人結腸癌組織源細胞提取物【Human Cancer: Colon Cancer Tissues Cells Derivatives】
人結腸癌組織源細胞提取物是從人原代結腸癌組織源細胞提取的，人原代結腸癌組織源細胞從人結腸癌組織制備。人結腸組織采集自各地方醫(yī)院，采集工作根據IRB 和 HIPAA批準的方案進行。所有的產品在發(fā)貨之前均經過嚴格的QA/QC流程以確保其質量。這些產品可以直接用于基因克隆，表達圖譜分析以及各種分子生物學實驗的研究。
總RNA制備：利用Qiagen RNeasy Kit的Trizol試劑分離RNA，然后用Qiagen RNA Clean Kit進行純化。公司提供的總RNA樣品附有RNA樣品總濃度、總含量、電泳照片、OD值測定結果等。

cDNA制備：純化后的總RNA來合成cDNA一鏈，以50ul總反應體系進行逆轉錄，體系中包括MMLV反轉錄酶和隨機引物以及10mg總RNA。68℃反應10min 后終止RT反應。利用1x RT Buffer 運輸cDNA，1 ul cDNA 足夠做一次PCR反應。所有cDNA產品在訂單發(fā)貨之前都經過了嚴格的QA/QC分析，保證了產品的質量。

蛋白制備：利用改良型RIPA Buffer (50mMTris, pH7.2, 150mM NaCl, 1mM EDTA, 1mM EGTA, 1% NP-40 , 1mM Na3VO4, 5mM NaF, 400uM PMSF, 1ug/ml of Pepstatin A, 5ug/ml of Aprotinin, 5ug/ml of Leupeptin)制備人結腸癌組織源組織裂解液，離心去除組織碎片，通過Bio-Rad蛋白檢測試劑盒測定蛋白濃度，組織蛋白稀釋后用非還原蛋白Buffer (50 mM Tris-HCl, pH 6.8, 5% Glycerol, 1% SDS, 0.002% Bromphenol Blue)添加5%β-巰基乙醇及PMSF，-80度保存。

潛在的應用： <1>已知基因的PCR克?。?lt;2>mRNA選擇性剪接；<3>基因克隆與目標測序；<4> Western and Northern Blot；<5>蛋白檢測與蛋白質組學；<6>芯片研究與表達圖譜。

操作要點：
1）將培養(yǎng)基在37℃水浴鍋預熱；準備一個15mL無菌的離心管，加入8mL預熱培養(yǎng)基。
2）將凍存細胞從液氮罐中取出，快速放入37℃水浴鍋中復溫（可準備一潔凈的燒杯，裝滿37℃的水，細胞凍存管取出后迅速放入燒杯內，再逐步轉移到水浴鍋中）。輕輕晃動凍存管，使細胞能在1~2min內*解凍，使細胞能盡快通過易受損的溫度段（-5~0℃）。注意凍存管管口不能沒入水中，BRL(大鼠肝細胞)避免引起污染。
3）用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺內，將管內細胞轉移至準備好的離心管內，輕輕吹打液體，使細胞均勻分散，降低DMSO濃度，吹打時避免產生氣泡。用新鮮培養(yǎng)基洗管壁2次，均轉移至離心管內。
4）800rpm離心5min，棄上清，加入新鮮的培養(yǎng)基，吹打制成細胞懸液。
5）將細胞懸液轉移至T25細胞瓶內，補加適量的培養(yǎng)基，輕輕晃動細胞瓶使細胞分布均勻，放入溫箱內培養(yǎng)。
6）第二天觀察細胞貼壁生長情況，換新鮮培養(yǎng)基以去除死細胞。繼續(xù)培養(yǎng)，待細胞長至80~90%匯合時正常傳代。一般剛復蘇的細胞需經過2~3次傳代，細胞活力恢復后才能進行后續(xù)的實驗。
注意事項：
1. 接收到細胞，肉眼觀察細胞培養(yǎng)基顏色，顯微鏡觀察細胞生長情況，并對細胞進行不同倍數拍照（建議收到時的培養(yǎng)瓶拍一張照片，顯微鏡拍收到時的細胞100X,200X各一張）。
2.用75%的酒精消毒（建議配置75%的酒精的水是滅菌過的）。
3.嚴格無菌操作，打開細胞培養(yǎng)瓶。
4.將細胞培養(yǎng)瓶內的培養(yǎng)基用吸管*吸出（嚴禁直接傾倒），放入另一無菌容器中（建議換新的培養(yǎng)基培養(yǎng)細胞）。
5.用PBS 2-3ml/次輕輕洗細胞表面，洗3-4次遍，加入0.05%-EDTA1-1.5ml,顯微鏡下觀察細胞變圓，輕輕拍打培養(yǎng)瓶直到細胞脫落，加入終止液終止。
6.1000rpm，5min離心，重懸細胞。
7.換新的細胞培養(yǎng)瓶，37℃，5%CO2培養(yǎng)。 

Dicyclohexyl phthalate;Dicyclohexyl-o-phthalate;DCHP水系沉積物成分分析標準物質anti- FOXO6 antibody猴白介素4(IL-4)ELISA試劑盒

Dienestrol; 4,4′-Dihydroxy-γ,δ-diphenyl-β,δ-hexadiene; 4,4′-(1,2-Diethylidene-1,2-ethanediyl)bisphenol; 4,4′-(Diethylidene ethylene)diphenol; Di(p-oxyphenyl)-2,4-hexadiene; Estrodienol; Oestrora;水系沉積物成分分析標準物質anti- FOXP1 antibody猴白介素2(IL-2)ELISA試劑盒

DiethanolaMine;DiethylolaMine;Bis(hydroxyethyl)aMine水系沉積物成分分析標準物質anti- FOXP2 antibody猴Ⅳ型膠原(Col Ⅳ)ELISA試劑盒

Diethyl acetaMidoMalonate水系沉積物成分分析標準物質anti- FOXP3 antibody猴Ⅲ型前膠原肽(PⅢNP)ELISA試劑盒

Diethyl azelate;Ethyl azelate; Azelaic acid diethyl ester;人發(fā)粉成分分析標準物質anti- FOXP3 antibody猴透明質酸(HA)ELISA試劑盒

Diethyl carbonate;Carbonic acid diethyl ester黃芪成分分析標準物質anti- FOXP4 antibody猴β2微球蛋白(BMG/β2-MG)ELISA試劑盒

Diethyl Phthalate人參成分分析標準物質anti- FOXQ1 antibody猴B病(BV)ELISA試劑盒

Diethyl p-phthalate;Ethyl terephthalate花粉成分分析標準物質anti- FOXR1 antibody猴載脂蛋白B100(apo-B100)ELISA試劑盒

人結腸癌組織源細胞提取物Streptococcus pyogenes Rosenbach甘油酸二酯酶酸結構域3抗體anti- USP5 antibody細胞周期素I2(CCNI2)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)

Phellinus igniarius (Fries) Quelet環(huán)指蛋白27抗體anti- USP5 antibody血管緊張素1-9(Ang1-9)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)

Saccharomyces cerevisiae Meyen ex E.C. Hans ..酸化gp130抗體anti- USP5 antibody半乳糖凝集素9B(GAL9B)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)

Pichia heedii Phaff et al., teleomorph促代謝型受體2抗體anti- USP50 antibodySesquipedalian 1蛋白(Ses1)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)

Saccharomyces cerevisiae Meyen ex E.C. Hans ..膠質纖維酸性蛋白GFAPδ抗體anti- USP53 antibody蛋白酶31(PRSS31)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)

Actinobacillus pleuropneumoniae (Shope) Poh ..GEM相互作用蛋白抗體anti- USP7 antibody半乳糖凝集素9C(GAL9C)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)

Saccharomyces cerevisiae Meyen ex E.C. Hanse ..巨軸索神經病蛋白GAN抗體anti- USP9X antibody耳石蛋白1(OTOL1)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)

Legionella oakridgensis Orrison et al.G蛋白修補結構域蛋白5抗體anti- UT-B antibody半乳糖凝集素7B(GAL7B)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)

培養(yǎng)步驟：

對于貼壁細胞，傳代可參考以下方法：
1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。
2. 加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察Ⅱ型肺泡上皮細胞|細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3. 按6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4. 將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。對于懸浮細胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細胞，1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
方法二：可選擇半數換液方式，棄去半數培養(yǎng)基后，將剩余細胞懸起，將細胞懸液按1：2到1：3的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。