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上海西格生物科技有限公司
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HUVEC+GFP人臍靜脈內(nèi)皮細胞永生化+GFP

參  考  價:3000
具體成交價以合同協(xié)議為準
  • 型號

  • 品牌

    其他品牌

  • 廠商性質(zhì)

    生產(chǎn)商

  • 所在地

    上海市

規(guī)格

1×106 3000元 15瓶可售

更新時間:2024-06-07 12:54:22瀏覽次數(shù):135次

聯(lián)系我時,請告知來自 環(huán)保在線
同類優(yōu)質(zhì)產(chǎn)品更多>
貨號 XG-X3372 細胞形態(tài) 內(nèi)皮細胞樣 貼壁生長
用途 僅供科研研究實驗
HUVEC+GFP人臍靜脈內(nèi)皮細胞永生化+GFP公司正在出售的產(chǎn)品:MHCC-97H 細胞專用培養(yǎng)基MHCC97-H/LUC (STR)高轉(zhuǎn)移人肝癌細胞MHCC-97H+luc 細胞專用培養(yǎng)基MHCC-97H+luc人高轉(zhuǎn)移性肝癌細胞熒光酶標記MHCC-97H+luc人高轉(zhuǎn)移性肝癌熒光酶標記細胞專用培養(yǎng)基MHCC97-H高轉(zhuǎn)移人肝癌細胞MHCC-97H人高轉(zhuǎn)移性肝癌細胞MHCC-97H人高轉(zhuǎn)移性肝

HUVEC+GFP人臍靜脈內(nèi)皮細胞永生化+GFP
一、細胞基本屬性

細胞名稱

HUVEC+GFP人臍靜脈內(nèi)皮細胞永生化+GFP

生長特性


種屬來源

商品貨號

XG-X3372

 

細胞介紹

該細胞來源于人靜脈內(nèi)皮,可在半固體培養(yǎng)基中形成克隆,在免疫抑制小鼠中不能形成腫瘤。

該細胞通過慢病毒轉(zhuǎn)染的方式攜帶GFP基因。

細胞特性

1) 來源:人臍帶組織

2) 形態(tài):內(nèi)皮細胞樣 貼壁生長

3) 含量:>1×10?  細胞數(shù)

4) 規(guī)格:T25瓶或者1mL凍存管包裝

5)  用途:僅供科研使用。

運輸和保存

干冰運輸及復(fù)蘇好存活細胞

1)1mL凍存管包裝干冰運輸,收到后-80度冰箱保存過夜后轉(zhuǎn)入液氮或直接復(fù)蘇,若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細胞有污染,請立即與我們聯(lián)系。

2)T25瓶復(fù)蘇的存活細胞常溫發(fā)貨,收到后按照細胞接收后的處理方法操作。

細胞接收后的處理

1)收到細胞后,75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置約2-3h,若發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)瓶破損、有液溢出及細胞有污染,請拍照后及時聯(lián)系我們。

2)請在4或5X顯微鏡下確認細胞狀態(tài),同時給剛收到的細胞拍照(10×,20×)各2-3張以及培養(yǎng)瓶外觀照片一張留存,作為售后時收到時細胞狀態(tài)的依據(jù)。

3)貼壁細胞:細胞在37℃培養(yǎng)箱中放置2-3h,顯微鏡下觀察細胞的生長和貼壁情況,有些貼壁細胞在快遞運送過程中會因振動脫落和脫落后成團的情況。若鏡下觀察細胞的生長密度若在60%以下,可去除培養(yǎng)瓶中灌液培養(yǎng)基(若有未貼壁的細胞需要離心回收,重懸打入到原培養(yǎng)瓶中),加入新配制的培養(yǎng)基6-8mL,放到細胞培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)。若細胞生長密度達70%-80%以上,可以對細胞進行傳代處理。傳代過程中,若因運輸振動脫落的細胞需要離心回收。

4)備注:運輸用的培養(yǎng)基(灌液培養(yǎng)基)不能再用來培養(yǎng)細胞,請換用按照說明書細胞培養(yǎng)條件新配制的培養(yǎng)基來培養(yǎng)細胞。  收到細胞后第一次傳代建議T25培養(yǎng)瓶1:2傳代 。        

一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備

準備內(nèi)皮細胞培養(yǎng)體系

內(nèi)皮細胞培養(yǎng)基礎(chǔ)培養(yǎng)基                     93%

胎牛血清(FBS)                                  5%

內(nèi)皮細胞培養(yǎng)添加劑                             1%

青霉su/鏈霉su,P/S                               1%

1) 培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37攝氏度,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

2) 凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配。

二.細胞處理:

1) 凍存細胞的復(fù)蘇:

將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入到含4-6mL培養(yǎng)基的離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心3-5min,棄去上清液,培養(yǎng)基重懸細胞。然后將細胞懸液加入含6-8ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶(或皿)中37℃培養(yǎng)過夜。第二天顯微鏡下觀察細胞生長情況和細胞密度。

2) 細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養(yǎng)。

對于貼壁細胞傳代可以參考以下方法:

1. 棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。

2. 加入0.25%(w / v)胰dan白酶-0.53 mM EDTA于培養(yǎng)瓶中(T25瓶1-2mL,T75瓶2-3mL),置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘(難消化的細胞可以適當延長消化時間),然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況,若細胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加入3-4ml含10%FBS的培養(yǎng)基來終止消化。

3.輕輕打勻后吸出,在1000RPM條件下離心3-5min,棄去上清液,補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。將細胞懸液按1:2的比例分到新T25瓶中,添加6-8ml按照說明書要求配置的新的培養(yǎng)基以保持細胞的生長活力,后續(xù)傳代根據(jù)實際情況按1:2~1:5的比例進行。

3)細胞凍存: 收到細胞后建議在培養(yǎng)前3代時凍存一批細胞種子以備后續(xù)實驗使用。

下面T25瓶為例;

1. 細胞凍存時按照細胞傳代的過程收集消化好的細胞到離心管中,可使用血球計數(shù)板計數(shù),來決定細胞的凍存密度。一般細胞的推薦凍存密度為1×10?~1×10?個活細胞/ml.

2. 1000rpm離心3-5min,去掉上清。用配制好的細胞凍存液重懸細胞 ,按每1ml凍存液含1×10?~1×10?個活細胞/ml分配到一個凍存管中將細胞分配到凍存管中,標注好名稱、代數(shù)、日期等信息。

3. 將要凍存的細胞置于程序降溫盒中,-80度冰箱中過夜,之后轉(zhuǎn)入液氮容器中儲存。同時記錄好凍存管在液氮容器中的位置以便后續(xù)查閱和使用。

二、細胞培養(yǎng)操作

1) 復(fù)蘇細胞:以下細胞培養(yǎng)凍存處理僅供參考,具體操作步驟以隨貨產(chǎn)品說明書為主

將含有1 mL細胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍,加4 mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000 rpm條件下離心3 min,棄去上清液,加1-2 mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入含適量培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜(或?qū)⒓毎麘乙杭尤? cm皿中,加入約4 mL培養(yǎng)基,培養(yǎng)過夜)。第三天換液并檢查細胞密度。

2) 細胞傳代:如果細胞密度達 80%-90%,即可進行傳代培養(yǎng)。

a、細胞生長至覆蓋培養(yǎng)瓶的80%面積時,棄25cm2培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)液,用PBS清洗細胞一次;

b、添加0.25%消化液約1ml至培養(yǎng)瓶中,倒置顯微鏡下觀察,待細胞回縮變圓后加入培養(yǎng)液終止消化,再輕輕吹打細胞使之脫落,然后將懸液轉(zhuǎn)移至15ml離心管中,1000rpm離心5min;

c、棄上清,沉淀細胞用12ml培養(yǎng)基重懸,然后按1:2比例進行分瓶傳代,最后放入37℃,5%CO2細胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng);

d、待細胞貼壁后,觀察培養(yǎng)結(jié)果,之后進行換液培養(yǎng)或傳代。

3) 細胞凍存:待細胞生長狀態(tài)良好時,可進行細胞凍存。下面 T25 瓶為例;

a、細胞生長至覆蓋培養(yǎng)瓶的80%面積時,棄25cm2培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)液,用PBS清洗細胞一次;

b、添加0.25%消化液約1ml至培養(yǎng)瓶中,倒置顯微鏡下觀察,待細胞回縮變圓后加入培養(yǎng)液終止消化,輕輕吹打細胞使之脫落,然后將懸液轉(zhuǎn)移至15ml離心管中,1000rpm離心5min;

c、用適量的凍存液(FBS:DMSO=9 :1)重懸細胞,并放置于凍存管中;

d、先將細胞凍存管放置于-20℃ 1.5h,然后將其移入-80℃過夜,24h后轉(zhuǎn)入液氮中進行長期保存。使用程序降溫盒可直接放入-80℃。

HUVEC+GFP人臍靜脈內(nèi)皮細胞永生化+GFP三、培養(yǎng)注意事項

1. 收到細胞后首先觀察細胞瓶是否完好,培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象,若有上述現(xiàn)象 發(fā)生請及時和我們聯(lián)系。

2. 仔細閱讀細胞說明書,了解細胞相關(guān)信息,如細胞形態(tài)、所用培養(yǎng)基、血清比例、所需 細胞因子等,確保細胞培養(yǎng)條件一致,若由于培養(yǎng)條件不一致而導致細胞出現(xiàn)問題,責任由 客戶自行承擔。

3. 用 75%酒精擦拭細胞瓶表面,顯微鏡下觀察細胞狀態(tài)。因運輸問題,部分細胞由于溫度 變化及劇烈碰破碎形成碎片,是正?,F(xiàn)象。觀察好細胞狀態(tài)后,75%酒精消毒瓶壁將 T25 瓶置于 37℃培養(yǎng)箱放置 2-4h。

4. 貼壁細胞可以消化,懸浮細胞直接混勻收集細胞,900 rpm-1000 rpm 離心 3 min,棄上 清。加 5 mL PBS 重懸細胞,再 900 rpm-1000 rpm 離心 3 min,用新鮮的培養(yǎng)基重懸 細胞,并接種到新的培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿中,置于培養(yǎng)箱中進行培養(yǎng)。

5. 請客戶用相同條件的培養(yǎng)基用于細胞培養(yǎng)。

6. 建議客戶收到細胞后前 3 天各拍幾張細胞照片,記錄細胞狀態(tài),便于和我司技術(shù)部溝通 交流。由于運輸?shù)脑?,個別敏感細胞會出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況,請及時和我們聯(lián)系,告知細胞 的具體情況,以便我們的技術(shù)人員跟蹤回訪直至問題解決。

7. 該細胞僅供科研使用。

8. 備注:運輸用的培養(yǎng)基 (灌液培養(yǎng)基) 不能再用來培養(yǎng)細胞,請換用按照說明書細胞培 養(yǎng)條件新配制的培養(yǎng)基來培養(yǎng)細胞。  收到細胞后次傳代建議 1:2 傳代 。

9. 注意:  1:2 傳代就是 1 個 T25 瓶傳 2 個 T25 瓶或者 2 個 6cm 皿。不是 1 個 T25 瓶傳 2 個10cm 皿。

公司正在出售的產(chǎn)品:

人角膜基質(zhì)細胞

人大皰性類天皰瘡抗體(BP)ELISA試劑盒

人直腸平滑肌細胞

人清道夫受體類B成員1(SCARB1)檢測試劑盒elisa

人腸系膜動脈平滑肌細胞

大鼠血管生長su(ANG)試劑盒 ELISA

人結(jié)腸癌細胞

人分枝桿菌PCR試劑盒

人膽囊微血管內(nèi)皮細胞

馬皰疹病毒2型PCR試劑盒

人膽囊成纖維細胞

鄰單胞菌通用PCR檢測試劑盒

人膽囊平滑肌細胞

產(chǎn)氣克雷伯氏菌PCR檢測試劑盒

人腸微血管內(nèi)皮細胞

伽氏疏螺旋體(伽氏包柔螺旋體)PCR試劑盒

人食管癌相關(guān)成纖維細胞

同羊皰疹病毒2型) 羊關(guān)聯(lián)惡性卡他熱病毒PCR試劑盒

人食管纖維瘤細胞

細小病毒B19 PCR檢測試劑盒

人肝癌細胞

弗朗西斯菌通用PCR檢測試劑盒

人肝癌相關(guān)成纖維細胞

弗朗西斯菌通用PCR試劑盒

人肝纖維母細胞

悉尼馬爾太蟲PCR檢測試劑盒

人胃癌相關(guān)成纖維細胞

HUVEC+GFP人臍靜脈內(nèi)皮細胞永生化+GFP豬生殖與呼吸綜合癥病毒通用PCR檢測試劑盒

人上皮細胞

膜內(nèi)氨酰氨基肽meiELISA試劑盒

 


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