操作要點：
1）將培養(yǎng)基在37℃水浴鍋預熱；準備一個15mL無菌的離心管，加入8mL預熱培養(yǎng)基。
2）將凍存細胞從液氮罐中取出，快速放入37℃水浴鍋中復溫（可準備一潔凈的燒杯，裝滿37℃的水，細胞凍存管取出后迅速放入燒杯內(nèi)，再逐步轉移到水浴鍋中）。輕輕晃動凍存管，使細胞能在1~2min內(nèi)*解凍，使細胞能盡快通過易受損的溫度段（-5~0℃）。注意凍存管管口不能沒入水中，BRL(大鼠肝細胞)避免引起污染。
3）用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺內(nèi)，將管內(nèi)細胞轉移至準備好的離心管內(nèi)，輕輕吹打液體，使細胞均勻分散，降低DMSO濃度，吹打時避免產(chǎn)生氣泡。用新鮮培養(yǎng)基洗管壁2次，均轉移至離心管內(nèi)。
4）800rpm離心5min，棄上清，加入新鮮的培養(yǎng)基，吹打制成細胞懸液。
5）將細胞懸液轉移至T25細胞瓶內(nèi)，補加適量的培養(yǎng)基，輕輕晃動細胞瓶使細胞分布均勻，放入溫箱內(nèi)培養(yǎng)。
6）第二天觀察細胞貼壁生長情況，換新鮮培養(yǎng)基以去除死細胞。繼續(xù)培養(yǎng)，待細胞長至80~90%匯合時正常傳代。一般剛復蘇的細胞需經(jīng)過2~3次傳代，細胞活力恢復后才能進行后續(xù)的實驗。

       產(chǎn)品描述：公司提供的原代細胞均來自新鮮組織，公司提供的人源原代細胞均來自新鮮組織，用于培養(yǎng)該細胞的組織采集是根據(jù)標準方案進行。細胞的培養(yǎng)采用公司PrimaCellTM原代細胞培養(yǎng)試劑盒來優(yōu)化目的細胞生長條件，以降低雜細胞的污染，同時保證質(zhì)量的穩(wěn)定。在公司技術部標準的操作流程下，原代細胞可以保持分化狀態(tài)，進而可以用于評估體外藥物模型系統(tǒng)和調(diào)節(jié)特定基因的遺傳功能。

      發(fā)貨：客戶可根據(jù)自身科研項目的需要選擇不同類型的細胞培養(yǎng)瓶和相應的細胞密度。公司提供的細胞有標準的鑒定流程，保證細胞的純度在90%以上，且不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。發(fā)貨的新鮮細胞還包含:1、發(fā)貨的T25方瓶中裝滿50ml左右*培養(yǎng)基；2、說明書及注意事項；3、公司售后服務標準。

      保存和應用：客戶可以根據(jù)自己的需求選擇新鮮或者凍存的原代細胞，如是新鮮原代細胞，客戶收到細胞后應立即將其放入CO2細胞培養(yǎng)箱內(nèi)靜置后2-3h，再進行后續(xù)的實驗操作。如是凍存細胞，客戶收到細胞后應立即將其放入液氮、-80℃冰箱或立即進行復蘇。該細胞只可用于科研，不得用于臨床應用。

注意事項：
1. 接收到細胞，肉眼觀察細胞培養(yǎng)基顏色，顯微鏡觀察細胞生長情況，并對細胞進行不同倍數(shù)拍照（建議收到時的培養(yǎng)瓶拍一張照片，顯微鏡拍收到時的細胞100X,200X各一張）。
2.用75%的酒精消毒（建議配置75%的酒精的水是滅菌過的）。
3.嚴格無菌操作，打開細胞培養(yǎng)瓶。
4.將細胞培養(yǎng)瓶內(nèi)的培養(yǎng)基用吸管*吸出（嚴禁直接傾倒），放入另一無菌容器中（建議換新的培養(yǎng)基培養(yǎng)細胞）。
5.用PBS 2-3ml/次輕輕洗細胞表面，洗3-4次遍，加入0.05%-EDTA1-1.5ml,顯微鏡下觀察細胞變圓，輕輕拍打培養(yǎng)瓶直到細胞脫落，加入終止液終止。
6.1000rpm，5min離心，重懸細胞。
7.換新的細胞培養(yǎng)瓶，37℃，5%CO2培養(yǎng)。

培養(yǎng)步驟：

對于貼壁細胞，傳代可參考以下方法：
1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。
2. 加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察Ⅱ型肺泡上皮細胞|細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3. 按6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4. 將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。對于懸浮細胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細胞，1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
方法二：可選擇半數(shù)換液方式，棄去半數(shù)培養(yǎng)基后，將剩余細胞懸起，將細胞懸液按1：2到1：3的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

1, 2-Ethanedithiol;Dithioglycol;1,2-DiMercaptoethane;Dithioethyleneglycol;Ethylene Mercaptan;Ethylone diMercaptanN,N-二基酰胺中苯標準品（標樣）anti- CD44 antibody人高靈敏度促狀腺激素(U-TSH)ELISA試劑盒

MOLYBDENUM(IV) SULFIDEN,N-二基酰胺中苯標準品（標樣）anti- CD45 antibody人(AZT)ELISA試劑盒

Carbon disulfide;Dithiocarbonic anhydride醇中5種揮發(fā)性鹵代烴混合標準品（標樣）anti- CD45 antibody人真核翻譯起始因子3a(eIF3a)ELISA試劑盒

Phenyl dichlorophosphate醇中7種苯系物標準品（標樣）anti- CD46 antibody人酸化細胞外信號調(diào)節(jié)激酶(pERK)ELISA試劑盒

Dichloroacetyl chloride醇中苯并[a]芘標準品（標樣）anti- CD47 antibody人受蛋白(PLN)ELISA試劑盒

NA醇中烯醛標準品（標樣）anti- CD5 antibody人腫瘤壞死因子相關弱凋亡誘導因子(TWEAK)ELISA試劑盒

Dichloroisocyanuric acid sodiuM salt;Dichloroisocyanuric acid,Na salt醇中烯腈標準品（標樣）anti- CD58 antibody人IPO-38蛋白(IPO38)ELISA試劑盒

Ferrocenecarboxylic acid醇中7種苯系物標準品-7種苯系物（標樣）anti- CD59 antibody人切除修復交叉互補基因1(ERCC1)ELISA試劑盒

小鼠腦膜成纖維細胞Human CK-19/KRT19 (Cytokeratin 19) ELISA Kit細胞質(zhì)膜微囊蛋白-2抗體anti- SAR1A antibody層黏連蛋白α5(LAMα5)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)

Human CK-20/KRT20 (Cytokeratin 20) ELISA Kit酸化細胞質(zhì)膜微囊蛋白-2抗體anti- SAR1A antibody神經(jīng)調(diào)節(jié)素2(NRG2)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)

Human CYFRA21-1 (Cytokeratin Fragment Antigen 21-1) ELISA Kit中心體蛋白128抗體anti- SAR1B antibody水通道蛋白8(AQP8)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)

Human CVL/EZR (Cytovillin/Ezrin) ELISA Kit著絲粒蛋白O抗體anti- SAR1B antibody雙特異性酸酶9(DUSP9)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)

Human CYB561 (Cytochrome b-561) ELISA Kit 3號染色體開放閱讀框24抗體anti- SARA antibody神經(jīng)源性分化蛋白6(NEUROD6)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)

Human CYP7A1 (Cytochrome P450 7A1) ELISA Kit 4號染色體開放閱讀框28抗體anti- SARA antibody血小板內(nèi)皮細胞粘附分子1(PECAM1)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)

Human CYP21B (Cytochrome P450 21B) ELISA Kit補體C3b抗體anti- SARDH antibody血小板反應蛋白2(THBS2)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)

Human ECM1 (Extracellular Matrix Protein 1) ELISA Kit 補體C3b-α鏈抗體anti- SARS antibody碳酸酐酶Ⅸ(CA9)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)