細胞衰老是一種不可逆的細胞周期停滯的狀態(tài)，伴隨著細胞形態(tài)、功能和分泌物的改變。下面詳述

細胞衰老檢測方法與步驟：

1、細胞接種前在6孔培養(yǎng)板中預先放置滅菌的細胞片，每孔加入1×10E5個細胞，37℃ 5% CO2條件下培養(yǎng)過夜，使細胞在細胞片上生長。

2、在超凈工作臺中吸棄6孔培養(yǎng)板中的培養(yǎng)液，加入×1 PBS，洗滌細胞1次，隨后加入2%甲醛/0.2%戊二醛固定液，室溫條件下固定3~5分鐘。

3、吸棄2%甲醛/0.2%戊二醛固定液，加入×1 PBS，洗滌細胞3次，每次3分鐘。

4、吸棄×1 PBS，加X-Gal溶液以浸沒細胞片為宜，37℃孵育4~8小時或過夜，用保鮮膜包被6孔培養(yǎng)板以防染液蒸發(fā)。

5、取出細胞爬片，去離子水沖洗2次，再次用固定液固定4分鐘，流水輕輕沖洗。

6、將細胞爬片按此順序脫水、透明∶95%酒精I（2分鐘）→95%酒精Ⅱ（2分鐘）→100%酒精I（2分鐘）→100%酒精I（5分鐘）→二甲苯I（2分鐘）→二甲苯Ⅱ（2分鐘）。

7、中性樹膠封片。

8、在普通光學顯微鏡下觀察衰老細胞形態(tài)。

每張片子鏡下計數(shù)400個細胞，確定X-Gal染色陽性細胞（衰老細胞）在細胞群體中的所占的百分比即衰老細胞率（藍染細胞數(shù)/總計細胞數(shù)×100%）。