人椎間盤(pán)髓核細(xì)胞提取物【Human Intervertebral Disc: Normal Nucleus Pulposus Cell Derivatives】
人椎間盤(pán)髓核細(xì)胞提取物是從人椎間盤(pán)髓核細(xì)胞提取的，人椎間盤(pán)髓核細(xì)胞從正常人椎間盤(pán)髓核組織制備。正常人椎間盤(pán)髓核組織采集自各地方醫(yī)院，采集工作根據(jù)IRB 和 HIPAA批準(zhǔn)的方案進(jìn)行。所有的產(chǎn)品在發(fā)貨之前均經(jīng)過(guò)嚴(yán)格的QA/QC流程以確保其質(zhì)量。這些產(chǎn)品可以直接用于基因克隆，表達(dá)圖譜分析以及各種分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)的研究。
總RNA制備：利用Qiagen RNeasy Kit的Trizol試劑分離RNA，然后用Qiagen RNA Clean Kit進(jìn)行純化。公司提供的總RNA樣品附有RNA樣品總濃度、總含量、電泳照片、OD值測(cè)定結(jié)果等。

cDNA制備：純化后的總RNA來(lái)合成cDNA一鏈，以50ul總反應(yīng)體系進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄，體系中包括MMLV反轉(zhuǎn)錄酶和隨機(jī)引物以及10mg總RNA。68℃反應(yīng)10min 后終止RT反應(yīng)。利用1x RT Buffer 運(yùn)輸cDNA，1 ul cDNA 足夠做一次PCR反應(yīng)。所有cDNA產(chǎn)品在訂單發(fā)貨之前都經(jīng)過(guò)了嚴(yán)格的QA/QC分析，保證了產(chǎn)品的質(zhì)量。

蛋白制備：利用改良型RIPA Buffer (50mMTris, pH7.2, 150mM NaCl, 1mM EDTA, 1mM EGTA, 1% NP-40 , 1mM Na3VO4, 5mM NaF, 400uM PMSF, 1ug/ml of Pepstatin A, 5ug/ml of Aprotinin, 5ug/ml of Leupeptin)制備人椎間盤(pán)髓核組織裂解液，離心去除組織碎片，通過(guò)Bio-Rad蛋白檢測(cè)試劑盒測(cè)定蛋白濃度，組織蛋白稀釋后用非還原蛋白Buffer (50 mM Tris-HCl, pH 6.8, 5% Glycerol, 1% SDS, 0.002% Bromphenol Blue)添加5%β-巰基乙醇及PMSF，-80度保存。

潛在的應(yīng)用： <1>已知基因的PCR克隆；<2>mRNA選擇性剪接；<3>基因克隆與目標(biāo)測(cè)序；<4> Western and Northern Blot；<5>蛋白檢測(cè)與蛋白質(zhì)組學(xué)；<6>芯片研究與表達(dá)圖譜。

冷凍保存細(xì)胞之方法？
冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ （-20 ℃30 分鐘*） → -80 ℃16~18 小時(shí)（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 儲(chǔ)存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機(jī)中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下， 再放入液氮槽vapor phase儲(chǔ)存。*-20 ℃不可超過(guò)1 小時(shí)， 以防止冰晶過(guò)大，造成細(xì)胞大量死亡，亦可跳過(guò)此步驟直接放入-80℃ 冰箱中，惟存活率稍微降低一些。

細(xì)胞培養(yǎng)步驟：

一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1） 準(zhǔn)備DMEM-H培養(yǎng)基(GIBCO,貨號(hào)1199500bt，添加NaHCO3 1.5g/L)，90%；胎牛血清，10%。也可根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要選擇懸浮培養(yǎng)基，使293T細(xì)胞懸浮生長(zhǎng)。
2） 培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3） 凍存液：90%*培養(yǎng)基，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲(chǔ)存。
二． 細(xì)胞處理：
1） 復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過(guò)夜（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10cm皿中，加入約8ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)過(guò)夜）。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2） 細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對(duì)于貼壁細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤(rùn)洗細(xì)胞1-2次。
2. 加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3. 按6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4. 將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3）細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。貼壁細(xì)胞凍存時(shí)，棄去培養(yǎng)基后加入少量，細(xì)胞變圓脫落后，加入約1ml含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中，再添加10%DMSO后進(jìn)行凍存。

收到細(xì)胞如何處理？

1、首先，觀察細(xì)胞培養(yǎng)瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象。若有，請(qǐng)拍照，（所拍照片將作為后續(xù)服務(wù)依據(jù)）。
2、用75%酒精擦拭細(xì)胞培養(yǎng)瓶表面，顯微鏡下觀察細(xì)胞狀態(tài)。因運(yùn)輸問(wèn)題，部分貼壁細(xì)胞會(huì)有少量從瓶壁脫落；先不要打開(kāi)培養(yǎng)瓶蓋，將細(xì)胞置于細(xì)胞培養(yǎng)箱內(nèi)靜置培養(yǎng)2-4小時(shí)，以便穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)。
3、仔細(xì)閱讀細(xì)胞說(shuō)明書(shū)，了解細(xì)胞相關(guān)信息，如貼壁特性（貼壁/懸?。?、細(xì)胞形態(tài)、所用基礎(chǔ)培養(yǎng)基、血清比例、所需細(xì)胞因子、傳代比例、換液頻率等。
4、靜置完成后，取出細(xì)胞培養(yǎng)瓶，鏡檢、拍照，記錄細(xì)胞狀態(tài)（所拍照片將作為后續(xù)服務(wù)依據(jù)）；建議細(xì)胞傳代培養(yǎng)后，定期拍照、記錄細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)。
5、貼壁細(xì)胞：若細(xì)胞生長(zhǎng)密度超過(guò)80%，可正常傳代；若未超過(guò)80%，移除細(xì)胞培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)培養(yǎng)基，預(yù)留5ml左右繼續(xù)培養(yǎng)，直至細(xì)胞密度達(dá)80%左右再進(jìn)行傳代操作，瓶蓋可稍微擰松。
6、懸浮細(xì)胞：將細(xì)胞培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)液體全部轉(zhuǎn)移至50ml無(wú)菌離心管內(nèi)，1200rpm離心5min，離心后上清培養(yǎng)基可收集備用，管底細(xì)胞沉淀加入5ml培養(yǎng)基吹打、重懸。鏡檢時(shí)，若細(xì)胞密度超過(guò)80%，可將細(xì)胞懸液分至2個(gè)細(xì)胞培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)培養(yǎng)，補(bǔ)加培養(yǎng)基至5ml；若細(xì)胞密度未超過(guò)80%，將細(xì)胞懸液移至原瓶繼續(xù)培養(yǎng)，直至細(xì)胞密度達(dá)80%左右時(shí)再進(jìn)行傳代操作。
公司產(chǎn)品采用干冰運(yùn)輸，經(jīng)過(guò)逐步的降溫，冷藏在-196℃度的液氮罐中，暫時(shí)停止其生命活動(dòng)，保存其活性，使您的實(shí)驗(yàn)更生動(dòng),公司代理品牌有：ATCC、sciencell、ICLC、GIBCO、IST-Banca等品牌.

Acid chroMe dark blue;2-(2-Hydroxyphenylazo)-1,8-dihydroxynaphthalene-3,6-disulfonic acid sodiuM salt;C.I. 16670土壤成分分析標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)anti- ECH1 antibody大鼠嗜酸粒細(xì)胞趨化因子(ECF)ELISA試劑盒

Cocarboxylase土壤成分分析標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)anti- ECHS1 antibody大鼠內(nèi)分泌腺來(lái)源的血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(EG-VEGF)ELISA試劑盒

NA水系沉積物成分分析標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)anti- ECHS1 antibody大鼠1,3-βD葡葡糖苷酶(1,3-βD-Glu)ELISA試劑盒

CarboxyMethylcellulose SodiuM;SodiuM celluloseglycolate;Cellulose guM;SodiuM tylose;CarboxyMethocel S;CarMethose;Thylose sodiuM;CMC水系沉積物成分分析標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)anti- ECM1 antibody大鼠可溶性血管內(nèi)皮細(xì)胞蛋白C受體(sEPCR)酶聯(lián)免疫分析大鼠可溶性血管內(nèi)皮細(xì)胞蛋白C受體(sEPCR)酶聯(lián)免疫分析體(sEPCR)ELISA試劑盒

CARBOXYPEPTIDASE A水系沉積物成分分析標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)anti- ECM2 antibody大鼠CD30分子(CD30)ELISA試劑盒

TitaniuM;水系沉積物成分分析標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)anti- ECOP antibody大鼠E鈣黏蛋白/上皮鈣黏蛋白(E-Cad)ELISA試劑盒

Barium titanate水系沉積物成分分析標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)anti- EDAR antibody大鼠β細(xì)胞素(BTC)ELISA試劑盒

Tetrabutyl titanate礦石中金和銀成分分析標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)anti- EDC3 antibody大鼠血管生成素2(ANG-2)ELISA試劑盒

人椎間盤(pán)髓核細(xì)胞提取物Saccharomyces cerevisiae Meyen ex E.C. Hans ..成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子受體2抗體anti- TMEM127 antibody細(xì)胞色素P450家族成員11B1(CYP11B1)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)

Staphylococcus aureus subsp.aureus Rosen ..成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子受體4抗體anti- TMEM132A antibody碘腺原氨酸脫碘酶Ⅰ(DIO1)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)

Blastomyces dermatitidis Gilchrist et Stokes原酶(纖維介素)抗體anti- TMEM139 antibody碘腺原氨酸脫碘酶Ⅲ(DIO3)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)

Podoxyphium indicum Sharma et al.衰老關(guān)鍵蛋白抗體anti- TMEM141 antibodyRNA結(jié)合基元蛋白20(RBM20)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)

Candida boidinii Ramirez, anamorph凋亡調(diào)節(jié)基因之一抗體anti- TMEM154 antibodyRNA結(jié)合基元蛋白24(RBM24)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)

Polysphondylium asymetricum Vadell et Caven ..凋亡調(diào)節(jié)基因之一抗體（短型）anti- TMEM161A antibody脊髓灰質(zhì)炎病受體(PVR)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)

Achlya bisexualis CokerFosB蛋白抗體anti- TMEM165 antibodyRNA結(jié)合基元蛋白38(RBM38)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)

Saccharomyces cerevisiae Meyen ex E.C. Hans ..FRA2/FOSL2抗體anti- TMEM168 antibody基質(zhì)金屬蛋白酶1(MMP1)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)