孔加入用含0.1％明膠PBS-T稀釋的過氧化物酶標記的豬抗兔IgClOOt&(稀釋前l(fā)mL過氧化物酶偶聯物內加100ul無關鼠McAb、10ul人血漿或10ul激活的人血清處理)，室溫2min，每孔用PBS-Tween20洗滌4次；每孔加入底物溶液100ul，lmin后以PBS-T調零，每3min于酶標儀405nm處讀取OD值。以OD/min增加量計算過氧化物酶活性。其活性與血漿中C含量呈正相關。本法zui低檢測極限為1ng/mL，此法未檢測出正常人新鮮血漿中的C。
4. 標準曲線的繪制：取已知濃度純化的C，對倍稀釋成一系列不同的濃度(0.039-5.000ng/mL)，分別加入包被有抗CMcAb的酶標板中，然后按上述方法依次加入兔抗人C-IgC和過氧化物酶偶聯的豬抗兔IgC及過氧化物酶的底物，以PBS-Tween調零點，讀取OD40s/min增加量，以C(desarg)濃度為橫坐標，OD40s/minx 200為縱坐標繪制標準曲線。每次繪制標準曲線應取6個已知濃度的純化C。
上海勁馬實驗設備有限公司感謝多年以來各位老師對本公司的大力支持，希望通過我們的不懈努力能為科研事業(yè)做出更大的貢獻！公司為您提供實驗室操作試劑包括elisa試劑盒,胎牛血清,培養(yǎng)基,對照品,抗體,標準品,生化試劑等。
