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上海斯邁歐分析儀器有限公司
主營產(chǎn)品： 氣相色譜、液相色譜、氣質(zhì)聯(lián)用儀、液質(zhì)聯(lián)用儀、原子吸收光譜儀、紫外分光光度計(jì) |
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使用1290 Infinity液相色譜儀系統(tǒng)分析中藥注射液
2022-5-15 閱讀(356)
摘要：本文使用安捷倫 1290 Infinity 二維液相系統(tǒng) (2D-LC) 開發(fā)了一個(gè)用于分析復(fù)雜中藥成分的全二維液相方法，在較短的分析時(shí)間內(nèi)大幅提高了方法的峰容量，為復(fù)雜樣品體系的分析提供了新的解決方案和思路。此方法使用安捷倫 1290 Infinity 2D-LC 系統(tǒng)及相應(yīng)軟件功能進(jìn)行開發(fā)和編輯，方法使用簡便，結(jié)合安捷倫 Zorbax 及 Poroshell 系列色譜柱，分析快速，結(jié)果重現(xiàn)，能夠大幅提高中藥等復(fù)雜樣品的分離效率，可以進(jìn)行更加快速準(zhǔn)確的定性鑒別分析。
前言中藥化學(xué)成分分析是中藥藥效物質(zhì)闡明及質(zhì)量控制的關(guān)鍵問題之一，液相色譜分析(HPLC) 是進(jìn)行此類定性定量工作的主要手段。由于中藥化學(xué)成分的復(fù)雜性，中藥成分分析一直存在著分離難度大、分析時(shí)間長等問題，近十年來發(fā)展起來的超高效液相色譜(UHPLC) 以及相應(yīng)的液質(zhì)聯(lián)用技術(shù)極大提升了對(duì)此類復(fù)雜樣品的分離能力及速度。但是隨著此類研究的不斷深入，對(duì)于中藥復(fù)方體系的綜合研究，相關(guān)的代謝療效研究等都對(duì)儀器分析方法的分離效率提出了更高的要求，即使是 UHPLC 方法也難以在較短時(shí)間內(nèi)提供分離此類復(fù)雜樣品的足夠峰容量。
目前，在使用一根色譜柱的前提下增加峰容量的主要兩個(gè)手段有兩種：增加色譜柱長度、降低色譜柱填料粒徑，這兩種手段對(duì)峰容量的提升比較有限，而且都會(huì)顯著增加方法運(yùn)行時(shí)產(chǎn)生的壓力，通過增加柱長的方法還會(huì)增加分析時(shí)間，對(duì)整體分析的效率提升不大。隨著儀器技術(shù)的發(fā)展，全二維液相色譜 (Comprehensive2D-LC) 技術(shù)成為了在短時(shí)間內(nèi)獲得*峰容量的手段，為這類復(fù)雜樣品的分析提供了更高效的解決方案。本文使用了安捷倫全新的 1290 Infinity 二維液相 (2D-LC) 系統(tǒng)成功的對(duì)一個(gè)中藥樣品進(jìn)行了全二維液相色譜分析，該中藥是一個(gè)由三味藥材組成的復(fù)方，經(jīng)水解提取后制成中藥注射液，成分組成復(fù)雜，即使使用較長的 UHPLC 色譜柱進(jìn)行長時(shí)間分析也難以將樣品中的組分進(jìn)行良好分離，在本文開發(fā)的全二維方法中，利用了不同固定相及流動(dòng)相選擇性的差異，在短時(shí)間內(nèi)極大提高了分析方法的峰容量，獲得了更多的樣品信息，此方法分析迅速，重現(xiàn)性良好，為復(fù)雜中藥樣品的分析提供了新的思路和解決方案。
實(shí)驗(yàn)儀器及試劑：儀器：安捷倫 1290 2DLC 系統(tǒng)，具體配置如下安捷倫 1260 Infinity 二元泵（第一維）安捷倫 1290 Infinity 二元泵（第二維）安捷倫 1290 Infinity 自動(dòng)進(jìn)樣器安捷倫 1290 Infinity 柱溫箱安捷倫 1290 Infinity 二極管陣列檢測器（兩臺(tái)）安捷倫 1290 Infinity Flex Cube 多功能模塊安捷倫 1200 Infinity 雙 2 位/4 通閥安捷倫 6224 飛行時(shí)間質(zhì)譜安捷倫 ChemStation 軟件（配置 2DLC 功能插件）安捷倫 MassHunter 軟件LC×LC 二維色譜數(shù)據(jù)處理軟件（HRMS 版，GCimage Inc.）試劑：實(shí)驗(yàn)用超純水由 Milli-Q（Millipore Inc.）純水機(jī)制備；甲醇，乙腈均為 HPLC 級(jí)，采購于迪馬公司；乙酸銨，乙酸，甲酸均為 HPLC級(jí)，采購于百靈威公司。
實(shí)驗(yàn)結(jié)果圖 2 是使用上述方法對(duì)樣品進(jìn)行 2D-LC 分析并使用 LC×LC（HRMS 版本 GCimage）軟件得到的等高散點(diǎn)數(shù)據(jù)圖（由 DAD 檢測器 254 nm 數(shù)據(jù)處理得到），圖中每個(gè)數(shù)據(jù)點(diǎn)代表一個(gè)二維分析得到的色譜峰，該點(diǎn)的橫縱坐標(biāo)分別代表其在第一維和第二維分析上的保留時(shí)間，第一維為標(biāo)準(zhǔn)分析方法，橫坐標(biāo)時(shí)間單位為分鐘 (min)，第二維為超快速梯度分析，縱坐標(biāo)時(shí)間單位為秒 (s)。從圖中可以看出數(shù)據(jù)點(diǎn)隨機(jī)分散于圖中較大的扇形區(qū)域內(nèi)，證明兩維梯度條件均能讓樣品在各自維度上得到盡可能好的分離，具有較好的正交性。對(duì)相同樣品進(jìn)行了 5 次重復(fù)分析以考察方法的重現(xiàn)性，以樣品中強(qiáng)度較高的 9 個(gè)峰（圖 3）為考察指標(biāo)分別對(duì)第一維和第二維保留時(shí)間（基于 DAD 數(shù)據(jù)結(jié)果）進(jìn)行了計(jì)算，結(jié)果良好（表 3），證明此方法可以用于鑒別不同批次或工藝產(chǎn)品間組份組成的差異。
