實驗原理：
是采用雙抗體一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）。往預(yù)先包被捕獲抗體的包被微孔中，依次加入標本、標準品、HRP標記的檢測抗體，經(jīng)過溫育并*洗滌。用底物TMB顯色，TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的呈正相關(guān)。用酶標儀在450nm 波長下測定吸光度（OD值），計算樣品濃度。

樣品收集、處理及保存方法：
1、   血清-----操作過程中避免任何細胞刺激。使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管。收集血液后，1000×g離心10分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離。
2、   血漿-----EDTA、檸檬酸鹽、肝素血漿可用于檢測。1000×g離心30分鐘去除顆粒。
3、   細胞上清液---1000×g離心10分鐘除顆粒和聚合物。
4、   組織勻漿-----將組織加入適量生理鹽水搗碎。1000×g離心10分鐘，取上清液
5、   保存------如果樣品不立即使用，應(yīng)將其分成小部分-70 ℃保存，避免反復(fù)冷凍。盡可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量顆粒，檢測前先離心或過濾。不要在37℃或更高的溫度加熱解凍。應(yīng)在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。

標本要求：
1. 血清：：溫血液自然凝固10-20分鐘后，離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。
2. 血漿：根據(jù)標本的要求選擇EDTA、檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑，混合10-20分鐘后，離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。
3. 尿液：無菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。胸腹水、腦脊液參照此實行。
4. 細胞培養(yǎng)上清：檢測分泌性的成份時，用無菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清。
5. 組織標本：切割標本后，稱取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆?。標本融化后仍然保?-8℃的溫度。加入一定量的PBS(PH7.4)，或組織蛋白萃取試劑，用手工或勻漿器將標本勻漿化。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清。分裝后一份待檢測，其余冷凍備用。
ELISA方法被廣泛應(yīng)用于各種抗原和抗體測定。但ELISA測定中影響因素較多，而且其操作中有一定的技術(shù)要求，在檢測過程中除正常反應(yīng)外，有時常見到一些錯誤的結(jié)果。引起ELISA測定錯誤結(jié)果的原因主要有：
①標本因素；
②試劑因素；
③操作因素。
下面就一些常見ELISA操作過程中的問題一一分析。
1．樣品稀釋 酶聯(lián)免疫反應(yīng)是一種敏感性很高的反應(yīng)，如果血清不稀釋，不可避免會產(chǎn)生很強的非特異性反應(yīng)，出現(xiàn)假陽性。因此，國外檢測血清抗體的試劑盒，均規(guī)定將血清稀釋至適當?shù)谋稊?shù)，以降低非特異性反應(yīng)，使特異性的抗原抗體反應(yīng)充分體現(xiàn)出來。一般產(chǎn)品的樣品稀釋倍數(shù)均通過大量試驗確定，以保證試驗的靈敏度和特異性。但是，有些用戶未能嚴格按使用說明書操作，如某些產(chǎn)品應(yīng)取10μl樣品進行稀釋，個別用戶取5μl甚至1μl樣品進行稀釋，由于吸嘴上不可避免地沾有樣品以及微量移液器的精度不夠，因此造成樣品稀釋倍數(shù)不準確，檢測結(jié)果出現(xiàn)問題。
2．試劑盒平衡 試劑盒中所有試劑和板條均應(yīng)在試驗前平衡至室溫（約25℃），一般需在室溫放置20～30分鐘以上。平衡時間太短會造成試劑混勻不夠，樣品孵育時間相對縮短，ELISA反應(yīng)不夠充分。冬季室溫低，可將試劑盒置37℃溫箱20分鐘。 
3．樣品和試劑的混勻 稀釋前、后的樣品必須充分混勻，所有試劑在加樣前也須搖勻，以保證試驗的均一性。
下列是公司是正在的產(chǎn)品：

溴代硝基烷90%Anti-LMO4antibody[EPR6731(2)]

雙(4-硝基苯)酯99%Anti-TUB1antibody[EPR8241]

2-環(huán)己基溴烷98%Anti-TUB1antibody[EPR8241]

5-溴-2-氟苯腈97%Anti-TUB1antibody[EPR8241]

5-溴-5-硝基-1,3-二惡烷98%Anti-HGDantibody[EPR7874]

Nα-苯酰-DL-精氨酰-β-萘胺97%Anti-HGDantibody[EPR7874]

赫斯特熒光燃料，3325898%Anti-HGDantibody[EPR7874]

苯并[e]芘分析標準品Anti-NRG2antibody

戊酯≥98.0%Anti-Kallikrein11antibody

3-溴基叔基二基硅醚97%Anti-IL-12Aantibody[EP5737]

抗氧劑618試劑級Anti-IL-12Aantibody[EP5737]

1，3-二烯溶液20wt.%intolueneAnti-IL-12Aantibody[EP5737]

硅鈣分析標準品Anti-LeukotrieneB4Receptor/BLTantibody[EPR7113]

氯苯胺靈分析標準品，99%Anti-LeukotrieneB4Receptor/BLTantibody[EPR7113]

氯苯胺靈98%Anti-LeukotrieneB4Receptor/BLTantibody[EPR7113]
M-AChR檢測試劑盒 D-二聚體(D2D)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)Anti-HN1antibody[EPR7364]

D-二聚體(D2D)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)Anti-FADS1antibody[EPR6898]

D-二聚體(D2D)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)Anti-FADS1antibody[EPR6898]

D-多巴色素變位酶(DDT)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)Anti-FADS1antibody[EPR6898]

D-多巴色素變位酶(DDT)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)Anti-PCBantibody[EPR7366]

D-氨基氧化酶激活因子(DAOA)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)Anti-PCBantibody[EPR7366]

D-氨基氧化酶(DAO)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)Anti-PCBantibody[EPR7366]

Dystrotelin蛋白(DYTN)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)Anti-ProstaglandinF2alphaReceptor/PTGFRantibody[EPR5844]

Dystonin蛋白(DST)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)Anti-ProstaglandinF2alphaReceptor/PTGFRantibody[EPR5844]

Dymeclin蛋白(DYM)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)Anti-ProstaglandinF2alphaReceptor/PTGFRantibody[EPR5844]

Duffy血型趨化因子受體(DARC)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)Anti-PPWD1antibody[EPR7440]

DR1關(guān)聯(lián)蛋白1(DRAP1)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)Anti-PPWD1antibody[EPR7440]

DNA指導(dǎo)聚合酶γ1(POLγ1)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)Anti-PPWD1antibody[EPR7440]

DNA修復(fù)蛋白RAD50(RAD50)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)Anti-FMO3antibody[EPR6968]

DNA損傷誘導(dǎo)轉(zhuǎn)錄因子3(DDIT3)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)Anti-FMO3antibody[EPR6968]

測定步驟：

1.加樣
1. 除包被外都需45度加樣
2.加樣體積要準確
3.管底加樣，不能加在管壁上
4.加樣時不能產(chǎn)生氣泡
2.溫浴
1.加標本后和加結(jié)合物后，應(yīng)立即放入按規(guī)定的反應(yīng)溫 度的水浴箱。
2.各ELISA板不應(yīng)疊在一起。
3.為避免蒸發(fā)，板上應(yīng)加蓋，或?qū)迤椒旁诘撞繅|有濕 紗布的金屬濕盒中。
4.加入底物后，反應(yīng)的時間和溫度通常不做嚴格要求。 如室溫高于20℃，ELISA板可避光放在實驗臺上，以便 不時觀察，待對照管顯色適當時，即可終止酶反應(yīng)。
3.洗滌
1.洗滌在ELISA過程中不是反應(yīng)步驟，但卻 是決定實驗成敗的關(guān)鍵。
2.目的是洗去反應(yīng)液中沒有與固相抗原或 抗體結(jié)合的物質(zhì)以及在反應(yīng)過程中非特 異性吸附于固相載體的干擾物質(zhì)。
4.讀板
1.陰性對照顏色極淺，在定性測定中一般 可采用目視比色。
2.如用酶標儀測定結(jié)果，準確性決定于 ELISA板底的平整與透明度、酶標儀的質(zhì) 量和軟件的算法。