操作要點(diǎn)：
1）將培養(yǎng)基在37℃水浴鍋預(yù)熱；準(zhǔn)備一個(gè)15mL無(wú)菌的離心管，加入8mL預(yù)熱培養(yǎng)基。
2）將凍存細(xì)胞從液氮罐中取出，快速放入37℃水浴鍋中復(fù)溫（可準(zhǔn)備一潔凈的燒杯，裝滿37℃的水，細(xì)胞凍存管取出后迅速放入燒杯內(nèi)，再逐步轉(zhuǎn)移到水浴鍋中）。輕輕晃動(dòng)凍存管，使細(xì)胞能在1~2min內(nèi)*解凍，使細(xì)胞能盡快通過(guò)易受損的溫度段（-5~0℃）。注意凍存管管口不能沒(méi)入水中，BRL(大鼠肝細(xì)胞)避免引起污染。
3）用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺(tái)內(nèi)，將管內(nèi)細(xì)胞轉(zhuǎn)移至準(zhǔn)備好的離心管內(nèi)，輕輕吹打液體，使細(xì)胞均勻分散，降低DMSO濃度，吹打時(shí)避免產(chǎn)生氣泡。用新鮮培養(yǎng)基洗管壁2次，均轉(zhuǎn)移至離心管內(nèi)。
4）800rpm離心5min，棄上清，加入新鮮的培養(yǎng)基，吹打制成細(xì)胞懸液。
5）將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移至T25細(xì)胞瓶?jī)?nèi)，補(bǔ)加適量的培養(yǎng)基，輕輕晃動(dòng)細(xì)胞瓶使細(xì)胞分布均勻，放入溫箱內(nèi)培養(yǎng)。
6）第二天觀察細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)情況，換新鮮培養(yǎng)基以去除死細(xì)胞。繼續(xù)培養(yǎng)，待細(xì)胞長(zhǎng)至80~90%匯合時(shí)正常傳代。一般剛復(fù)蘇的細(xì)胞需經(jīng)過(guò)2~3次傳代，細(xì)胞活力恢復(fù)后才能進(jìn)行后續(xù)的實(shí)驗(yàn)。

       產(chǎn)品描述：公司提供的原代細(xì)胞均來(lái)自新鮮組織，公司提供的人源原代細(xì)胞均來(lái)自新鮮組織，用于培養(yǎng)該細(xì)胞的組織采集是根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)方案進(jìn)行。細(xì)胞的培養(yǎng)采用公司PrimaCellTM原代細(xì)胞培養(yǎng)試劑盒來(lái)優(yōu)化目的細(xì)胞生長(zhǎng)條件，以降低雜細(xì)胞的污染，同時(shí)保證質(zhì)量的穩(wěn)定。在公司技術(shù)部標(biāo)準(zhǔn)的操作流程下，原代細(xì)胞可以保持分化狀態(tài)，進(jìn)而可以用于評(píng)估體外藥物模型系統(tǒng)和調(diào)節(jié)特定基因的遺傳功能。

      發(fā)貨：客戶可根據(jù)自身科研項(xiàng)目的需要選擇不同類型的細(xì)胞培養(yǎng)瓶和相應(yīng)的細(xì)胞密度。公司提供的細(xì)胞有標(biāo)準(zhǔn)的鑒定流程，保證細(xì)胞的純度在90%以上，且不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。發(fā)貨的新鮮細(xì)胞還包含:1、發(fā)貨的T25方瓶中裝滿50ml左右*培養(yǎng)基；2、說(shuō)明書及注意事項(xiàng)；3、公司售后服務(wù)標(biāo)準(zhǔn)。

      保存和應(yīng)用：客戶可以根據(jù)自己的需求選擇新鮮或者凍存的原代細(xì)胞，如是新鮮原代細(xì)胞，客戶收到細(xì)胞后應(yīng)立即將其放入CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱內(nèi)靜置后2-3h，再進(jìn)行后續(xù)的實(shí)驗(yàn)操作。如是凍存細(xì)胞，客戶收到細(xì)胞后應(yīng)立即將其放入液氮、-80℃冰箱或立即進(jìn)行復(fù)蘇。該細(xì)胞只可用于科研，不得用于臨床應(yīng)用。

注意事項(xiàng)：
1. 接收到細(xì)胞，肉眼觀察細(xì)胞培養(yǎng)基顏色，顯微鏡觀察細(xì)胞生長(zhǎng)情況，并對(duì)細(xì)胞進(jìn)行不同倍數(shù)拍照（建議收到時(shí)的培養(yǎng)瓶拍一張照片，顯微鏡拍收到時(shí)的細(xì)胞100X,200X各一張）。
2.用75%的酒精消毒（建議配置75%的酒精的水是滅菌過(guò)的）。
3.嚴(yán)格無(wú)菌操作，打開細(xì)胞培養(yǎng)瓶。
4.將細(xì)胞培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)的培養(yǎng)基用吸管*吸出（嚴(yán)禁直接傾倒），放入另一無(wú)菌容器中（建議換新的培養(yǎng)基培養(yǎng)細(xì)胞）。
5.用PBS 2-3ml/次輕輕洗細(xì)胞表面，洗3-4次遍，加入0.05%-EDTA1-1.5ml,顯微鏡下觀察細(xì)胞變圓，輕輕拍打培養(yǎng)瓶直到細(xì)胞脫落，加入終止液終止。
6.1000rpm，5min離心，重懸細(xì)胞。
7.換新的細(xì)胞培養(yǎng)瓶，37℃，5%CO2培養(yǎng)。

培養(yǎng)步驟：

對(duì)于貼壁細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤(rùn)洗細(xì)胞1-2次。
2. 加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察Ⅱ型肺泡上皮細(xì)胞|細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3. 按6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4. 將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。對(duì)于懸浮細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細(xì)胞，1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
方法二：可選擇半數(shù)換液方式，棄去半數(shù)培養(yǎng)基后，將剩余細(xì)胞懸起，將細(xì)胞懸液按1：2到1：3的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

Cholesterol化學(xué)需氧量-鉻（CODCr）anti- CBP20 antibody人α半乳糖基抗體(Gal)ELISA試劑盒

Bilirubin水中化學(xué)需氧量標(biāo)準(zhǔn)溶液-（COD-Cr）anti- CBPE antibody人αN已酰氨基葡糖苷酶(αNAG)ELISA試劑盒

DHL AGAR SAKAZAKI水中化學(xué)需氧量標(biāo)準(zhǔn)溶液-（COD-Cr）anti- CBPN antibody人α2纖溶酶抑制物(α2-PI)ELISA試劑盒

Cholic acid水中化學(xué)需氧量標(biāo)準(zhǔn)溶液（COD-Cr）anti- CBR3 antibody人腺嘌呤二核苷酸酸(NADPH)ELISA試劑盒

NA水中高錳酸鹽指數(shù)標(biāo)準(zhǔn)溶液（COD,Mn）anti- CBR4 antibody人鈣粘蛋白相關(guān)的神經(jīng)受體1(CNR-1)ELISA試劑盒

NA水中標(biāo)準(zhǔn)溶液（0.2%鈉）anti- CBS antibody人毛細(xì)血管擴(kuò)張性共濟(jì)失調(diào)突變基因(ATM)ELISA試劑盒

CHOLESTEROL OXIDASE水中標(biāo)準(zhǔn)溶液（介質(zhì)：0.2mol/L鈉）anti- CBX1 antibody人芳香烴受體(AhR)ELISA試劑盒

ELASTIN氯化鋅標(biāo)準(zhǔn)溶液anti- CBX2 antibody人特異性巨噬細(xì)胞武裝因子(SMAF)ELISA試劑盒

小鼠輸尿管上皮細(xì)胞Human HSP gp96 (Heat Shock Protein glycoprotein 96) ELISA Kit巨噬細(xì)胞炎癥蛋白-1γ抗體anti- RPL27A antibody極低密度脂蛋白(VLDL)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)

Human HSF2 (Heat Shock Transcription Factor 2) ELISA Kit 8號(hào)染色體開放閱讀框30a抗體anti- RPL28 antibody兒茶酚-O-基轉(zhuǎn)移酶(COMT)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)

Human HSF1 (Heat Shock Transcription Factor 1) ELISA Kit 神經(jīng)細(xì)胞粘附分子配體1抗體anti- RPL29 antibody磺基轉(zhuǎn)移酶(PST)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)

Human PSG1/SP1 (Pregnancy Specific Beta-1-Glycoprotein 1) ELISA Kit1號(hào)染色體開放閱讀框229抗體anti- RPL3 antibody孕烷X受體(PXR)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)

Human LZM (Lysozyme) ELISA KitCullin 4a蛋白抗體anti- RPL3 antibody骨骼肌特異性受體激酶(MUSK)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)

Human TERF2 (Telomeric Repeat Binding Factor 2) ELISA Kit細(xì)胞角蛋白3抗體anti- RPL30 antibody糖化血紅蛋白(HbA1C)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)

Human TFF1 (Trefoil Factor 1) ELISA Kit 殺菌肽/天蠶抗菌肽抗體anti- RPL31 antibody(AP)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)

Human TFF2 (Trefoil Factor 2) ELISA Kit 5號(hào)染色體開放閱讀框52抗體anti- RPL32 antibody結(jié)合球蛋白(CBG)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)