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上海斯邁歐分析儀器有限公司
主營產(chǎn)品： 氣相色譜、液相色譜、氣質(zhì)聯(lián)用儀、液質(zhì)聯(lián)用儀、原子吸收光譜儀、紫外分光光度計 |
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了解牛肝中獸藥多殘留的LC/MS/MS分析
2022-2-10 閱讀(619)
摘要：Agilent Bond Elut QuEChERS 增 強 型 脂 質(zhì) 去 除 產(chǎn) 品 (Agilent Bond Elut QuEChERS EMR-Lipid) 是新一代樣品前處理產(chǎn)品，適用于便捷的分散固相萃取 (dSPE)。這種材料對 于共萃取基質(zhì)具有較高選擇性，尤其適用于脂肪樣品（脂肪含量 > 5%），而不會對分析 物回收率產(chǎn)生不利影響。本研究介紹應用這款新型產(chǎn)品對牛肝中的 30 種代表性獸藥進 行的分析。分析流程包括利用酸化乙腈實現(xiàn)快速高效的蛋白質(zhì)沉淀萃取，然后使用 EMR-Lipid 增強型脂質(zhì)去除凈化管和 EMR-Lipid Polish 反萃管進行進一步凈化。研究中 通過共萃取物重量與柱后注射實驗來測定由 EMR-Lipid 方案去除的基質(zhì)量。與其他基質(zhì) 凈化產(chǎn)品相比，EMR-Lipid 增強型脂質(zhì)去除凈化管能夠提供更有效的基質(zhì)去除和更出色 的分析物回收率。EMR-Lipid 優(yōu)化方法能夠為各種濃度下的全部 30 種獸藥提供潔凈度以及優(yōu)異的準確度和精密度，實現(xiàn)快速、穩(wěn)定而有效的高脂肪含量樣品分析。
前言 獸藥廣泛用于食品生產(chǎn)行業(yè)的動物中，以預防動物疾病或作為生 長促進劑。這些藥物將在動物組織中發(fā)生富集，使用不當更是會 導致藥物殘留在食用組織中不斷積累，對人類健康構成威脅。隨 著人們對食品安全的日益關注，幾乎每個國家都出臺了限制食品 動物產(chǎn)品中所使用藥物的法規(guī) [1-4]。 肌肉、肝臟和雞蛋等動物源食品通常具有復雜的化學成分，因此， 采用包括常規(guī)萃取和高效凈化的高效樣品前處理方法至關重要。 已有的樣品前處理方法包括傳統(tǒng)的溶劑萃取、固相萃取 (SPE) 或 多項技術的組合。這些方法通常費力費時，僅適用于有限的化合 物類別，并且需要額外進行方法開發(fā)。 多類別、多殘留方法在監(jiān)管性監(jiān)測項目中越來越受青睞，因為它 們可以擴大分析范圍并提高實驗室效率。過去幾年來接受監(jiān)測的 獸藥數(shù)量越來越多，如今已報道了 100 多種獸藥 [5-8]。樣品前處 理通常包括采用乙腈:水混合物進行萃取，然后利用 C18 和/或其 他凈化技術進行凈化。C18 等吸附劑去除共萃脂質(zhì)的能力有限，可 能在稀釋或復溶過程中產(chǎn)生沉淀。沉淀生成后需要在 LC/MS/MS進樣之前對樣品進行過濾，這可能造成分析物損失?？梢栽诜稚?固相萃取 (dSPE) 過程中加入己烷來去除共萃取液中的脂質(zhì)，但這 種方法費時費力且無選擇性，并且會去除疏水性分析物。與 C18 相比，使用氧化鋯吸附劑進行凈化能夠改善基質(zhì)凈化效果，但也 會導致更多的分析物損失，對于四環(huán)素和大環(huán)內(nèi)酯等 含羧酸和羥基的化合物而言尤其如此 [7,8]。
Agilent Bond Elut QuEChERS EMR-Lipid 增強型脂質(zhì)去除產(chǎn)品是 一種新型吸附劑材料，能夠選擇性去除樣品中的主要脂類而不會 使分析物損失。去除復雜基質(zhì)中的脂質(zhì)干擾物對于 QuEChERS 和 蛋白質(zhì)沉淀等技術而言尤其重要。由于這些簡單的樣品前處理方 法無法充分去除脂質(zhì)，因此脂質(zhì)共萃取物將與目標分析物一起保 留到最終樣品萃取物中。這會導致色譜峰異常、數(shù)據(jù)精密度和準 確度下降以及維護問題增加。在本研究中，我們考察了一種用于 分析牛肝中 30 種棘手的代表性獸藥的新型樣品前處理方法，該方 法采用簡單的蛋白質(zhì)沉淀萃取后用 EMR-Lipid 進行凈化。所選的 獸藥代表了 17 種不同的類別，包括親水性、疏水性、酸性、中性 和堿性藥物。表 1 顯示這些獸藥的化學和法規(guī)信息。
實驗部分： 所 有 試 劑 和 溶 劑 均 為 HPLC 或 分 析 純 級 。 乙 腈 (ACN) 購 自 Honeywell（美國密歇根州馬斯基根）。二甲基亞砜 (DMSO)、獸 藥標準品和內(nèi)標購自西格瑪奧德里奇公司（美國密蘇里州圣路易 斯）。試劑級甲酸 (FA) 購自安捷倫公司（部件號 G2453-86060）。 乙酸銨 (NH4OAc) 購自 Fisher Chemicals（美國新澤西州費爾 勞恩）。
溶液與標準品 將 5 mL 甲酸加入 95 mL ACN 中新鮮制得甲酸 (5%) ACN 溶液。 將 19.27 g NH4OAc 溶解于 250 mL Milli-Q 水中制得乙酸銨儲備 液 (1 M)。該溶液保存于 4 °C。將 5 mL 1 M 乙酸銨儲備液加入 1 L Milli-Q 水中，制得 5 mM 乙酸銨水溶液。 標準品和內(nèi)標 (IS) 儲備液采用 DMSO 進行配制， DMSO 儲備液濃度分別為 1.0 mg/mL 和 0.25 mg/mL 外，其他儲備液濃度均為 2.0 mg/mL。儲備液采用水進行配制，濃度為 2.0 mg/mL。儲備液用塑料瓶配制以外，其他所有儲備液均在棕色玻璃瓶中進 行配制。所有儲備液均保存于 -20 °C 下。根據(jù)儀器響應不同，將 30 種化合物分為兩組 G1 和 G2。在 1/1 的 ACN/水中配制得到 25/5 µg/mL 的混合 (G1/G2) 標準工作溶液。氟尼辛-d3 內(nèi)標工作 溶液 (25 µg/mL) 也采用 1/1 的 ACN/水進行配制。
設備 樣品前處理所用的設備和材料包括： • Geno/Grinder（SPEX，美國新澤西州墨圖根） • Centra CL3R 離心機（Thermo IEC，美國馬薩諸塞州） • Eppendorf 微型離心機（Brinkmann Instruments，美國紐 約州韋斯特伯里） • 渦旋儀和多管渦旋儀（VWR，美國賓夕法尼亞州拉德諾） • 瓶口分液器（VWR， 美國新澤西州南普蘭菲爾德） • Eppendorf 移液管和重復用吸管• Agilent Bond Elut EMR-Lipid 增強型脂質(zhì)去除凈化管 （部件號 5982-1010） Agilent Bond Elut EMR-Lipid Polish 反萃管 （部件號 5982-0101）
儀器 實驗采用 Agilent 1290 Infinity LC 進行分析，其中包括： • Agilent 1290 Infinity 四元泵 (G4204A) • 配備 Agilent 1290 Infinity 自動進樣器溫控器 (G1330B) 的 Agilent 1290 Infinity 高性能自動進樣器 (G4226A)，以及 Agilent 1290 Infinity 柱溫箱 (G1316C) 該 UHPLC 系統(tǒng)聯(lián)用配備安捷倫噴射流電噴霧離子源并采用 iFunnel 技術的 Agilent 6490 三重四極桿液質(zhì)聯(lián)用系統(tǒng)。采用 Agilent MassHunter 工作站軟件進行數(shù)據(jù)采集和分析。
