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小鼠腎小管上皮細(xì)胞提取物

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產(chǎn)品型號

品       牌其他品牌

廠商性質(zhì)生產(chǎn)商

所  在  地上海市

更新時(shí)間:2020-10-23 12:58:07瀏覽次數(shù):190次

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 產(chǎn)品名稱

 規(guī)格

 貨號

 小鼠腎小管上皮細(xì)胞提取物

 詳見說明書

XG-X6765

小鼠腎小管上皮細(xì)胞提取物【Mouse Kidney: Normal Renal Tubular Derivatives】
小鼠腎小管上皮細(xì)胞提取物是從小鼠原代腎小管上皮細(xì)胞提取的,小鼠原代腎小管上皮細(xì)胞從正常小鼠腎小管組織制備。所有的產(chǎn)品在發(fā)貨之前均經(jīng)過嚴(yán)格的QA/QC流程以確保其質(zhì)量。這些產(chǎn)品可以直接用于基因克隆,表達(dá)圖譜分析以及各種分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)的研究。
總RNA制備:利用Qiagen RNeasy Kit的Trizol試劑分離RNA,然后用Qiagen RNA Clean Kit進(jìn)行純化。公司提供的總RNA樣品附有RNA樣品總濃度、總含量、電泳照片、OD值測定結(jié)果等。

cDNA制備:純化后的總RNA來合成cDNA一鏈,以50ul總反應(yīng)體系進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄,體系中包括MMLV反轉(zhuǎn)錄酶和隨機(jī)引物以及10mg總RNA。68℃反應(yīng)10min 后終止RT反應(yīng)。利用1x RT Buffer 運(yùn)輸cDNA,1 ul cDNA 足夠做一次PCR反應(yīng)。所有cDNA產(chǎn)品在訂單發(fā)貨之前都經(jīng)過了嚴(yán)格的QA/QC分析,保證了產(chǎn)品的質(zhì)量。

蛋白制備:利用改良型RIPA Buffer (50mMTris, pH7.2, 150mM NaCl, 1mM EDTA, 1mM EGTA, 1% NP-40 , 1mM Na3VO4, 5mM NaF, 400uM PMSF, 1ug/ml of Pepstatin A, 5ug/ml of Aprotinin, 5ug/ml of Leupeptin)制備小鼠腎小管上皮組織裂解液,離心去除組織碎片,通過Bio-Rad蛋白檢測試劑盒測定蛋白濃度,組織蛋白稀釋后用非還原蛋白Buffer (50 mM Tris-HCl, pH 6.8, 5% Glycerol, 1% SDS, 0.002% Bromphenol Blue)添加5%β-巰基乙醇及PMSF,-80度保存。

潛在的應(yīng)用: <1>已知基因的PCR克??;<2>mRNA選擇性剪接;<3>基因克隆與目標(biāo)測序;<4> Western and Northern Blot;<5>蛋白檢測與蛋白質(zhì)組學(xué);<6>芯片研究與表達(dá)圖譜。

 

冷凍保存細(xì)胞之方法?
冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ (-20 ℃30 分鐘*) → -80 ℃16~18 小時(shí)(或隔夜) → 液氮槽vaporphase 儲存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機(jī)中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下, 再放入液氮槽vapor phase儲存。*-20 ℃不可超過1 小時(shí), 以防止冰晶過大,造成細(xì)胞大量死亡,亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中,惟存活率稍微降低一些。

細(xì)胞培養(yǎng)步驟:

一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:
1) 準(zhǔn)備DMEM-H培養(yǎng)基(GIBCO,貨號1199500bt,添加NaHCO3 1.5g/L),90%;胎牛血清,10%。也可根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要選擇懸浮培養(yǎng)基,使293T細(xì)胞懸浮生長。
2) 培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37攝氏度,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3) 凍存液:90%*培養(yǎng)基,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲存。
二. 細(xì)胞處理:
1) 復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜(或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10cm皿中,加入約8ml培養(yǎng)基,培養(yǎng)過夜)。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2) 細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對于貼壁細(xì)胞,傳代可參考以下方法:
1. 棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次。
2. 加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中,置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘,然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況,若細(xì)胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3. 按6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基,輕輕打勻后吸出,在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4. 將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3)細(xì)胞凍存:待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時(shí),可進(jìn)行細(xì)胞凍存。貼壁細(xì)胞凍存時(shí),棄去培養(yǎng)基后加入少量,細(xì)胞變圓脫落后,加入約1ml含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中,再添加10%DMSO后進(jìn)行凍存。

收到細(xì)胞如何處理?

1、首先,觀察細(xì)胞培養(yǎng)瓶是否完好,培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象。若有,請拍照,(所拍照片將作為后續(xù)服務(wù)依據(jù))。
2、用75%酒精擦拭細(xì)胞培養(yǎng)瓶表面,顯微鏡下觀察細(xì)胞狀態(tài)。因運(yùn)輸問題,部分貼壁細(xì)胞會有少量從瓶壁脫落;先不要打開培養(yǎng)瓶蓋,將細(xì)胞置于細(xì)胞培養(yǎng)箱內(nèi)靜置培養(yǎng)2-4小時(shí),以便穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)。
3、仔細(xì)閱讀細(xì)胞說明書,了解細(xì)胞相關(guān)信息,如貼壁特性(貼壁/懸?。?、細(xì)胞形態(tài)、所用基礎(chǔ)培養(yǎng)基、血清比例、所需細(xì)胞因子、傳代比例、換液頻率等。
4、靜置完成后,取出細(xì)胞培養(yǎng)瓶,鏡檢、拍照,記錄細(xì)胞狀態(tài)(所拍照片將作為后續(xù)服務(wù)依據(jù));建議細(xì)胞傳代培養(yǎng)后,定期拍照、記錄細(xì)胞生長狀態(tài)。
5、貼壁細(xì)胞:若細(xì)胞生長密度超過80%,可正常傳代;若未超過80%,移除細(xì)胞培養(yǎng)瓶內(nèi)培養(yǎng)基,預(yù)留5ml左右繼續(xù)培養(yǎng),直至細(xì)胞密度達(dá)80%左右再進(jìn)行傳代操作,瓶蓋可稍微擰松。
6、懸浮細(xì)胞:將細(xì)胞培養(yǎng)瓶內(nèi)液體全部轉(zhuǎn)移至50ml無菌離心管內(nèi),1200rpm離心5min,離心后上清培養(yǎng)基可收集備用,管底細(xì)胞沉淀加入5ml培養(yǎng)基吹打、重懸。鏡檢時(shí),若細(xì)胞密度超過80%,可將細(xì)胞懸液分至2個(gè)細(xì)胞培養(yǎng)瓶內(nèi)培養(yǎng),補(bǔ)加培養(yǎng)基至5ml;若細(xì)胞密度未超過80%,將細(xì)胞懸液移至原瓶繼續(xù)培養(yǎng),直至細(xì)胞密度達(dá)80%左右時(shí)再進(jìn)行傳代操作。
公司產(chǎn)品采用干冰運(yùn)輸,經(jīng)過逐步的降溫,冷藏在-196℃度的液氮罐中,暫時(shí)停止其生命活動,保存其活性,使您的實(shí)驗(yàn)更生動,公司代理品牌有:ATCC、sciencell、ICLC、GIBCO、IST-Banca等品牌.

LithiuM fluoride6種定制混標(biāo) 標(biāo)準(zhǔn)品anti- GHITM antibody脂蛋白關(guān)聯(lián)脂酶A2(LpPLA2)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)

LithiuM forMate10種定制混標(biāo) 標(biāo)準(zhǔn)品anti- GHR antibody內(nèi)皮型一氮合酶(NOS3)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)

LithiuM hydride定制混標(biāo)(7組分)anti- GHRHR antibody內(nèi)皮型一氮合酶(NOS3)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)

LithiuM oxalate定制混標(biāo)(8組分)anti- GHRL antibody內(nèi)皮型一氮合酶(NOS3)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)

LithiuM stearatePCP MIX9(GBT 20387-2006) 標(biāo)準(zhǔn)品anti- Giantin antibody誘導(dǎo)型一氮合酶(NOS2)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)

Lithocholic acid;3α-Hydroxy cholanic acid;17β-(1-Methyl-3-car-boxypropyl) etiocholan-3α-ol5種氨基酸酯混標(biāo) 標(biāo)準(zhǔn)品anti- GIF antibody誘導(dǎo)型一氮合酶(NOS2)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)

LitMus;Tournesol;Turnsole;LaccaMusica5種有機(jī)混標(biāo) 標(biāo)準(zhǔn)品anti- GIF antibody誘導(dǎo)型一氮合酶(NOS2)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)

L-Lysine;L-Lysine base7種有機(jī)混標(biāo) 標(biāo)準(zhǔn)品anti- GIGYF2 antibody一氮合酶運(yùn)輸因子(NOSTRIN)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)

小鼠腎小管上皮細(xì)胞提取物Candida tropicalis (Castellani) BerkhoutMMF誘導(dǎo)片段蛋白1抗體anti- YTHDF3 antibody跨膜蛋白1(TMEM1)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)

freeze-driedHERPUD蛋白家族成員2抗體anti- YWHAB antibody轉(zhuǎn)換蛋白2(TNP2)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)

Butyrivibrio proteoclasticus (Attwood et al ..內(nèi)源性逆轉(zhuǎn)錄病膜糖蛋白2抗體anti- YWHAH antibody轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白3(TNPO3)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)

frozenBeta氨基己糖苷酶beta亞基蛋白B鏈抗體anti- YWHAZ antibody張力蛋白1(TNS1)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)

frozenHEXIM2蛋白抗體anti- YY1 antibody原肌球蛋白1α(TPM1)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)

Phytophthora cinnamomi Rands3'-5'外切酶1蛋白抗體anti- YY1 antibody營養(yǎng)蛋白(TRO)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)

Homo sapiens, human尿黑酸酶抗體anti- YY1AP1 antibody轉(zhuǎn)位蛋白(TSN)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)

Mus musculus, mouse肝細(xì)胞生長調(diào)節(jié)因子激酶底物抗體anti- ZADH2 antibody四旋蛋白3(TSPAN3)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)

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