人主動脈平滑肌細(xì)胞提取物【Human Aortic: Normal Aortic Smooth Muscle Cell Derivatives】
人主動脈平滑肌細(xì)胞提取物是從人原代主動脈平滑肌細(xì)胞提取的，人原代主動脈平滑肌細(xì)胞從正常人主動脈組織制備。正常人主動脈組織采集自各地方醫(yī)院，采集工作根據(jù)IRB 和 HIPAA批準(zhǔn)的方案進(jìn)行。所有的產(chǎn)品在發(fā)貨之前均經(jīng)過嚴(yán)格的QA/QC流程以確保其質(zhì)量。這些產(chǎn)品可以直接用于基因克隆，表達(dá)圖譜分析以及各種分子生物學(xué)實(shí)驗的研究。
總RNA制備：利用Qiagen RNeasy Kit的Trizol試劑分離RNA，然后用Qiagen RNA Clean Kit進(jìn)行純化。公司提供的總RNA樣品附有RNA樣品總濃度、總含量、電泳照片、OD值測定結(jié)果等。

cDNA制備：純化后的總RNA來合成cDNA一鏈，以50ul總反應(yīng)體系進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄，體系中包括MMLV反轉(zhuǎn)錄酶和隨機(jī)引物以及10mg總RNA。68℃反應(yīng)10min 后終止RT反應(yīng)。利用1x RT Buffer 運(yùn)輸cDNA，1 ul cDNA 足夠做一次PCR反應(yīng)。所有cDNA產(chǎn)品在訂單發(fā)貨之前都經(jīng)過了嚴(yán)格的QA/QC分析，保證了產(chǎn)品的質(zhì)量。

蛋白制備：利用改良型RIPA Buffer (50mMTris, pH7.2, 150mM NaCl, 1mM EDTA, 1mM EGTA, 1% NP-40 , 1mM Na3VO4, 5mM NaF, 400uM PMSF, 1ug/ml of Pepstatin A, 5ug/ml of Aprotinin, 5ug/ml of Leupeptin)制備人主動脈平滑肌組織裂解液，離心去除組織碎片，通過Bio-Rad蛋白檢測試劑盒測定蛋白濃度，組織蛋白稀釋后用非還原蛋白Buffer (50 mM Tris-HCl, pH 6.8, 5% Glycerol, 1% SDS, 0.002% Bromphenol Blue)添加5%β-巰基乙醇及PMSF，-80度保存。

潛在的應(yīng)用： <1>已知基因的PCR克??；<2>mRNA選擇性剪接；<3>基因克隆與目標(biāo)測序；<4> Western and Northern Blot；<5>蛋白檢測與蛋白質(zhì)組學(xué)；<6>芯片研究與表達(dá)圖譜。

操作要點(diǎn)：
1）將培養(yǎng)基在37℃水浴鍋預(yù)熱；準(zhǔn)備一個15mL無菌的離心管，加入8mL預(yù)熱培養(yǎng)基。
2）將凍存細(xì)胞從液氮罐中取出，快速放入37℃水浴鍋中復(fù)溫（可準(zhǔn)備一潔凈的燒杯，裝滿37℃的水，細(xì)胞凍存管取出后迅速放入燒杯內(nèi)，再逐步轉(zhuǎn)移到水浴鍋中）。輕輕晃動凍存管，使細(xì)胞能在1~2min內(nèi)*解凍，使細(xì)胞能盡快通過易受損的溫度段（-5~0℃）。注意凍存管管口不能沒入水中，BRL(大鼠肝細(xì)胞)避免引起污染。
3）用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺內(nèi)，將管內(nèi)細(xì)胞轉(zhuǎn)移至準(zhǔn)備好的離心管內(nèi)，輕輕吹打液體，使細(xì)胞均勻分散，降低DMSO濃度，吹打時避免產(chǎn)生氣泡。用新鮮培養(yǎng)基洗管壁2次，均轉(zhuǎn)移至離心管內(nèi)。
4）800rpm離心5min，棄上清，加入新鮮的培養(yǎng)基，吹打制成細(xì)胞懸液。
5）將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移至T25細(xì)胞瓶內(nèi)，補(bǔ)加適量的培養(yǎng)基，輕輕晃動細(xì)胞瓶使細(xì)胞分布均勻，放入溫箱內(nèi)培養(yǎng)。
6）第二天觀察細(xì)胞貼壁生長情況，換新鮮培養(yǎng)基以去除死細(xì)胞。繼續(xù)培養(yǎng)，待細(xì)胞長至80~90%匯合時正常傳代。一般剛復(fù)蘇的細(xì)胞需經(jīng)過2~3次傳代，細(xì)胞活力恢復(fù)后才能進(jìn)行后續(xù)的實(shí)驗。
注意事項：
1. 接收到細(xì)胞，肉眼觀察細(xì)胞培養(yǎng)基顏色，顯微鏡觀察細(xì)胞生長情況，并對細(xì)胞進(jìn)行不同倍數(shù)拍照（建議收到時的培養(yǎng)瓶拍一張照片，顯微鏡拍收到時的細(xì)胞100X,200X各一張）。
2.用75%的酒精消毒（建議配置75%的酒精的水是滅菌過的）。
3.嚴(yán)格無菌操作，打開細(xì)胞培養(yǎng)瓶。
4.將細(xì)胞培養(yǎng)瓶內(nèi)的培養(yǎng)基用吸管*吸出（嚴(yán)禁直接傾倒），放入另一無菌容器中（建議換新的培養(yǎng)基培養(yǎng)細(xì)胞）。
5.用PBS 2-3ml/次輕輕洗細(xì)胞表面，洗3-4次遍，加入0.05%-EDTA1-1.5ml,顯微鏡下觀察細(xì)胞變圓，輕輕拍打培養(yǎng)瓶直到細(xì)胞脫落，加入終止液終止。
6.1000rpm，5min離心，重懸細(xì)胞。
7.換新的細(xì)胞培養(yǎng)瓶，37℃，5%CO2培養(yǎng)。 

NA銣鍶年齡標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)(鉀長石)anti- EIF4H antibody大鼠一氮(NO)ELISA試劑盒

NA硅酸鹽氧同位素標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)anti- EIF5 antibody大鼠P選擇素(P-Selectin/CD62P)ELISA試劑盒

Fmoc-O-tert-butyl-L-tyrosine硅酸鹽同位素標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)氧anti- EIF5A antibody大鼠核因子κB抑制蛋白α(IKBα)ELISA試劑盒

FMOC-O-tert-Butyl-L-threonine炭黑中碳同位素標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)anti- EIF5A2 antibody裸鼠環(huán)加氧酶2(COX-2)ELISA試劑盒

Fmoc-S-acetamidomethyl-L-cysteine炭黑中碳同位素標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)anti- EIF5B antibody裸鼠種胎兒球蛋白/胎蛋白(AFP)ELISA試劑盒

NA碳酸鈣中碳、氧同位素標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)anti- EIF6 antibody裸鼠克拉拉細(xì)胞蛋白(CC16) ELISA試劑盒

9-Fluorenone碳酸鈣中碳、氧同位素標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)anti- ELAC2 antibody裸鼠蛋白酸酶(PP)ELISA試劑盒

HexadecytriMethylaMMoniuM chloride;TriMethylhexadecylaMMoniuM chloride氧同位素標(biāo)準(zhǔn)水樣anti- Elastin antibody倉鼠基質(zhì)金屬蛋白酶9/明膠酶B(MMP-9/Gelatinase B) ELISA試劑盒

人主動脈平滑肌細(xì)胞提取物Enterococcus casseliflavus Collins et al.G蛋白γ5/Gγ5 抗體anti- TOLLIP antibody鈣黏蛋白12(CDH12)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)

Salmonella enterica subsp.enterica (e ..G蛋白γ 1/Gγ 1 抗體anti- TOLLIP antibody矢車菊苷γ3(CENTγ3)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)

Mus musculus, mouse核苷酸結(jié)合蛋白2抗體anti- TOM1 antibody矢車菊苷δ3(CENTδ3)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)

Saccharomyces cerevisiae Meyen ex E.C. Hans ..核苷酸結(jié)合蛋白3樣蛋白抗體anti- TOM1 antibody矢車菊苷δ2(CENTδ2)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)

Homo sapiens, human溶酶體累積病相關(guān)蛋白/口吃相關(guān)蛋白抗體anti- TOM1L1 antibody矢車菊苷δ1(CENTδ1)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)

Mus musculus, mouse釋放激素2抗體anti- TOM20 antibody羧肽酶X1(CPX1)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)

freeze-dried氨基葡萄糖6-硫酸酯酶抗體anti- Tom22 antibody二羥基激酶2(DAK)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)

Saccharomyces cerevisiae Meyen ex E.C. Hans ..高爾基體膜相關(guān)蛋白抗體anti- Tom40 antibody加帽酶2(DCP2)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)

培養(yǎng)步驟：

對于貼壁細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次。
2. 加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察Ⅱ型肺泡上皮細(xì)胞|細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3. 按6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4. 將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。對于懸浮細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細(xì)胞，1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
方法二：可選擇半數(shù)換液方式，棄去半數(shù)培養(yǎng)基后，將剩余細(xì)胞懸起，將細(xì)胞懸液按1：2到1：3的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。