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經(jīng)常提質(zhì)粒嗎？熟練之后，提質(zhì)粒乃至質(zhì)粒構(gòu)建都很簡(jiǎn)單。但是質(zhì)粒圖譜你真會(huì)看嗎？小編這里有秘訣，免費(fèi)分享給大家。
第yi步：首先看 Ori 的位置，了解質(zhì)粒的類(lèi)型（原核/真核/穿梭質(zhì)粒）。
第二步：再看篩選標(biāo)記，如抗性，決定使用什么篩選標(biāo)記。
Ampr 水解β－內(nèi)酰胺環(huán)，解除氨芐的毒性。
tetr 可以阻止四環(huán)素進(jìn)入細(xì)胞。
camr 氯霉素羥乙?；苌?，使之失去毒性。
neor（kanr）氨基糖苷磷酸轉(zhuǎn)移酶 使 G418（長(zhǎng)那霉素衍生物）失活
hygr 使潮霉素β失活。
第三步：看多克隆位點(diǎn)（MCS）。它具有多個(gè)限制酶的單一切點(diǎn)。便于外源基因的插入。如果在這些位點(diǎn)外有外源基因的插入，會(huì)導(dǎo)致某種標(biāo)志基因的失活，而便于篩選。決定能不能放目的基因以及如何放置目的基因。
第四步：再看外源 DNA 插入片段大小。質(zhì)粒一般只能容納小于 10Kb 的外源 DNA 的片段。一般來(lái)說(shuō)，外源 DNA 的片段越長(zhǎng)，越難插入，越不穩(wěn)定，轉(zhuǎn)化效率越低。
第五步：是否含有表達(dá)系統(tǒng)元件，即啟動(dòng)子－核糖體結(jié)合位點(diǎn)－克隆位點(diǎn)－轉(zhuǎn)錄終止信號(hào)。這是用來(lái)區(qū)別克隆載體與表達(dá)載體。克隆載體中加入一些與表達(dá)調(diào)控有關(guān)的元件即成為表達(dá)載體。選用那種載體，還是要以實(shí)驗(yàn)?zāi)康臑闇?zhǔn)繩。
啟動(dòng)子－核糖體結(jié)合位點(diǎn)－克隆位點(diǎn)－轉(zhuǎn)錄終止信號(hào)
啟動(dòng)子－促進(jìn) DNA 轉(zhuǎn)錄的 DNA 順序，這個(gè) DNA 區(qū)域常在基因或操縱子編碼順序的上游，是 DNA 分子上可以與 RNApol 特異性結(jié)合并使之開(kāi)始轉(zhuǎn)錄的部位，但啟動(dòng)子本身不被轉(zhuǎn)錄。
增強(qiáng)子/沉默子－為真核基因組（包括真核病毒基因組）中的一種具有增強(qiáng)鄰近基因轉(zhuǎn)錄過(guò)程的調(diào)控順序。其作用與增強(qiáng)子所在的位置或方向無(wú)關(guān)。即在所調(diào)控基因上游或下游均可發(fā)揮作用。/沉默子－負(fù)增強(qiáng)子，負(fù)調(diào)控序列。
核糖體結(jié)合位點(diǎn)/起始密碼/SD 序列（Rbs/AGU/SDs）：mRNA 有核糖體的兩個(gè)結(jié)合位點(diǎn)，對(duì)于原核而言是 AUG（起始密碼）和 SD 序列。
轉(zhuǎn)錄終止順序（終止子）/翻譯終止密碼子：結(jié)構(gòu)基因的zui后一個(gè)外顯子中有一個(gè) AATAAA 的保守序列，此位點(diǎn) down－stream 有一段 GT 或 T 富豐區(qū)，這 2 部分共同構(gòu)成 poly（A）加尾信號(hào)。結(jié)構(gòu)基因的zui后一個(gè)外顯子中有一個(gè) AATAAA 的保守序列，此位點(diǎn) down－stream 有一段 GT 或 T 富豐區(qū)，這 2 部分共同構(gòu)成 poly（A）加尾信號(hào)。
為什么質(zhì)粒圖譜上有的箭頭順時(shí)針有的箭頭逆時(shí)針？那其實(shí)是代表兩條 DNA 鏈，即質(zhì)粒是環(huán)狀雙鏈 DNA，它的啟動(dòng)子等在其中一條鏈上，而它的抗性基因在另一條鏈上。
上海勁馬實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司感謝多年以來(lái)各位老師對(duì)本公司的大力支持，希望通過(guò)我們的不懈努力能為科研事業(yè)做出更大的貢獻(xiàn)！公司為您提供實(shí)驗(yàn)室操作試劑包括elisa試劑盒,胎牛血清,培養(yǎng)基,對(duì)照品,抗體,標(biāo)準(zhǔn)品,生化試劑。
