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ELISA檢測過程陰性對照(品)簡述

時間:2025/1/13閱讀:71
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陰性對照(品):
1、陰性對照(品)的概念與要求:

所謂陰性對照(品),應(yīng)當(dāng)是本項(xiàng)檢測試驗(yàn)中采用與待撿物(樣品、人用試劑就是人的血清等)具有同源性和同質(zhì)性,又不含有待檢物質(zhì),并能客觀比較和鑒別處理因素(血清免疫學(xué)試驗(yàn)中有特異性抗原與抗體反應(yīng))之間的差異。因此,用動物血清或其制品(如牛血清白蛋白等)代替陰性人血清作為對照品,從理論和實(shí)踐上都是不可取的,弊端甚多,無須細(xì)述。注意:據(jù)我所知,國產(chǎn)ELISA試劑中,有的廠牌是用動物血清制品稀釋配置、或與部分人血清混合配置的;其二,陰性對照讀數(shù),并非是“越低越好"。NCx值接近0.00X水平,這是假象!試想一下,真正采用“陰性人血清"的陰性對照品,NCx值會如此之低嗎?舉個例子,雅培乙肝六項(xiàng)EIA試劑的NCx值,分別為:0.010(HBsAg)、0.027(抗—HBs)、0.035(HBeAg)、1.083(抗—HBe)、1.065(抗—HBc)、0.045(抗HBc-IgM)。生物梅里埃的HIV試劑NCx是0.091。辨別試劑NCx值是否合理的一個很簡單的方法,只要對比大量陰性樣本的實(shí)際讀數(shù)就“一目了然"啦!
一個題外插曲:表明ELISA試劑內(nèi)在質(zhì)量的一個重要統(tǒng)計標(biāo)志,就是要看:陰性樣本的的上限不應(yīng)當(dāng)大于、必須小于C.O.I.=1.00;反之,陽性樣本的的下限不可小于、應(yīng)當(dāng)大于C.O.I.=1.00!早年我用SPSS軟件輸出阿克蘇HIV和國產(chǎn)甲、乙試劑檢測600例左右的健康人體檢血清的三幅直方圖,可以表明陰性樣本的不同分布特征,頗有意思。  
我為什么要如此細(xì)說NCx呢?因?yàn)镹Cx值在Cut off值計算中是相當(dāng)舉足輕重的(詳后)。

2、陰性對照(品)分為兩類
一是代表受檢人血清中并不含有、或方法學(xué)靈敏度未能檢出的待檢物的基準(zhǔn)水平,并且是結(jié)果判斷值(Cut off)計算式中決定“是"(陽性)、或“否"(陰性)的唯 1可變值。陰性對照值高,導(dǎo)致假陰性;反之,導(dǎo)致假陽性。如:HBsAg、HBeAg、抗—HBc等。二是陰性對照設(shè)置,在方法學(xué)上要求加入指示性定量標(biāo)準(zhǔn)品,如中和劑HBeAg,定量HBcAg等,用以檢測抗—HBe、抗—HBc?;蛘撸x取代表平均水平的正常人血清用作陰性對照,如檢測抗—HBc IgM。此類Cut off 值計算時,多數(shù)均包括陰性和陽性對照值2個可變值。


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