產(chǎn)品信息

產(chǎn)品簡介

鬼筆環(huán)肽是一種從鬼筆鵝膏中得到的有毒的環(huán)狀七肽，可以與纖維肌動(dòng)蛋白絲非常特異的結(jié)合，并且具有很高的親和力。它能使肌動(dòng)蛋白聚合物的臨界濃度降低到小于1µg/mL，因此，常作為一種聚合促進(jìn)劑使用。該物質(zhì)可以被綠色熒光染料標(biāo)記，從而作為標(biāo)記物用于組織細(xì)胞培養(yǎng)、組織切片或無細(xì)胞系中的肌動(dòng)蛋白標(biāo)記。

注意事項(xiàng)：            

鬼筆環(huán)肽的分子量小，很容易通過細(xì)胞，不需要對(duì)細(xì)胞進(jìn)行冷丙酮和TRITON X-100處理。毒性較大，戴上手套操作。

鬼筆環(huán)肽（Phalloidin）的結(jié)合阻止絲狀肌動(dòng)蛋白（微絲）的解離，穩(wěn)定微絲結(jié)構(gòu)，從而破壞微絲的聚合-去聚合的動(dòng)態(tài)平衡。此特性使得肌動(dòng)蛋白聚合發(fā)生的臨界濃度（CC）降至＜1µg/mL，因此，可用作一種聚合促進(jìn)劑。此外，鬼筆環(huán)肽還可抑制F-actin的ATP水解活性。

本品為鬼筆環(huán)肽-AMCA偶聯(lián)物產(chǎn)品的光譜學(xué)相關(guān)參數(shù)為Ex=353/ Em=442；其對(duì)應(yīng)分子量大小為1003.88。選擇性地結(jié)合F-肌動(dòng)蛋白。以納摩爾濃度使用，鬼筆環(huán)肽衍生物是方便的探針，用于標(biāo)記，鑒定和定量甲醛固定和透化組織切片中的F-肌動(dòng)蛋白，細(xì)胞培養(yǎng)物或無細(xì)胞實(shí)驗(yàn)。肌動(dòng)蛋白是一種球狀的，大約42kDa的蛋白質(zhì)，幾乎存在于所有真核細(xì)胞中。 它也是度保守的蛋白質(zhì)之一，與藻類和人類不同的物種相差不超過20％。 肌動(dòng)蛋白是細(xì)胞中兩種細(xì)絲的單體亞基：微絲，細(xì)胞骨架的三個(gè)主要組分之一，以及微絲，是肌細(xì)胞中收縮裝置的一部分。 因此，肌動(dòng)蛋白參與許多重要的細(xì)胞過程，包括肌肉收縮，細(xì)胞運(yùn)動(dòng)，細(xì)胞分裂和胞質(zhì)分裂，囊泡和細(xì)胞器運(yùn)動(dòng)，細(xì)胞信號(hào)傳導(dǎo)，以及細(xì)胞連接和細(xì)胞形狀的建立和維持。

本品以1000×儲(chǔ)存液形式（溶于DMSO）提供。按照100µl/孔（96孔板），總共可做300T。

操作步驟

1. 制備 1× AMCA 鬼筆環(huán)肽工作液：

在含有 1% BSA 的 1 mL PBS 中加入 1 μL 1000×AMCA Phalloidin DMSO 溶液。

注意：1. 不同的細(xì)胞類型可能染色不同。AMCA鬼筆環(huán)肽工作溶液的濃度應(yīng)相應(yīng)地制備。

2. 1% 牛血清白蛋白 (BSA) 用于減少非特異性背景染色。

2. 染色細(xì)胞：

2.1 用 PBS 清洗細(xì)胞 2-3 次。在室溫下將細(xì)胞固定在 3.7% 不含甲醇的 PBS jiaquanrongye中 10-30 分鐘。

注意：避免使用任何含有甲醇的固定劑，因?yàn)榧状紩?huì)在固定過程中破壞肌動(dòng)蛋白。優(yōu)選的固定劑是不含甲醇的甲醛。

2.2 固定細(xì)胞用 PBS 清洗 2-3 次。

2.3 可選：將 PBS 中的 0.1% Triton X-100 添加到固定細(xì)胞中 3-5 分鐘以增加滲透性。用 PBS 清洗細(xì)胞 2-3 次。

2.4 固定好的細(xì)胞中加入100 μL/孔（96孔板）AMCA鬼筆環(huán)肽工作液，室溫染色20-90分鐘。

2.5 用 PBS 輕輕沖洗細(xì)胞 2-3 次以去除多余的 AMCA 鬼筆環(huán)肽。

注意事項(xiàng)

1）DMSO有毒，使用時(shí)請(qǐng)小心操作。

2）了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。

Note:   鬼筆環(huán)肽具有毒性，需小心操作（對(duì)人，其半數(shù)致死劑量為2mg/Kg）。

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