操作要點(diǎn)：
1）將培養(yǎng)基在37℃水浴鍋預(yù)熱；準(zhǔn)備一個(gè)15mL無(wú)菌的離心管，加入8mL預(yù)熱培養(yǎng)基。
2）將凍存細(xì)胞從液氮罐中取出，快速放入37℃水浴鍋中復(fù)溫（可準(zhǔn)備一潔凈的燒杯，裝滿(mǎn)37℃的水，細(xì)胞凍存管取出后迅速放入燒杯內(nèi)，再逐步轉(zhuǎn)移到水浴鍋中）。輕輕晃動(dòng)凍存管，使細(xì)胞能在1~2min內(nèi)*解凍，使細(xì)胞能盡快通過(guò)易受損的溫度段（-5~0℃）。注意凍存管管口不能沒(méi)入水中，BRL(大鼠肝細(xì)胞)避免引起污染。
3）用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺(tái)內(nèi)，將管內(nèi)細(xì)胞轉(zhuǎn)移至準(zhǔn)備好的離心管內(nèi)，輕輕吹打液體，使細(xì)胞均勻分散，降低DMSO濃度，吹打時(shí)避免產(chǎn)生氣泡。用新鮮培養(yǎng)基洗管壁2次，均轉(zhuǎn)移至離心管內(nèi)。
4）800rpm離心5min，棄上清，加入新鮮的培養(yǎng)基，吹打制成細(xì)胞懸液。
5）將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移至T25細(xì)胞瓶?jī)?nèi)，補(bǔ)加適量的培養(yǎng)基，輕輕晃動(dòng)細(xì)胞瓶使細(xì)胞分布均勻，放入溫箱內(nèi)培養(yǎng)。
6）第二天觀察細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)情況，換新鮮培養(yǎng)基以去除死細(xì)胞。繼續(xù)培養(yǎng)，待細(xì)胞長(zhǎng)至80~90%匯合時(shí)正常傳代。一般剛復(fù)蘇的細(xì)胞需經(jīng)過(guò)2~3次傳代，細(xì)胞活力恢復(fù)后才能進(jìn)行后續(xù)的實(shí)驗(yàn)。

       產(chǎn)品描述：公司提供的原代細(xì)胞均來(lái)自新鮮組織，公司提供的人源原代細(xì)胞均來(lái)自新鮮組織，用于培養(yǎng)該細(xì)胞的組織采集是根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)方案進(jìn)行。細(xì)胞的培養(yǎng)采用公司PrimaCellTM原代細(xì)胞培養(yǎng)試劑盒來(lái)優(yōu)化目的細(xì)胞生長(zhǎng)條件，以降低雜細(xì)胞的污染，同時(shí)保證質(zhì)量的穩(wěn)定。在公司技術(shù)部標(biāo)準(zhǔn)的操作流程下，原代細(xì)胞可以保持分化狀態(tài)，進(jìn)而可以用于評(píng)估體外藥物模型系統(tǒng)和調(diào)節(jié)特定基因的遺傳功能。

      發(fā)貨：客戶(hù)可根據(jù)自身科研項(xiàng)目的需要選擇不同類(lèi)型的細(xì)胞培養(yǎng)瓶和相應(yīng)的細(xì)胞密度。公司提供的細(xì)胞有標(biāo)準(zhǔn)的鑒定流程，保證細(xì)胞的純度在90%以上，且不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。發(fā)貨的新鮮細(xì)胞還包含:1、發(fā)貨的T25方瓶中裝滿(mǎn)50ml左右*培養(yǎng)基；2、說(shuō)明書(shū)及注意事項(xiàng)；3、公司售后服務(wù)標(biāo)準(zhǔn)。

      保存和應(yīng)用：客戶(hù)可以根據(jù)自己的需求選擇新鮮或者凍存的原代細(xì)胞，如是新鮮原代細(xì)胞，客戶(hù)收到細(xì)胞后應(yīng)立即將其放入CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱內(nèi)靜置后2-3h，再進(jìn)行后續(xù)的實(shí)驗(yàn)操作。如是凍存細(xì)胞，客戶(hù)收到細(xì)胞后應(yīng)立即將其放入液氮、-80℃冰箱或立即進(jìn)行復(fù)蘇。該細(xì)胞只可用于科研，不得用于臨床應(yīng)用。

注意事項(xiàng)：
1. 接收到細(xì)胞，肉眼觀察細(xì)胞培養(yǎng)基顏色，顯微鏡觀察細(xì)胞生長(zhǎng)情況，并對(duì)細(xì)胞進(jìn)行不同倍數(shù)拍照（建議收到時(shí)的培養(yǎng)瓶拍一張照片，顯微鏡拍收到時(shí)的細(xì)胞100X,200X各一張）。
2.用75%的酒精消毒（建議配置75%的酒精的水是滅菌過(guò)的）。
3.嚴(yán)格無(wú)菌操作，打開(kāi)細(xì)胞培養(yǎng)瓶。
4.將細(xì)胞培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)的培養(yǎng)基用吸管*吸出（嚴(yán)禁直接傾倒），放入另一無(wú)菌容器中（建議換新的培養(yǎng)基培養(yǎng)細(xì)胞）。
5.用PBS 2-3ml/次輕輕洗細(xì)胞表面，洗3-4次遍，加入0.05%-EDTA1-1.5ml,顯微鏡下觀察細(xì)胞變圓，輕輕拍打培養(yǎng)瓶直到細(xì)胞脫落，加入終止液終止。
6.1000rpm，5min離心，重懸細(xì)胞。
7.換新的細(xì)胞培養(yǎng)瓶，37℃，5%CO2培養(yǎng)。

培養(yǎng)步驟：

對(duì)于貼壁細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤(rùn)洗細(xì)胞1-2次。
2. 加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察Ⅱ型肺泡上皮細(xì)胞|細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3. 按6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4. 將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。對(duì)于懸浮細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細(xì)胞，1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
方法二：可選擇半數(shù)換液方式，棄去半數(shù)培養(yǎng)基后，將剩余細(xì)胞懸起，將細(xì)胞懸液按1：2到1：3的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

4-AMINOHIPPURIC ACID銅溶液標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)anti- ATP9A antibody人肝素輔因子Ⅱ(HCⅡ)ELISA試劑盒

Schiffs reagent鉛溶液標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)anti- ATPAF1 antibody人透明質(zhì)酸結(jié)合蛋白(HABP)ELISA試劑盒

4-Amino-3-pyridinecarboxylic acid銦溶液標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)anti- ATPAF1 antibody人細(xì)胞素相關(guān)蛋白A(CagA)ELISA試劑盒

4-Benzoylbiphenyl鉍溶液標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)anti- ATPAF2 antibody人胃泌素釋放多肽(GRP)ELISA試劑盒

4-PYRIDYLTHIOUREA水中氯溶液標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)anti- ATPB antibody人胃泌素釋放肽前體(ProGRP)ELISA試劑盒

NA硒溶液標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)anti- ATPB antibody人促胰液素/胰泌素(Secretin)ELISA試劑盒

4-Fluoro-3-nitrobenzotrifluoride錫溶液標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)anti- ATPBD4 antibody人原激活肽(TAP)ELISA

L-4-Fluorophenylalanine苯酸熱量標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)anti- ATPIF1 antibody人內(nèi)皮型一氮合成酶3(eNOS-3)ELISA試劑盒

人腎管狀上皮細(xì)胞Human PKCθ (Protein Kinase C Theta )ELISA Kit 卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白89抗體anti- PRUNE antibody血管內(nèi)皮細(xì)胞蛋白C受體(PROCR)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)

Human PRSS23 (Protease, Serine 23) ELISA Kit 卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白30抗體anti- PRX3 antibody顆粒酶M(GZMM)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)

Human PKD1 (Protein Kinase D1) ELISA Kit 卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白40抗體anti- PRX5 antibody顆粒酶M(GZMM)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)

Human PKD2 (Protein Kinase D2 )NELISA Kit 卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白114抗體anti- PSA antibody顆粒酶M(GZMM)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)

Human PKN1 (Protein Kinase N1) ELISA Kit 卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白39抗體anti- PSA antibdy凋亡相關(guān)因子(FAS)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)

Human PKIα (Protein Kinase Inhibior Alpha) ELISA Kit 卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白34抗體anti- PSAP antibody凋亡相關(guān)因子(FAS)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)

Human PKIβ (Protein Kinase Inhibitor Beta) ELISA Kit 卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白75抗體anti- PSAP antibody凋亡相關(guān)因子配體(FASL)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)

Human PKIγ (Protein Kinase Inhibir Gamma) ELISA Kit 卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白65抗體anti- PSAP antibody酸性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子(FGF1)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)