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廠商性質(zhì)生產(chǎn)商
所 在 地上海市
更新時間:2020-10-22 11:46:17瀏覽次數(shù):183次
聯(lián)系我時,請告知來自 環(huán)保在線公司產(chǎn)品采用干冰運(yùn)輸,經(jīng)過逐步的降溫,冷藏在-196℃度的液氮罐中,暫時停止其生命活動,保存其活性,使您的實驗更生動,公司代理品牌有:ATCC、sciencell、ICLC、GIBCO、IST-Banca等品牌.
產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 | 貨號 |
人心肌成纖維細(xì)胞提取物 | 詳見說明書 | XG-X6675 |
人心肌成纖維細(xì)胞提取物【Human Cardiac: Normal Cardiac Fibroblast Cell Derivatives】
人心肌成纖維細(xì)胞提取物是從人原代心肌成纖維細(xì)胞提取的,人原代心肌成纖維細(xì)胞從正常人心肌組織制備。正常人心肌成組織采集自各地方醫(yī)院,采集工作根據(jù)IRB 和 HIPAA批準(zhǔn)的方案進(jìn)行。所有的產(chǎn)品在發(fā)貨之前均經(jīng)過嚴(yán)格的QA/QC流程以確保其質(zhì)量。這些產(chǎn)品可以直接用于基因克隆,表達(dá)圖譜分析以及各種分子生物學(xué)實驗的研究。
總RNA制備:利用Qiagen RNeasy Kit的Trizol試劑分離RNA,然后用Qiagen RNA Clean Kit進(jìn)行純化。公司提供的總RNA樣品附有RNA樣品總濃度、總含量、電泳照片、OD值測定結(jié)果等。
cDNA制備:純化后的總RNA來合成cDNA一鏈,以50ul總反應(yīng)體系進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄,體系中包括MMLV反轉(zhuǎn)錄酶和隨機(jī)引物以及10mg總RNA。68℃反應(yīng)10min 后終止RT反應(yīng)。利用1x RT Buffer 運(yùn)輸cDNA,1 ul cDNA 足夠做一次PCR反應(yīng)。所有cDNA產(chǎn)品在訂單發(fā)貨之前都經(jīng)過了嚴(yán)格的QA/QC分析,保證了產(chǎn)品的質(zhì)量。
蛋白制備:利用改良型RIPA Buffer (50mMTris, pH7.2, 150mM NaCl, 1mM EDTA, 1mM EGTA, 1% NP-40 , 1mM Na3VO4, 5mM NaF, 400uM PMSF, 1ug/ml of Pepstatin A, 5ug/ml of Aprotinin, 5ug/ml of Leupeptin)制備人心肌成纖維組織裂解液,離心去除組織碎片,通過Bio-Rad蛋白檢測試劑盒測定蛋白濃度,組織蛋白稀釋后用非還原蛋白Buffer (50 mM Tris-HCl, pH 6.8, 5% Glycerol, 1% SDS, 0.002% Bromphenol Blue)添加5%β-巰基乙醇及PMSF,-80度保存。
潛在的應(yīng)用: <1>已知基因的PCR克??;<2>mRNA選擇性剪接;<3>基因克隆與目標(biāo)測序;<4> Western and Northern Blot;<5>蛋白檢測與蛋白質(zhì)組學(xué);<6>芯片研究與表達(dá)圖譜。
細(xì)胞培養(yǎng)步驟:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:
1) 準(zhǔn)備DMEM-H培養(yǎng)基(GIBCO,貨號1199500bt,添加NaHCO3 1.5g/L),90%;胎牛血清,10%。也可根據(jù)實驗需要選擇懸浮培養(yǎng)基,使293T細(xì)胞懸浮生長。
2) 培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37攝氏度,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3) 凍存液:90%*培養(yǎng)基,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲存。
二. 細(xì)胞處理:
1) 復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜(或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10cm皿中,加入約8ml培養(yǎng)基,培養(yǎng)過夜)。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2) 細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對于貼壁細(xì)胞,傳代可參考以下方法:
1. 棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次。
2. 加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中,置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘,然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況,若細(xì)胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3. 按6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基,輕輕打勻后吸出,在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4. 將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3)細(xì)胞凍存:待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時,可進(jìn)行細(xì)胞凍存。貼壁細(xì)胞凍存時,棄去培養(yǎng)基后加入少量,細(xì)胞變圓脫落后,加入約1ml含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中,再添加10%DMSO后進(jìn)行凍存。
冷凍保存細(xì)胞之方法?
冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ (-20 ℃30 分鐘*) → -80 ℃16~18 小時(或隔夜) → 液氮槽vaporphase 儲存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機(jī)中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下, 再放入液氮槽vapor phase儲存。*-20 ℃不可超過1 小時, 以防止冰晶過大,造成細(xì)胞大量死亡,亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中,惟存活率稍微降低一些。
Adenosine 5'-triphosphate disodium salt硅單晶電阻率標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)anti- ELOVL4 antibody豚鼠超物歧化酶(SOD)ELISA試劑盒
Nitrobenzene硅單晶電阻率標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)anti- ELOVL6 antibody豚鼠組胺(HIS)ELISA試劑盒
CACOTHELINE硅單晶電阻率標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)anti- ELP4 antibody豚鼠轉(zhuǎn)化生長因子β1(TGF-β1)ELISA試劑盒
Nitroethane硅單晶電阻率標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)anti- EMAP II antibody豚鼠腫瘤壞死因子α(TNF-α)ELISA試劑盒
Nitric acid;噻節(jié)因anti- EMB antibody豚鼠生長激素(GH)ELISA試劑盒
BariuM nitrate雙苯酰草胺anti- EME1 antibody豚鼠內(nèi)皮素1(ET-1)ELISA試劑盒
Bismuth nitrate pentahydrate氟硫草定anti- Emerin antibody豚鼠免疫球蛋白E(IgE)ELISA試劑盒
Calcium nitrate tetrahydrate烯氟靈anti- EMG1 antibody豚鼠免疫球蛋白A(IgA)ELISA試劑盒
人心肌成纖維細(xì)胞提取物Azorhizophilus paspali (Dobereiner) Thompso ..3-酸甘油?;D(zhuǎn)移酶2抗體anti- TORC1 antibody多肽-N-酰氨基半乳糖轉(zhuǎn)移酶6(GALNT6)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)
Mus musculus, mouseG蛋白修補(bǔ)結(jié)構(gòu)域蛋白4抗體anti- Torsin A antibody腎胱素7(NPHP7)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)
frozen富含GC啟動子結(jié)合蛋白1/血管壁相連蛋白抗體anti- TOX2 antibody顆粒酶H(GZMH)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)
Ophiostoma ips (Rumbold) Nannfeldt, teleomo ..血管壁相連蛋白樣蛋白1抗體anti- TP53 antibodyCupidin蛋白(CPD)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)
Mus musculus, mouse Target Gene: serine/thr ..G蛋白偶聯(lián)受體151抗體anti- TP53INP1 antibodyJagged 2蛋白(JAG2)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)
Penicillium pseudostromaticum Hodges et al. ..G蛋白偶聯(lián)受體77抗體anti- TP63 antibodyLaforin蛋白(LDE)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)
Streptomyces hygroscopicus subsp.ascomyce ..G蛋白偶聯(lián)受體7抗體anti- tPA antibodyTricellulin蛋白(TRIC)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)
freeze-driedG蛋白偶聯(lián)受體84抗體anti- TPCN1 antibodyMuskelin 1蛋白(MKLN1)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)
收到細(xì)胞如何處理?
1、首先,觀察細(xì)胞培養(yǎng)瓶是否完好,培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象。若有,請拍照,(所拍照片將作為后續(xù)服務(wù)依據(jù))。
2、用75%酒精擦拭細(xì)胞培養(yǎng)瓶表面,顯微鏡下觀察細(xì)胞狀態(tài)。因運(yùn)輸問題,部分貼壁細(xì)胞會有少量從瓶壁脫落;先不要打開培養(yǎng)瓶蓋,將細(xì)胞置于細(xì)胞培養(yǎng)箱內(nèi)靜置培養(yǎng)2-4小時,以便穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)。
3、仔細(xì)閱讀細(xì)胞說明書,了解細(xì)胞相關(guān)信息,如貼壁特性(貼壁/懸?。?、細(xì)胞形態(tài)、所用基礎(chǔ)培養(yǎng)基、血清比例、所需細(xì)胞因子、傳代比例、換液頻率等。
4、靜置完成后,取出細(xì)胞培養(yǎng)瓶,鏡檢、拍照,記錄細(xì)胞狀態(tài)(所拍照片將作為后續(xù)服務(wù)依據(jù));建議細(xì)胞傳代培養(yǎng)后,定期拍照、記錄細(xì)胞生長狀態(tài)。
5、貼壁細(xì)胞:若細(xì)胞生長密度超過80%,可正常傳代;若未超過80%,移除細(xì)胞培養(yǎng)瓶內(nèi)培養(yǎng)基,預(yù)留5ml左右繼續(xù)培養(yǎng),直至細(xì)胞密度達(dá)80%左右再進(jìn)行傳代操作,瓶蓋可稍微擰松。
6、懸浮細(xì)胞:將細(xì)胞培養(yǎng)瓶內(nèi)液體全部轉(zhuǎn)移至50ml無菌離心管內(nèi),1200rpm離心5min,離心后上清培養(yǎng)基可收集備用,管底細(xì)胞沉淀加入5ml培養(yǎng)基吹打、重懸。鏡檢時,若細(xì)胞密度超過80%,可將細(xì)胞懸液分至2個細(xì)胞培養(yǎng)瓶內(nèi)培養(yǎng),補(bǔ)加培養(yǎng)基至5ml;若細(xì)胞密度未超過80%,將細(xì)胞懸液移至原瓶繼續(xù)培養(yǎng),直至細(xì)胞密度達(dá)80%左右時再進(jìn)行傳代操作。
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