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當(dāng)前位置:上海西格生物科技有限公司>>細(xì)胞系>>人細(xì)胞系>> A549+luc 人肺癌細(xì)胞熒光素酶標(biāo)記

A549+luc 人肺癌細(xì)胞熒光素酶標(biāo)記

參  考  價:3000
具體成交價以合同協(xié)議為準(zhǔn)
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    其他品牌

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    生產(chǎn)商

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    上海市

規(guī)格

1×106 3000元 15瓶可售

更新時間:2024-06-07 12:14:18瀏覽次數(shù):139次

聯(lián)系我時,請告知來自 環(huán)保在線
貨號 XG-X3232 用途 僅供科研研究實驗
A549+luc 人肺癌細(xì)胞熒光素酶標(biāo)記公司正在出售的產(chǎn)品:MDA-MB-231+GFP人乳腺癌X細(xì)胞+GFPMDA-MB-231+luc 細(xì)胞專用培養(yǎng)基MDA-MB-231+LUC人乳腺癌細(xì)胞熒光酶標(biāo)記MDA-MB-231+LUC人乳腺癌熒光酶標(biāo)記細(xì)胞專用培養(yǎng)基MDA-MB-231-EGFP-LUC人三陰性乳腺癌綠色熒光蛋白-熒光酶標(biāo)記MDA-MB-231人乳腺癌細(xì)胞MDA-MB-231人乳腺癌

A549+luc 人肺癌細(xì)胞熒光素酶標(biāo)記
一、細(xì)胞基本屬性

細(xì)胞名稱

A549+luc 人肺癌細(xì)胞熒光素酶標(biāo)記

生長特性


種屬來源

商品貨號

XG-X3232

 

細(xì)胞介紹

該細(xì)胞系由D.J.Griad通過肺癌組織移植培養(yǎng)建系,患者為58歲白人男性。A549能通過胞苷二磷酸膽途徑合成含有高含量不飽和脂肪酸的卵磷。

該細(xì)胞通過慢病毒轉(zhuǎn)染的方式攜帶Luc基因。

細(xì)胞特性

1) 來源:肺癌            

2) 形態(tài):上皮細(xì)胞樣,多角形;貼壁生長

3) 含量:>1×10?  細(xì)胞數(shù)        

4) 規(guī)格:T25瓶或者1mL凍存管包裝  

5) 用途:僅供科研使用

細(xì)胞誘導(dǎo)構(gòu)建實驗步驟:

1.  轉(zhuǎn)染  (1)將A549細(xì)胞接種6孔板,每孔細(xì)胞數(shù)約為1×10? 個,

2)第二天,細(xì)胞融合度為50%左右時用于病毒轉(zhuǎn)染,

3)加入1mL培養(yǎng)基,再加20 μL Luciferase過表達(dá)慢病毒,

4)混勻后繼續(xù)培養(yǎng),

5)12h后觀察細(xì)胞狀態(tài),并更換為新鮮培養(yǎng)基,

6)當(dāng)細(xì)胞長滿板底后,傳代至T25培養(yǎng)瓶中。

2.  篩選:用嘌呤霉素4ug/mL抗性篩選6周,穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞記作A549+Luc。

3. 體外熒光素酶活性檢測

A549細(xì)胞消化,離心,棄上清,加20μL細(xì)胞裂解液,再加100μL熒光素酶底物,檢測發(fā)光情況。

結(jié)果表明慢病毒感染A549細(xì)胞能穩(wěn)定表達(dá)熒光素酶。

運輸和保存

干冰運輸及復(fù)蘇好存活細(xì)胞

1)1mL凍存管包裝干冰運輸,收到后-80度冰箱保存過夜后轉(zhuǎn)入液氮或直接復(fù)蘇,若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細(xì)胞有污染,請立即與我們聯(lián)系。

2)T25瓶復(fù)蘇的存活細(xì)胞常溫發(fā)貨,收到后按照細(xì)胞接收后的處理方法操作。

細(xì)胞接收后的處理

1)收到細(xì)胞后,75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置約2-3h,若發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)瓶破損、有液溢出及細(xì)胞有污染,請拍照后及時聯(lián)系我們。

2)請在4或5X顯微鏡下確認(rèn)細(xì)胞狀態(tài),同時給剛收到的細(xì)胞拍照(10×,20×)各2-3張以及培養(yǎng)瓶外觀照片一張留存,作為售后時收到時細(xì)胞狀態(tài)的依據(jù)。

3)貼壁細(xì)胞:細(xì)胞在37℃培養(yǎng)箱中放置2-3h,顯微鏡下觀察細(xì)胞的生長和貼壁情況,有些貼壁細(xì)胞在快遞運送過程中會因振動脫落和脫落后成團(tuán)的情況。若鏡下觀察細(xì)胞的生長密度若在60%以下,可去除培養(yǎng)瓶中灌液培養(yǎng)基(若有未貼壁的細(xì)胞需要離心回收,重懸打入到原培養(yǎng)瓶中),加入新配制的培養(yǎng)基6-8mL,放到細(xì)胞培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)。若細(xì)胞生長密度達(dá)70%-80%以上,可以對細(xì)胞進(jìn)行傳代處理。傳代過程中,若因運輸振動脫落的細(xì)胞需要離心回收。

4)備注:運輸用的培養(yǎng)基(灌液培養(yǎng)基)不能再用來培養(yǎng)細(xì)胞,請換用按照說明書細(xì)胞培養(yǎng)條件新配制的培養(yǎng)基來培養(yǎng)細(xì)胞。  收到細(xì)胞后第一次傳代建議T25培養(yǎng)瓶1:2傳代 。                       

一.細(xì)胞培養(yǎng)準(zhǔn)備培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:

1) 準(zhǔn)備F-12K培養(yǎng)基;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%;雙抗,1%。

2) 培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

3) 凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配。

二. 細(xì)胞處理:

1) 凍存細(xì)胞的復(fù)蘇:

將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入到含4-6mL培養(yǎng)基的離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心3-5min,棄去上清液,培養(yǎng)基重懸細(xì)胞。然后將細(xì)胞懸液加入含6-8ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶(或皿)中37℃培養(yǎng)過夜。第二天顯微鏡下觀察細(xì)胞生長情況和細(xì)胞密度。

2) 細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

對于貼壁細(xì)胞傳代可以參考以下方法:

1. 棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次。

2. 加入0.25%(w / v)胰dan白酶-0.53 mM EDTA于培養(yǎng)瓶中(T25瓶1-2mL,T75瓶2-3mL),置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘(難消化的細(xì)胞可以適當(dāng)延長消化時間),然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況,若細(xì)胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加入3-4ml含10%FBS的培養(yǎng)基來終止消化。

3. 輕輕打勻后吸出,在1000RPM條件下離心3-5min,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。將細(xì)胞懸液按1:2的比例分到新T25瓶中,添加6-8ml按照說明書要求配置的新的培養(yǎng)基以保持細(xì)胞的生長活力,后續(xù)傳代根據(jù)實際情況按1:2~1:5的比例進(jìn)行。

3)細(xì)胞凍存: 收到細(xì)胞后建議在培養(yǎng)前3代時凍存一批細(xì)胞種子以備后續(xù)實驗使用。

二、細(xì)胞培養(yǎng)操作

1) 復(fù)蘇細(xì)胞:以下細(xì)胞培養(yǎng)凍存處理僅供參考,具體操作步驟以隨貨產(chǎn)品說明書為主

將含有1 mL細(xì)胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍,加4 mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000 rpm條件下離心3 min,棄去上清液,加1-2 mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入含適量培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜(或?qū)⒓?xì)胞懸液加入6 cm皿中,加入約4 mL培養(yǎng)基,培養(yǎng)過夜)。第三天換液并檢查細(xì)胞密度。

2) 細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá) 80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

a、細(xì)胞生長至覆蓋培養(yǎng)瓶的80%面積時,棄25cm2培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)液,用PBS清洗細(xì)胞一次;

b、添加0.25%消化液約1ml至培養(yǎng)瓶中,倒置顯微鏡下觀察,待細(xì)胞回縮變圓后加入培養(yǎng)液終止消化,再輕輕吹打細(xì)胞使之脫落,然后將懸液轉(zhuǎn)移至15ml離心管中,1000rpm離心5min;

c、棄上清,沉淀細(xì)胞用12ml培養(yǎng)基重懸,然后按1:2比例進(jìn)行分瓶傳代,最后放入37℃,5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng);

d、待細(xì)胞貼壁后,觀察培養(yǎng)結(jié)果,之后進(jìn)行換液培養(yǎng)或傳代。

3) 細(xì)胞凍存:待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時,可進(jìn)行細(xì)胞凍存。下面 T25 瓶為例;

a、細(xì)胞生長至覆蓋培養(yǎng)瓶的80%面積時,棄25cm2培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)液,用PBS清洗細(xì)胞一次;

b、添加0.25%消化液約1ml至培養(yǎng)瓶中,倒置顯微鏡下觀察,待細(xì)胞回縮變圓后加入培養(yǎng)液終止消化,輕輕吹打細(xì)胞使之脫落,然后將懸液轉(zhuǎn)移至15ml離心管中,1000rpm離心5min;

c、用適量的凍存液(FBS:DMSO=9 :1)重懸細(xì)胞,并放置于凍存管中;

d、先將細(xì)胞凍存管放置于-20℃ 1.5h,然后將其移入-80℃過夜,24h后轉(zhuǎn)入液氮中進(jìn)行長期保存。使用程序降溫盒可直接放入-80℃。

A549+luc 人肺癌細(xì)胞熒光素酶標(biāo)記三、培養(yǎng)注意事項

1. 收到細(xì)胞后首先觀察細(xì)胞瓶是否完好,培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象,若有上述現(xiàn)象 發(fā)生請及時和我們聯(lián)系。

2. 仔細(xì)閱讀細(xì)胞說明書,了解細(xì)胞相關(guān)信息,如細(xì)胞形態(tài)、所用培養(yǎng)基、血清比例、所需 細(xì)胞因子等,確保細(xì)胞培養(yǎng)條件一致,若由于培養(yǎng)條件不一致而導(dǎo)致細(xì)胞出現(xiàn)問題,責(zé)任由 客戶自行承擔(dān)。

3. 用 75%酒精擦拭細(xì)胞瓶表面,顯微鏡下觀察細(xì)胞狀態(tài)。因運輸問題,部分細(xì)胞由于溫度 變化及劇烈碰破碎形成碎片,是正?,F(xiàn)象。觀察好細(xì)胞狀態(tài)后,75%酒精消毒瓶壁將 T25 瓶置于 37℃培養(yǎng)箱放置 2-4h。

4. 貼壁細(xì)胞可以消化,懸浮細(xì)胞直接混勻收集細(xì)胞,900 rpm-1000 rpm 離心 3 min,棄上 清。加 5 mL PBS 重懸細(xì)胞,再 900 rpm-1000 rpm 離心 3 min,用新鮮的培養(yǎng)基重懸 細(xì)胞,并接種到新的培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿中,置于培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng)。

5. 請客戶用相同條件的培養(yǎng)基用于細(xì)胞培養(yǎng)。

6. 建議客戶收到細(xì)胞后前 3 天各拍幾張細(xì)胞照片,記錄細(xì)胞狀態(tài),便于和我司技術(shù)部溝通 交流。由于運輸?shù)脑颍瑐€別敏感細(xì)胞會出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況,請及時和我們聯(lián)系,告知細(xì)胞 的具體情況,以便我們的技術(shù)人員跟蹤回訪直至問題解決。

7. 該細(xì)胞僅供科研使用。

8. 備注:運輸用的培養(yǎng)基 (灌液培養(yǎng)基) 不能再用來培養(yǎng)細(xì)胞,請換用按照說明書細(xì)胞培 養(yǎng)條件新配制的培養(yǎng)基來培養(yǎng)細(xì)胞。  收到細(xì)胞后次傳代建議 1:2 傳代 。

9. 注意:  1:2 傳代就是 1 個 T25 瓶傳 2 個 T25 瓶或者 2 個 6cm 皿。不是 1 個 T25 瓶傳 2 個10cm 皿。

公司正在出售的產(chǎn)品:

大鼠外周血單個核細(xì)胞

人單核細(xì)胞增多性李斯特菌suO((LLO)ELISA檢測試劑盒

L6565 (小鼠白血病克隆細(xì)胞系) (種屬鑒定正確)

人醛糖還原mei(AR)試劑盒ELISA

E.G7-OVA (小鼠T淋巴瘤細(xì)胞)

大鼠血管緊張suⅠ轉(zhuǎn)化mei(ACEⅠ)ELISA試劑盒

FO (小鼠骨髓瘤細(xì)胞)

跗線螨屬通用PCR試劑盒

3T6-Swiss albino (小鼠胚胎成纖維細(xì)胞) (種屬鑒定正確)

斯氏毛滴蟲PCR試劑盒

M1 (小鼠白血病細(xì)胞)

同斑節(jié)對蝦桿狀病毒PCR檢測試劑盒

MA-891 (小鼠乳腺癌高轉(zhuǎn)移細(xì)胞)

傳染性脾腎壞死病病毒PCR檢測試劑盒

K7M2 wt [K7M2-WT] (小鼠骨肉瘤成骨細(xì)胞) (種屬鑒定正確)

副雞嗜血桿菌PCR試劑盒

L Wnt-3A (小鼠皮下結(jié)締組織細(xì)胞) (種屬鑒定正確)

兔出血癥病毒RT-PCR試劑盒

B16-F10 (小鼠皮膚黑色瘤細(xì)胞) (種屬鑒定正確)

腺病毒D型PCR試劑盒

BC3H1 (小鼠腦瘤細(xì)胞)

糞產(chǎn)堿桿菌PCR試劑盒

Beta-TC-6 (小鼠胰島瘤胰島β細(xì)胞) (種屬鑒定正確)

糞腸球菌PCR試劑盒

BNL 1ME A.7R.1 (小鼠肝上皮細(xì)胞)

纖維單胞菌通用PCR試劑盒

C3H/10T1/2, Clone 8 (小鼠胚胎成纖維細(xì)胞) (種屬鑒定正確)

A549+luc 人肺癌細(xì)胞熒光素酶標(biāo)記鄰單胞菌通用PCR檢測試劑盒

CTLL-2 (小鼠T細(xì)胞)

尿蛋白ELISA試劑盒

 


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