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人冠狀動脈內(nèi)皮細胞提取物

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產(chǎn)品型號

品       牌其他品牌

廠商性質(zhì)生產(chǎn)商

所  在  地上海市

更新時間:2020-10-22 11:57:35瀏覽次數(shù):151次

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人冠狀動脈內(nèi)皮細胞提取物
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操作要點:
1)將培養(yǎng)基在37℃水浴鍋預(yù)熱;準備一個15mL無菌的離心管,加入8mL預(yù)熱培養(yǎng)基。
2)將凍存細胞從液氮罐中取出,快速放入37℃水浴鍋中復(fù)溫(可準備一潔凈的燒杯,裝滿37℃的水,細胞凍存管取出后迅速放入燒杯內(nèi),再逐步轉(zhuǎn)移到水浴鍋中)。輕輕晃動凍存管,使細胞能在1~2min內(nèi)*解凍,使細胞能盡快通過易受損的溫度段(-5~0℃)。注意凍存管管口不能沒入水中,BRL(大鼠肝細胞)避免引起污染。
3)用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺內(nèi),將管內(nèi)細胞轉(zhuǎn)移至準備好的離心管內(nèi),輕輕吹打液體,使細胞均勻分散,降低DMSO濃度,吹打時避免產(chǎn)生氣泡。用新鮮培養(yǎng)基洗管壁2次,均轉(zhuǎn)移至離心管內(nèi)。
4)800rpm離心5min,棄上清,加入新鮮的培養(yǎng)基,吹打制成細胞懸液。
5)將細胞懸液轉(zhuǎn)移至T25細胞瓶內(nèi),補加適量的培養(yǎng)基,輕輕晃動細胞瓶使細胞分布均勻,放入溫箱內(nèi)培養(yǎng)。
6)第二天觀察細胞貼壁生長情況,換新鮮培養(yǎng)基以去除死細胞。繼續(xù)培養(yǎng),待細胞長至80~90%匯合時正常傳代。一般剛復(fù)蘇的細胞需經(jīng)過2~3次傳代,細胞活力恢復(fù)后才能進行后續(xù)的實驗。

人冠狀動脈內(nèi)皮細胞提取物【Human Coronary Artery: Normal Aortic Endothelial cells Derivatives】
人冠狀動脈內(nèi)皮細胞提取物是從人原代冠狀動脈內(nèi)皮細胞提取的,人原代冠狀動脈內(nèi)皮細胞從正常人冠狀動脈內(nèi)皮組織制備。正常人冠狀動脈內(nèi)皮組織采集自各地方醫(yī)院,采集工作根據(jù)IRB 和 HIPAA批準的方案進行。所有的產(chǎn)品在發(fā)貨之前均經(jīng)過嚴格的QA/QC流程以確保其質(zhì)量。這些產(chǎn)品可以直接用于基因克隆,表達圖譜分析以及各種分子生物學(xué)實驗的研究。
總RNA制備:利用Qiagen RNeasy Kit的Trizol試劑分離RNA,然后用Qiagen RNA Clean Kit進行純化。公司提供的總RNA樣品附有RNA樣品總濃度、總含量、電泳照片、OD值測定結(jié)果等。

cDNA制備:純化后的總RNA來合成cDNA一鏈,以50ul總反應(yīng)體系進行逆轉(zhuǎn)錄,體系中包括MMLV反轉(zhuǎn)錄酶和隨機引物以及10mg總RNA。68℃反應(yīng)10min 后終止RT反應(yīng)。利用1x RT Buffer 運輸cDNA,1 ul cDNA 足夠做一次PCR反應(yīng)。所有cDNA產(chǎn)品在訂單發(fā)貨之前都經(jīng)過了嚴格的QA/QC分析,保證了產(chǎn)品的質(zhì)量。

蛋白制備:利用改良型RIPA Buffer (50mMTris, pH7.2, 150mM NaCl, 1mM EDTA, 1mM EGTA, 1% NP-40 , 1mM Na3VO4, 5mM NaF, 400uM PMSF, 1ug/ml of Pepstatin A, 5ug/ml of Aprotinin, 5ug/ml of Leupeptin)制備人冠狀動脈內(nèi)皮組織裂解液,離心去除組織碎片,通過Bio-Rad蛋白檢測試劑盒測定蛋白濃度,組織蛋白稀釋后用非還原蛋白Buffer (50 mM Tris-HCl, pH 6.8, 5% Glycerol, 1% SDS, 0.002% Bromphenol Blue)添加5%β-巰基乙醇及PMSF,-80度保存。

潛在的應(yīng)用: <1>已知基因的PCR克?。?lt;2>mRNA選擇性剪接;<3>基因克隆與目標測序;<4> Western and Northern Blot;<5>蛋白檢測與蛋白質(zhì)組學(xué);<6>芯片研究與表達圖譜。

產(chǎn)品名稱

 人冠狀動脈內(nèi)皮細胞提取物

 規(guī)格

 詳見說明書

 貨號

 XG-X6668

 

注意事項:
1. 接收到細胞,肉眼觀察細胞培養(yǎng)基顏色,顯微鏡觀察細胞生長情況,并對細胞進行不同倍數(shù)拍照(建議收到時的培養(yǎng)瓶拍一張照片,顯微鏡拍收到時的細胞100X,200X各一張)。
2.用75%的酒精消毒(建議配置75%的酒精的水是滅菌過的)。
3.嚴格無菌操作,打開細胞培養(yǎng)瓶。
4.將細胞培養(yǎng)瓶內(nèi)的培養(yǎng)基用吸管*吸出(嚴禁直接傾倒),放入另一無菌容器中(建議換新的培養(yǎng)基培養(yǎng)細胞)。
5.用PBS 2-3ml/次輕輕洗細胞表面,洗3-4次遍,加入0.05%-EDTA1-1.5ml,顯微鏡下觀察細胞變圓,輕輕拍打培養(yǎng)瓶直到細胞脫落,加入終止液終止。
6.1000rpm,5min離心,重懸細胞。
7.換新的細胞培養(yǎng)瓶,37℃,5%CO2培養(yǎng)。

培養(yǎng)步驟:

對于貼壁細胞,傳代可參考以下方法:
1. 棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。
2. 加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中,置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘,然后在顯微鏡下觀察Ⅱ型肺泡上皮細胞|細胞消化情況,若細胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3. 按6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基,輕輕打勻后吸出,在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4. 將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。對于懸浮細胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細胞,1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
方法二:可選擇半數(shù)換液方式,棄去半數(shù)培養(yǎng)基后,將剩余細胞懸起,將細胞懸液按1:2到1:3的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

Cobalt chloride硅單晶電阻率標準物質(zhì)anti- EIF2B2 antibody大鼠血小板衍生生長因子AB(PDGF-AB)ELISA試劑盒

Lithium chloride硅單晶電阻率標準物質(zhì)anti- EIF2B3 antibody大鼠血小板衍生生長因子可溶性受體α(PDGFsR-α)ELISA試劑盒

Magnesium chloride硅單晶電阻率標準物質(zhì)anti- EIF2B4 antibody大鼠神經(jīng)營養(yǎng)因子4(NT-4)ELISA試劑盒

Tin(Ⅱ)chloride anhydrous顯微鏡光度計用反射率標準物質(zhì)anti- EIF2C1-Specific antibody大鼠神經(jīng)營養(yǎng)因子3(NT-3)ELISA試劑盒

1,4-Diazacyclohexane顯微鏡光度計用反射率標準物質(zhì)anti- EIF2C3-Specific antibody大鼠神經(jīng)生長因子(NGF)ELISA試劑盒

Ruthenium trichloride中國系列標準海水a(chǎn)nti- EIF2S1 antibody大鼠巨噬細胞炎性蛋白3α(MIP-3α/CCL20)ELISA試劑盒

Ferric chloride中國標準海水a(chǎn)nti- EIF2S2 antibody大鼠層連蛋白/板層素(LN)ELISA試劑盒

Sodium selenate煤物理性質(zhì)和化學(xué)成分分析標準物質(zhì)anti- EIF2S3 antibody大鼠白介素6(IL-6)ELISA試劑盒

人冠狀動脈內(nèi)皮細胞提取物Homo sapiens, human巖藻糖轉(zhuǎn)移酶2抗體anti- TNF-alpha antibody翻譯調(diào)節(jié)腫瘤蛋白1(TPT1)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)

Homo sapiens, human免疫球蛋白A Fc段受體1抗體anti- TNFR1 antibody成纖維細胞生長因子9(FGF9)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)

Saccharomyces cerevisiae Meyen ex E.C. Hans ..脂肪酸延長酶抗體anti- TNFR1 antibody纖維膠凝蛋白1(FCN1)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)

frozen酸化雷帕霉素靶蛋白抗體anti- TNFR2 antibody整合素β6(ITGβ6)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)

Saccharomyces cerevisiae Meyen ex E.C. Hans ..叉頭蛋白O3A抗體anti- TNFRSF13B antibody核糖核酸酶A(RNASE1)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)

frozen叉頭蛋白M1抗體anti- TNFRSF6B antibody脂肪酸合酶(FASN)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)

Homo sapiens, human纖維束1抗體anti- TNFSF12 antibody汗酸酶αL(IDUα)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)

Saccharomyces cerevisiae Meyen ex E.C. Hans ..FAS凋亡抑制分子3抗體anti- TNFSF13 antibody促凋亡蛋白1(APOPT1)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)

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