ELISA試劑盒，是通過酶聯(lián)免疫吸附反應(yīng)進(jìn)行實驗來檢測特定物質(zhì)的試劑盒,試劑盒中會有不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)樣品，在酶標(biāo)條中通過固相的抗原或抗體，酶標(biāo)記的抗原或抗體，酶作用的底物反應(yīng)可形成標(biāo)準(zhǔn)曲線,從而進(jìn)行試驗樣品的測定。

在ELISA中，進(jìn)行各項實驗條件的選擇是很重要的，其中包括以下幾點：

1、固相載體的選擇。

許多物質(zhì)可作為固相載體，如聚氯乙烯、聚苯乙烯、聚丙酰胺和纖維素等。其形式可以是凹孔平板、試管、珠粒等。目前常用的是40孔聚苯乙烯凹孔板。不管何種載體，在使用前均可進(jìn)行篩選:用等量抗原包被，在同一實驗條件下進(jìn)行反應(yīng)，觀察其顯色反應(yīng)是否均一，據(jù)此判明其吸附性能是否良好。

2、包被抗體(或抗原)的選擇。

將抗體(或抗原)吸附在固相載體表面時，要求純度要好，吸附時-般要求pH在9.0-9.6之間。吸附溫度、時間及其蛋白量也有一定的影響，一般多采用4℃18-24h。蛋白質(zhì)包被的適濃度需進(jìn)行滴定:即用不同的蛋白質(zhì)濃度(0.lμg/mL、1.0μg/mL和10μg/mL等)進(jìn)行包被后，在其他實驗條件相同時，觀察陽性標(biāo)本的OD值。選擇OD值大而蛋白量少的濃度。對于多數(shù)蛋白質(zhì)來說，通常為1-10μg/ mL。

3、酶標(biāo)記抗體工作濃度的選擇。

首先用直接ELISA法進(jìn)行初步效價的滴定(見酶標(biāo)記抗體部分)。然后再固定其他條件或采取“方陣法"(包被物、待檢樣品的參考品及酶標(biāo)記抗體分別為不同的稀釋度)在正式實驗系統(tǒng)里準(zhǔn)確地滴定其工作濃度。

4、酶的底物及供氫體的選擇。

對供氫體的選擇要求是價廉、安全、有明顯的顯色反應(yīng)，而本身無色。有些供氫體（如OPD等）有潛在的致癌作用，應(yīng)注意防護(hù)，有條件者應(yīng)使用不致癌、靈敏度高的供氫體，如TMB和ABTS是目前較為滿意的供氫體。底物作用一段時間后，應(yīng)加入強(qiáng)酸或強(qiáng)堿以終止反應(yīng)。通常底物作用時間以10-30min為宜。底物使用液必須新鮮配制，尤其是H2O2在臨用前加入。

ELISA試劑盒實驗具備的以下環(huán)境條件：
1. 為推遲光學(xué)部件的老化，應(yīng)避免陽光直射。
2. 操作環(huán)境溫度應(yīng)在15℃至40℃之間，環(huán)境濕度在15%~85%之間。
3. 儀器應(yīng)放置在噪音低于40分貝的環(huán)境下。
4. 操作時電壓應(yīng)堅持穩(wěn)定。
5. 操作環(huán)境空氣清洗，避免水汽、煙塵。
6. 堅持枯燥、潔凈、水平的作業(yè)臺面，以及滿足的操作空間。
7. 儀器應(yīng)放置在無強(qiáng)磁場和煩擾電壓的方位。