貼壁細(xì)胞處理方法

• 細(xì)胞在培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)至良好狀態(tài)后灌滿*培養(yǎng)液并封好瓶口是細(xì)胞運(yùn)輸?shù)霓k法。從細(xì)胞資源中心獲得細(xì)胞回到自己的實(shí)驗(yàn)室后，先打開外包裝，用75%酒精噴灑整個瓶消毒后放到超凈臺內(nèi)，嚴(yán)格無菌操作。

二、 鏡下觀察：

未超過80%匯合度時(shí)，將瓶裝的*培養(yǎng)液移入無菌瓶中，留待日后培養(yǎng)用，原瓶（T25瓶）保留6-8ml*培養(yǎng)液，放入37℃、5%CO2孵箱培養(yǎng)；

超過80%匯合度時(shí)，按要求比例消化傳代。

三、消化方法

1、將瓶裝的*培養(yǎng)液移入無菌瓶中，留待日后培養(yǎng)用。加消化液0.25% Trypsin-EDTA (1X), Phenol Red消化。

2、T25瓶加3ml PBS，洗一次，棄上清，再加1ml消化液消化，顯微鏡下觀察，等細(xì)胞*脫離瓶壁分離成單個后，加培養(yǎng)基混勻，離心收集，按要求分瓶（視細(xì)胞密度而定1:2-1:3,1:3-1:6， 1:6-1:8），每T25瓶加培養(yǎng)基至6-8ml，37℃、5%CO2孵箱培養(yǎng)

四、若客戶收到2ml小管細(xì)胞

收到細(xì)胞以后，用75%酒精噴灑整個管子消毒后放到超菌臺內(nèi)，嚴(yán)格無菌操作；然后將小管細(xì)胞轉(zhuǎn)移至T25培養(yǎng)瓶，加入9ml左右含F(xiàn)BS的培養(yǎng)基混勻，放入培養(yǎng)箱過一夜培養(yǎng)后查看細(xì)胞匯合度：若未超過80%匯合度，換液繼續(xù)培養(yǎng)，據(jù)情況傳代或者凍存。若超過80%匯合度，可直接進(jìn)行傳代（方法同上）

    該細(xì)胞使用培養(yǎng)基：1、DMEM(高糖)    2、R1640    3、R1640（改良）4、MEM(EBSS)    5、MEM(NEAA)    6、D/F12    7、F12    8、F12K    9、MaCcoy‘    10、L15    

血清要求：1、20%FBS    2、15%FBS    3、10%FBS    4、5%FBS    5、2.5%FBS    6、15%HS    7、10%HS    8、5%HS    9、2.5%HS    10、10%CCF(滅活)

四、細(xì)胞代數(shù)：      復(fù)蘇人：     

凍存液：常規(guī)培養(yǎng)液+20%FBS+8%DMSO

                                                      奧陸生物