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上海斯邁歐分析儀器有限公司
主營(yíng)產(chǎn)品： 氣相色譜、液相色譜、氣質(zhì)聯(lián)用儀、液質(zhì)聯(lián)用儀、原子吸收光譜儀、紫外分光光度計(jì) |
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人參皂苷的 UHPLC 新方法的開發(fā)
2022-5-11 閱讀(210)
摘要目的：使用帶有自動(dòng)方法開發(fā)/色譜柱篩選功能的超高效液相色譜 (UHPLC) 系統(tǒng)對(duì)于人參皂苷類成分的適宜分離條件進(jìn)行快速篩選及探索，并在此基礎(chǔ)上優(yōu)化得到快速高效重現(xiàn)性良好的定性定量分析方法。方法：使用自動(dòng)方法開發(fā)系統(tǒng)對(duì)分離條件進(jìn)行篩選和優(yōu)化后，得到兩種基于不同選擇性條件的最終方法，方法 1，色譜柱：Agilent Zorbax Bonus RP(3.0 x 50mm，1.8 µm)，柱溫25 °C，流動(dòng)相為超純水(A)-乙腈(B)，梯度分析，流速1.0mL/min，檢測(cè)波長(zhǎng) 203 nm；方法 2，色譜柱：Agilent Zorbax SB-C18（3.0 x 150 mm，1.8 µm），柱溫 50 °C，流動(dòng)相為超純水 (A)-乙腈 (B)，梯度分析，流速 0.6 mL/min，檢測(cè)波長(zhǎng) 203 nm。結(jié)果：使用上述兩個(gè)方法對(duì)標(biāo)準(zhǔn)品和樣品進(jìn)行了分析，所需分析時(shí)間均小于 10 分鐘，重現(xiàn)性良好，保留時(shí)間 RSD < 0.2%，峰面積 RSD < 1.0%，樣品中的干擾成分與被測(cè)成分均可以得到良好分離。結(jié)論：兩種方法分析快速切分離度良好，能夠充分發(fā)揮 UHPLC 的分離能力，適合于含有人參皂苷類成分的藥材及制劑的分析。Agilent 的方法篩選軟件可以快速、無人照管地選擇最佳的色譜柱、色譜條件；使方法開發(fā)的步驟更趨系統(tǒng)化，更為合理。
前言人參皂苷 (Ginsenoside) 是一種固醇類化合物，三萜皂苷。主要存在于人參屬藥材中。人參皂苷被視為是此類藥材中的活性成分，具有增加白細(xì)胞數(shù)量、提高人體免疫力、促進(jìn)物質(zhì)代謝、抗疲勞、抗衰老等作用[1]，使用液相色譜方法分析此類成分是控制人參、三七等藥材或含此類活性成分藥品的重要手段，但是相關(guān)樣品中的人參皂苷一般需要很長(zhǎng)的分析時(shí)間，例如：中國(guó)藥典的方法需要大概 90 至 120 分鐘時(shí)間[2]。UHPLC 技術(shù)的出現(xiàn)可以使液相色譜分析時(shí)間大為縮短，在不損失分離度的情況下大幅提高分析速度，目前已經(jīng)廣泛應(yīng)用于中藥分析領(lǐng)域。在分析方法的開發(fā)過程中，通過改變色譜柱的種類，柱溫等條件可以改變分離選擇性，從而對(duì)較難分離的化合物進(jìn)行更好的分析，在人參皂苷的分析中，Re 及 Rg1 是一對(duì)比較難分離的成分，通常需要比較長(zhǎng)時(shí)間（大概 20 分鐘[3]）的等度或緩梯度先把這兩個(gè)化合物分開，但是這會(huì)嚴(yán)重影響分析速度，延長(zhǎng)分析時(shí)間。在這篇文章中，我們使用了基于 Agilent 公司的 1260 或 1290 超高效液相色譜系統(tǒng)的自動(dòng)方法開發(fā)系統(tǒng)及軟件[3]對(duì)色譜柱和其他分析條件進(jìn)行了自動(dòng)篩選，并從中選出適合人參皂苷分析的色譜柱及相應(yīng)分析條件，并在此基礎(chǔ)上進(jìn)行改進(jìn)和優(yōu)化，最終得到了兩個(gè)基于不同選擇性特性的高效快速的分析方法，可分別用于不同的分析目的。通過這個(gè)研究，我們找到了人參皂苷在不同色譜柱上的色譜行為差異；同時(shí)也為類似的方法開發(fā)工作推薦一個(gè)有用的工具。
儀器試劑及色譜條件儀器和試劑Agilent 1290 Infinity 自動(dòng)方法開發(fā)系統(tǒng)，包括：1290 色譜泵、自動(dòng)進(jìn)樣器、兩個(gè)柱溫箱（均配置 8 位 9 通閥）組成的柱溫箱簇、二極 管 陣 列 檢 測(cè) 器 ； ChemStation 色 譜 工 作 站 及 AgilentChemStation Method Scouting Wizard 軟件。方法開發(fā)系統(tǒng)及方法篩選軟件是儀器根據(jù)不同需求增加不同切換閥、柱溫箱構(gòu)成。利用方法篩選軟件對(duì)多根色譜柱（最多 8 根）及多個(gè)色譜條件進(jìn)行排列組合，在無人照管的情況下自動(dòng)完成分析任務(wù)。方法篩選軟件能根據(jù)譜圖中色譜峰數(shù)量、分離度及保留時(shí)間等方法開發(fā)所關(guān)注的參數(shù)生成報(bào)告。Agilent 1260 Infinity 液相色譜系統(tǒng)，配備脫氣機(jī)，四元泵，自動(dòng)進(jìn)樣器，柱溫箱，二極管陣列檢測(cè)器。Agilent 1220 Infinity 整體式液相色譜，配備脫氣機(jī)，二元泵，自動(dòng)進(jìn)樣器，柱溫箱，二極管陣列檢測(cè)器。色譜柱：Agilent Zorbax Bonus RP (3.0 x 50 mm，1.8 µm)，AgilentZorbax SB-C18（3.0 x 150 mm，1.8 µm）。以上設(shè)備，耗材及軟件均由 Agilent Technologies, Inc.（美國(guó)）生產(chǎn)制造。實(shí)驗(yàn)所用的對(duì)照品均購(gòu)買自中國(guó)食品藥品檢定研究院；乙腈為HPLC 級(jí)試劑 (Sigma-Aldrich)，實(shí)驗(yàn)用水由 Milli-Q 純水機(jī)（Merck-Millipore，德國(guó)）制備；所有樣品購(gòu)自本地藥店。
結(jié)果及討論方法 1 的分析結(jié)果根據(jù)上述條件（方法 1）對(duì)含有三七成分的中藥成分進(jìn)行了分離，五種主要人參皂苷類成分分離良好，并且不受其他干擾組分的影響
