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人神經(jīng)小膠質(zhì)細胞提取物

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產(chǎn)品型號

品       牌其他品牌

廠商性質(zhì)生產(chǎn)商

所  在  地上海市

更新時間:2020-10-22 11:40:30瀏覽次數(shù):155次

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收到細胞如何處理?

1、首先,觀察細胞培養(yǎng)瓶是否完好,培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象。若有,請拍照,(所拍照片將作為后續(xù)服務(wù)依據(jù))。
2、用75%酒精擦拭細胞培養(yǎng)瓶表面,顯微鏡下觀察細胞狀態(tài)。因運輸問題,部分貼壁細胞會有少量從瓶壁脫落;先不要打開培養(yǎng)瓶蓋,將細胞置于細胞培養(yǎng)箱內(nèi)靜置培養(yǎng)2-4小時,以便穩(wěn)定細胞狀態(tài)。
3、仔細閱讀細胞說明書,了解細胞相關(guān)信息,如貼壁特性(貼壁/懸?。?、細胞形態(tài)、所用基礎(chǔ)培養(yǎng)基、血清比例、所需細胞因子、傳代比例、換液頻率等。
4、靜置完成后,取出細胞培養(yǎng)瓶,鏡檢、拍照,記錄細胞狀態(tài)(所拍照片將作為后續(xù)服務(wù)依據(jù));建議細胞傳代培養(yǎng)后,定期拍照、記錄細胞生長狀態(tài)。
5、貼壁細胞:若細胞生長密度超過80%,可正常傳代;若未超過80%,移除細胞培養(yǎng)瓶內(nèi)培養(yǎng)基,預(yù)留5ml左右繼續(xù)培養(yǎng),直至細胞密度達80%左右再進行傳代操作,瓶蓋可稍微擰松。
6、懸浮細胞:將細胞培養(yǎng)瓶內(nèi)液體全部轉(zhuǎn)移至50ml無菌離心管內(nèi),1200rpm離心5min,離心后上清培養(yǎng)基可收集備用,管底細胞沉淀加入5ml培養(yǎng)基吹打、重懸。鏡檢時,若細胞密度超過80%,可將細胞懸液分至2個細胞培養(yǎng)瓶內(nèi)培養(yǎng),補加培養(yǎng)基至5ml;若細胞密度未超過80%,將細胞懸液移至原瓶繼續(xù)培養(yǎng),直至細胞密度達80%左右時再進行傳代操作。

 產(chǎn)品名稱

 規(guī)格

 貨號

 人神經(jīng)小膠質(zhì)細胞提取物

 詳見說明書

XG-X6714

人神經(jīng)小膠質(zhì)細胞提取物 【Human Brain : Normal Nerve Small Glial Cell Derivatives】
人神經(jīng)小膠質(zhì)細胞提取物是從人神經(jīng)小膠質(zhì)細胞提取的,人神經(jīng)小膠質(zhì)細胞從正常人小腦組織制備。正常人小腦組織采集自各地方醫(yī)院,采集工作根據(jù)IRB 和 HIPAA批準的方案進行。所有的產(chǎn)品在發(fā)貨之前均經(jīng)過嚴格的QA/QC流程以確保其質(zhì)量。這些產(chǎn)品可以直接用于基因克隆,表達圖譜分析以及各種分子生物學(xué)實驗的研究。
總RNA制備:利用Qiagen RNeasy Kit的Trizol試劑分離RNA,然后用Qiagen RNA Clean Kit進行純化。公司提供的總RNA樣品附有RNA樣品總濃度、總含量、電泳照片、OD值測定結(jié)果等。

cDNA制備:純化后的總RNA來合成cDNA一鏈,以50ul總反應(yīng)體系進行逆轉(zhuǎn)錄,體系中包括MMLV反轉(zhuǎn)錄酶和隨機引物以及10mg總RNA。68℃反應(yīng)10min 后終止RT反應(yīng)。利用1x RT Buffer 運輸cDNA,1 ul cDNA 足夠做一次PCR反應(yīng)。所有cDNA產(chǎn)品在訂單發(fā)貨之前都經(jīng)過了嚴格的QA/QC分析,保證了產(chǎn)品的質(zhì)量。

蛋白制備:利用改良型RIPA Buffer (50mMTris, pH7.2, 150mM NaCl, 1mM EDTA, 1mM EGTA, 1% NP-40 , 1mM Na3VO4, 5mM NaF, 400uM PMSF, 1ug/ml of Pepstatin A, 5ug/ml of Aprotinin, 5ug/ml of Leupeptin)制備人神經(jīng)小膠質(zhì) 組織裂解液,離心去除組織碎片,通過Bio-Rad蛋白檢測試劑盒測定蛋白濃度,組織蛋白稀釋后用非還原蛋白Buffer (50 mM Tris-HCl, pH 6.8, 5% Glycerol, 1% SDS, 0.002% Bromphenol Blue)添加5%β-巰基乙醇及PMSF,-80度保存。

潛在的應(yīng)用: <1>已知基因的PCR克隆;<2>mRNA選擇性剪接;<3>基因克隆與目標(biāo)測序;<4> Western and Northern Blot;<5>蛋白檢測與蛋白質(zhì)組學(xué);<6>芯片研究與表達圖譜。

 

細胞培養(yǎng)步驟:

一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備:
1) 準備DMEM-H培養(yǎng)基(GIBCO,貨號1199500bt,添加NaHCO3 1.5g/L),90%;胎牛血清,10%。也可根據(jù)實驗需要選擇懸浮培養(yǎng)基,使293T細胞懸浮生長。
2) 培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37攝氏度,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3) 凍存液:90%*培養(yǎng)基,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲存。
二. 細胞處理:
1) 復(fù)蘇細胞:將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜(或?qū)⒓毎麘乙杭尤?0cm皿中,加入約8ml培養(yǎng)基,培養(yǎng)過夜)。第二天換液并檢查細胞密度。
2) 細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養(yǎng)。
對于貼壁細胞,傳代可參考以下方法:
1. 棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。
2. 加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中,置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘,然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況,若細胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3. 按6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基,輕輕打勻后吸出,在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4. 將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3)細胞凍存:待細胞生長狀態(tài)良好時,可進行細胞凍存。貼壁細胞凍存時,棄去培養(yǎng)基后加入少量,細胞變圓脫落后,加入約1ml含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中,再添加10%DMSO后進行凍存。
冷凍保存細胞之方法?
冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ (-20 ℃30 分鐘*) → -80 ℃16~18 小時(或隔夜) → 液氮槽vaporphase 儲存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下, 再放入液氮槽vapor phase儲存。*-20 ℃不可超過1 小時, 以防止冰晶過大,造成細胞大量死亡,亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中,惟存活率稍微降低一些。

BOTTLE CHROMAGAR ORIENTATION 500G鎳Ni溶液標(biāo)準物質(zhì)anti- FBXO9 antibody兔血清總補體(CH50)ELISA試劑盒

Bottle ColuMbia Agar Base鈷Co溶液標(biāo)準物質(zhì)anti- FBXW11 antibody兔酰膽受體抗體(AChRab)ELISA試劑盒

BOTTLE MODIFIED LETHEEN AGAR 500G 4℃鐵Fe溶液標(biāo)準物質(zhì)anti- FBXW2 antibody兔誘導(dǎo)型一氮合成酶(iNOS)ELISA試劑盒

BOTTLE PHYTONE YEAST EXTRACT AGAR 500G錳Mn溶液標(biāo)準物質(zhì)anti- FBXW4 antibody兔熱休克蛋白90(HSP-90)ELISA試劑盒

BOTTLE YEAST EXT GLUCOSE CHLOR 500G錳Mn溶液標(biāo)準物質(zhì)anti- FBXW5 antibody兔熱休克蛋白70(HSP-70)ELISA試劑盒

Brilliant green;DiaMond green G;EMerald green crystal;Malachite green G;C.I. 42040鉻Cr溶液標(biāo)準物質(zhì)anti- FBXW7 antibody兔熱休克蛋白40(HSP-40)ELISA試劑盒

BroMine water釩V溶液標(biāo)準物質(zhì)anti- Fc epsilon RI alpha antibody兔熱休克蛋白20(HSP-20)ELISA試劑盒

BroMoacetic acid;BroMacetic acid釩V溶液標(biāo)準物質(zhì)anti- FCHSD1 antibody兔β淀粉樣蛋白1-40(Aβ1-40)ELISA試劑盒

人神經(jīng)小膠質(zhì)細胞提取物 Saccharomyces cerevisiae Meyen ex E.C. Hans ..G蛋白偶聯(lián)受體172B抗體anti- UBE2J2 antibody核糖核酸酶A10(RNASE10)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)

Serpula himantioides (Fries) Karsten, teleo ..G蛋白轉(zhuǎn)錄因子α3抗體anti- UBE2K antibodyRhotekin 2蛋白(RTKN2)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)

Rhizoctonia repens Bernard, anamorphG蛋白偶聯(lián)受體124抗體(腫瘤血管內(nèi)皮標(biāo)記物)anti- UBE2L3 antibodyN-α-酰轉(zhuǎn)移酶30(NαA30)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)

Podospora anserina (Cesati) Niessl, teleomo ..G蛋白α亞單位蛋白Q抗體anti- UBE2L6 antibodyNotchless蛋白(NLE)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)

Saccharomyces cerevisiae Meyen ex E.C. Hans ..生長因子受體結(jié)合蛋白2相關(guān)接頭蛋白2抗體anti- UBE2O antibodyRho蛋白2(RHPN2)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)

Saccharomyces cerevisiae Meyen ex E.C. Hans ..葡萄糖轉(zhuǎn)運蛋白8抗體anti- UBE2Q2 antibody脫酶13(RDH13)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)

Saccharomyces cerevisiae Meyen ex E.C. Hans ..G蛋白偶聯(lián)受體GPR91蛋白抗體anti- UBE2S antibody脫酶14(RDH14)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)

Vuilleminia comedens (Fries) Maire特異性囊腫病液體蛋白15抗體anti- UBE2T/HSPC150 antibody腺苷酸激酶7(AK7)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)

公司產(chǎn)品采用干冰運輸,經(jīng)過逐步的降溫,冷藏在-196℃度的液氮罐中,暫時停止其生命活動,保存其活性,使您的實驗更生動,公司代理品牌有:ATCC、sciencell、ICLC、GIBCO、IST-Banca等品牌.

公司產(chǎn)品采用干冰運輸,經(jīng)過逐步的降溫,冷藏在-196℃度的液氮罐中,暫時停止其生命活動,保存其活性,使您的實驗更生動,公司代理品牌有:ATCC、sciencell、ICLC、GIBCO、IST-Banca等品牌.

 

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