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人呼吸道上皮細(xì)胞提取物

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產(chǎn)品型號

品       牌其他品牌

廠商性質(zhì)生產(chǎn)商

所  在  地上海市

更新時(shí)間:2020-10-22 11:45:26瀏覽次數(shù):350次

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 產(chǎn)品名稱

 規(guī)格

 貨號

 人呼吸道上皮細(xì)胞提取物

 詳見說明書

XG-X6655

人呼吸道上皮細(xì)胞提取物【Human Airway: Normal Airway Epithelial Cell Derivatives】
人呼吸道上皮細(xì)胞提取物是從人原代呼吸道上皮細(xì)胞提取的,人原代呼吸道上皮細(xì)胞從正常人呼吸道上皮組織制備。正常人呼吸道上皮組織采集自各地方醫(yī)院,采集工作根據(jù)IRB 和 HIPAA批準(zhǔn)的方案進(jìn)行。所有的產(chǎn)品在發(fā)貨之前均經(jīng)過嚴(yán)格的QA/QC流程以確保其質(zhì)量。這些產(chǎn)品可以直接用于基因克隆,表達(dá)圖譜分析以及各種分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)的研究。
總RNA制備:利用Qiagen RNeasy Kit的Trizol試劑分離RNA,然后用Qiagen RNA Clean Kit進(jìn)行純化。公司提供的總RNA樣品附有RNA樣品總濃度、總含量、電泳照片、OD值測定結(jié)果等。

cDNA制備:純化后的總RNA來合成cDNA一鏈,以50ul總反應(yīng)體系進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄,體系中包括MMLV反轉(zhuǎn)錄酶和隨機(jī)引物以及10mg總RNA。68℃反應(yīng)10min 后終止RT反應(yīng)。利用1x RT Buffer 運(yùn)輸cDNA,1 ul cDNA 足夠做一次PCR反應(yīng)。所有cDNA產(chǎn)品在訂單發(fā)貨之前都經(jīng)過了嚴(yán)格的QA/QC分析,保證了產(chǎn)品的質(zhì)量。

蛋白制備:利用改良型RIPA Buffer (50mMTris, pH7.2, 150mM NaCl, 1mM EDTA, 1mM EGTA, 1% NP-40 , 1mM Na3VO4, 5mM NaF, 400uM PMSF, 1ug/ml of Pepstatin A, 5ug/ml of Aprotinin, 5ug/ml of Leupeptin)制備人呼吸道上皮組織裂解液,離心去除組織碎片,通過Bio-Rad蛋白檢測試劑盒測定蛋白濃度,組織蛋白稀釋后用非還原蛋白Buffer (50 mM Tris-HCl, pH 6.8, 5% Glycerol, 1% SDS, 0.002% Bromphenol Blue)添加5%β-巰基乙醇及PMSF,-80度保存。

潛在的應(yīng)用: <1>已知基因的PCR克隆;<2>mRNA選擇性剪接;<3>基因克隆與目標(biāo)測序;<4> Western and Northern Blot;<5>蛋白檢測與蛋白質(zhì)組學(xué);<6>芯片研究與表達(dá)圖譜。

 

冷凍保存細(xì)胞之方法?
冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ (-20 ℃30 分鐘*) → -80 ℃16~18 小時(shí)(或隔夜) → 液氮槽vaporphase 儲(chǔ)存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機(jī)中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下, 再放入液氮槽vapor phase儲(chǔ)存。*-20 ℃不可超過1 小時(shí), 以防止冰晶過大,造成細(xì)胞大量死亡,亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中,惟存活率稍微降低一些。

細(xì)胞培養(yǎng)步驟:

一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:
1) 準(zhǔn)備DMEM-H培養(yǎng)基(GIBCO,貨號1199500bt,添加NaHCO3 1.5g/L),90%;胎牛血清,10%。也可根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要選擇懸浮培養(yǎng)基,使293T細(xì)胞懸浮生長。
2) 培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37攝氏度,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3) 凍存液:90%*培養(yǎng)基,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲(chǔ)存。
二. 細(xì)胞處理:
1) 復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜(或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10cm皿中,加入約8ml培養(yǎng)基,培養(yǎng)過夜)。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2) 細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對于貼壁細(xì)胞,傳代可參考以下方法:
1. 棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次。
2. 加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中,置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘,然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況,若細(xì)胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺(tái),輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3. 按6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基,輕輕打勻后吸出,在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4. 將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3)細(xì)胞凍存:待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時(shí),可進(jìn)行細(xì)胞凍存。貼壁細(xì)胞凍存時(shí),棄去培養(yǎng)基后加入少量,細(xì)胞變圓脫落后,加入約1ml含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中,再添加10%DMSO后進(jìn)行凍存。

收到細(xì)胞如何處理?

1、首先,觀察細(xì)胞培養(yǎng)瓶是否完好,培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象。若有,請拍照,(所拍照片將作為后續(xù)服務(wù)依據(jù))。
2、用75%酒精擦拭細(xì)胞培養(yǎng)瓶表面,顯微鏡下觀察細(xì)胞狀態(tài)。因運(yùn)輸問題,部分貼壁細(xì)胞會(huì)有少量從瓶壁脫落;先不要打開培養(yǎng)瓶蓋,將細(xì)胞置于細(xì)胞培養(yǎng)箱內(nèi)靜置培養(yǎng)2-4小時(shí),以便穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)。
3、仔細(xì)閱讀細(xì)胞說明書,了解細(xì)胞相關(guān)信息,如貼壁特性(貼壁/懸?。⒓?xì)胞形態(tài)、所用基礎(chǔ)培養(yǎng)基、血清比例、所需細(xì)胞因子、傳代比例、換液頻率等。
4、靜置完成后,取出細(xì)胞培養(yǎng)瓶,鏡檢、拍照,記錄細(xì)胞狀態(tài)(所拍照片將作為后續(xù)服務(wù)依據(jù));建議細(xì)胞傳代培養(yǎng)后,定期拍照、記錄細(xì)胞生長狀態(tài)。
5、貼壁細(xì)胞:若細(xì)胞生長密度超過80%,可正常傳代;若未超過80%,移除細(xì)胞培養(yǎng)瓶內(nèi)培養(yǎng)基,預(yù)留5ml左右繼續(xù)培養(yǎng),直至細(xì)胞密度達(dá)80%左右再進(jìn)行傳代操作,瓶蓋可稍微擰松。
6、懸浮細(xì)胞:將細(xì)胞培養(yǎng)瓶內(nèi)液體全部轉(zhuǎn)移至50ml無菌離心管內(nèi),1200rpm離心5min,離心后上清培養(yǎng)基可收集備用,管底細(xì)胞沉淀加入5ml培養(yǎng)基吹打、重懸。鏡檢時(shí),若細(xì)胞密度超過80%,可將細(xì)胞懸液分至2個(gè)細(xì)胞培養(yǎng)瓶內(nèi)培養(yǎng),補(bǔ)加培養(yǎng)基至5ml;若細(xì)胞密度未超過80%,將細(xì)胞懸液移至原瓶繼續(xù)培養(yǎng),直至細(xì)胞密度達(dá)80%左右時(shí)再進(jìn)行傳代操作。
公司產(chǎn)品采用干冰運(yùn)輸,經(jīng)過逐步的降溫,冷藏在-196℃度的液氮罐中,暫時(shí)停止其生命活動(dòng),保存其活性,使您的實(shí)驗(yàn)更生動(dòng),公司代理品牌有:ATCC、sciencell、ICLC、GIBCO、IST-Banca等品牌.

1,1,2,2-Tetrachloroethane水中化物標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)(標(biāo)樣)anti- DYNLT3 antibody大鼠腫瘤壞死因子相關(guān)凋亡誘導(dǎo)配體4(TRAIL-R4)ELISA試劑盒

POTASSIUM TETRABORATE TETRAHYDRATE汞(Hg)標(biāo)準(zhǔn)溶液anti- DYRK1B antibody大鼠可溶性腫瘤壞死因子相關(guān)凋亡誘導(dǎo)配體(sTRAIL)ELISA試劑盒

NA砷(As)標(biāo)準(zhǔn)溶液anti- DYRK4 antibody大鼠型纖溶酶原激活物(uPA)ELISA試劑盒

TETRAHYDROXY-1,4-BENZOQUINONE DISODIUM SALT錳(Mn)標(biāo)準(zhǔn)溶液anti- Dysadherin antibody大鼠型纖溶酶原激活物受體(PLAUR/uPAR)ELISA試劑盒

Tetrakis(hydroxymethyl)phosphonium chloride化物(CN)標(biāo)準(zhǔn)溶液anti- Dysbindin antibody大鼠白介素12(IL-12/P70)ELISA試劑盒

2-Tetrahydrofuroic acid無煙煤物理特性和化學(xué)成分分析標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)anti- Dystroglycan antibody大鼠血管內(nèi)皮細(xì)胞生長因子B(VEGF-B)ELISA試劑盒

1,2,3,4-Tetrahydronaphthalene;Tetranap煤物理性質(zhì)和化學(xué)成分分析標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)anti- DYX1C1 antibody大鼠白介素12(IL-12/P40)ELISA試劑盒

Tetrahydrothiophen-3-one煤物理性質(zhì)和化學(xué)成分分析標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)anti- DZIP1 antibody大鼠血管內(nèi)皮細(xì)胞生長因子C(VEGF-C)ELISA試劑盒

人呼吸道上皮細(xì)胞提取物Cochliobolus heterostrophus Drechsler, tele ..纖維母細(xì)胞生長因子5抗體anti- TLE3 antibody葡萄糖-6-酸酶催化亞基(G6PC)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)

freeze-dried鼠疫F1蛋白/鼠疫耶爾森氏菌莢膜抗原F1單克隆抗體anti- TLE3 antibody粘蛋白20(MUC20)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)

freeze-dried叉頭蛋白P1抗體anti- TLE3 antibody阿米洛利敏感鈉離子通道蛋白1α(SCNN1α)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)

Fusarium oxysporum Schlechtendahl, anamorph成纖維細(xì)胞生長因子受體3抗體anti- TLK1 antibody核苷酸還原酶M1(RRM1)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)

frozenGATA結(jié)合蛋白1伴侶蛋白抗體anti- TLK2 antibody蛋白酶33(PRSS33)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)

frozenF-box蛋白21抗體anti- TLR2 antibody腫瘤壞死因子受體超家族成員1A(TNFRSF1A)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)

Nocardia brevicatena (Lechevalier et al.) G ..FBXO4蛋白抗體anti- TLR3 antibody腫瘤壞死因子受體超家族成員1B(TNFRSF1B)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)

Homo sapiens, human前列腺素E受體4相關(guān)蛋白抗體anti- TLR4 antibody甘氨酰tRNA合成酶(GARS)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)

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