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更新時(shí)間:2020-10-23 13:04:03瀏覽次數(shù):164次
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小鼠小腸平滑肌細(xì)胞提取物 | 詳見說明書 | XG-X6748 |
小鼠小腸平滑肌細(xì)胞提取物【Mouse Intestine: Normal Small Intestinal Smooth Muscle Cell Derivatives】
小鼠小腸平滑肌細(xì)胞提取物是從小鼠小腸平滑肌細(xì)胞提取的,小鼠小腸平滑肌細(xì)胞從正常小鼠小腸組織制備。所有的產(chǎn)品在發(fā)貨之前均經(jīng)過嚴(yán)格的QA/QC流程以確保其質(zhì)量。這些產(chǎn)品可以直接用于基因克隆,表達(dá)圖譜分析以及各種分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)的研究。
總RNA制備:利用Qiagen RNeasy Kit的Trizol試劑分離RNA,然后用Qiagen RNA Clean Kit進(jìn)行純化。公司提供的總RNA樣品附有RNA樣品總濃度、總含量、電泳照片、OD值測定結(jié)果等。
cDNA制備:純化后的總RNA來合成cDNA一鏈,以50ul總反應(yīng)體系進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄,體系中包括MMLV反轉(zhuǎn)錄酶和隨機(jī)引物以及10mg總RNA。68℃反應(yīng)10min 后終止RT反應(yīng)。利用1x RT Buffer 運(yùn)輸cDNA,1 ul cDNA 足夠做一次PCR反應(yīng)。所有cDNA產(chǎn)品在訂單發(fā)貨之前都經(jīng)過了嚴(yán)格的QA/QC分析,保證了產(chǎn)品的質(zhì)量。
蛋白制備:利用改良型RIPA Buffer (50mMTris, pH7.2, 150mM NaCl, 1mM EDTA, 1mM EGTA, 1% NP-40 , 1mM Na3VO4, 5mM NaF, 400uM PMSF, 1ug/ml of Pepstatin A, 5ug/ml of Aprotinin, 5ug/ml of Leupeptin)制備小鼠小腸平滑肌組織裂解液,離心去除組織碎片,通過Bio-Rad蛋白檢測試劑盒測定蛋白濃度,組織蛋白稀釋后用非還原蛋白Buffer (50 mM Tris-HCl, pH 6.8, 5% Glycerol, 1% SDS, 0.002% Bromphenol Blue)添加5%β-巰基乙醇及PMSF,-80度保存。
潛在的應(yīng)用: <1>已知基因的PCR克?。?lt;2>mRNA選擇性剪接;<3>基因克隆與目標(biāo)測序;<4> Western and Northern Blot;<5>蛋白檢測與蛋白質(zhì)組學(xué);<6>芯片研究與表達(dá)圖譜。
冷凍保存細(xì)胞之方法?
冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ (-20 ℃30 分鐘*) → -80 ℃16~18 小時(shí)(或隔夜) → 液氮槽vaporphase 儲(chǔ)存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機(jī)中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下, 再放入液氮槽vapor phase儲(chǔ)存。*-20 ℃不可超過1 小時(shí), 以防止冰晶過大,造成細(xì)胞大量死亡,亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中,惟存活率稍微降低一些。
細(xì)胞培養(yǎng)步驟:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:
1) 準(zhǔn)備DMEM-H培養(yǎng)基(GIBCO,貨號1199500bt,添加NaHCO3 1.5g/L),90%;胎牛血清,10%。也可根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要選擇懸浮培養(yǎng)基,使293T細(xì)胞懸浮生長。
2) 培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37攝氏度,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3) 凍存液:90%*培養(yǎng)基,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲(chǔ)存。
二. 細(xì)胞處理:
1) 復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜(或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10cm皿中,加入約8ml培養(yǎng)基,培養(yǎng)過夜)。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2) 細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對于貼壁細(xì)胞,傳代可參考以下方法:
1. 棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次。
2. 加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中,置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘,然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況,若細(xì)胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺(tái),輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3. 按6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基,輕輕打勻后吸出,在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4. 將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3)細(xì)胞凍存:待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時(shí),可進(jìn)行細(xì)胞凍存。貼壁細(xì)胞凍存時(shí),棄去培養(yǎng)基后加入少量,細(xì)胞變圓脫落后,加入約1ml含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中,再添加10%DMSO后進(jìn)行凍存。
收到細(xì)胞如何處理?
1、首先,觀察細(xì)胞培養(yǎng)瓶是否完好,培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象。若有,請拍照,(所拍照片將作為后續(xù)服務(wù)依據(jù))。
2、用75%酒精擦拭細(xì)胞培養(yǎng)瓶表面,顯微鏡下觀察細(xì)胞狀態(tài)。因運(yùn)輸問題,部分貼壁細(xì)胞會(huì)有少量從瓶壁脫落;先不要打開培養(yǎng)瓶蓋,將細(xì)胞置于細(xì)胞培養(yǎng)箱內(nèi)靜置培養(yǎng)2-4小時(shí),以便穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)。
3、仔細(xì)閱讀細(xì)胞說明書,了解細(xì)胞相關(guān)信息,如貼壁特性(貼壁/懸?。⒓?xì)胞形態(tài)、所用基礎(chǔ)培養(yǎng)基、血清比例、所需細(xì)胞因子、傳代比例、換液頻率等。
4、靜置完成后,取出細(xì)胞培養(yǎng)瓶,鏡檢、拍照,記錄細(xì)胞狀態(tài)(所拍照片將作為后續(xù)服務(wù)依據(jù));建議細(xì)胞傳代培養(yǎng)后,定期拍照、記錄細(xì)胞生長狀態(tài)。
5、貼壁細(xì)胞:若細(xì)胞生長密度超過80%,可正常傳代;若未超過80%,移除細(xì)胞培養(yǎng)瓶內(nèi)培養(yǎng)基,預(yù)留5ml左右繼續(xù)培養(yǎng),直至細(xì)胞密度達(dá)80%左右再進(jìn)行傳代操作,瓶蓋可稍微擰松。
6、懸浮細(xì)胞:將細(xì)胞培養(yǎng)瓶內(nèi)液體全部轉(zhuǎn)移至50ml無菌離心管內(nèi),1200rpm離心5min,離心后上清培養(yǎng)基可收集備用,管底細(xì)胞沉淀加入5ml培養(yǎng)基吹打、重懸。鏡檢時(shí),若細(xì)胞密度超過80%,可將細(xì)胞懸液分至2個(gè)細(xì)胞培養(yǎng)瓶內(nèi)培養(yǎng),補(bǔ)加培養(yǎng)基至5ml;若細(xì)胞密度未超過80%,將細(xì)胞懸液移至原瓶繼續(xù)培養(yǎng),直至細(xì)胞密度達(dá)80%左右時(shí)再進(jìn)行傳代操作。
公司產(chǎn)品采用干冰運(yùn)輸,經(jīng)過逐步的降溫,冷藏在-196℃度的液氮罐中,暫時(shí)停止其生命活動(dòng),保存其活性,使您的實(shí)驗(yàn)更生動(dòng),公司代理品牌有:ATCC、sciencell、ICLC、GIBCO、IST-Banca等品牌.
Fast black G salt;C.I. 37260;無機(jī)標(biāo)準(zhǔn)溶液-金光譜溶液標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)anti- Galectin 4 antibody骨成型蛋白受體1A(BMPR1A)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)
Fast blue BB salt;4-Benzoyl-aMino-2,5-diethoxybenzene diazoniuM chloride heMi[Zinc chloride]salt;Diazo fast blue BB;Fast blue BBN salt;Azoene fast blue BBN salt;4-AMino-2,5-diethoxybenzanilide diazotate zinc do用于裂變徑跡技術(shù)刻度的鈾玻璃標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)anti- Galectin 8 antibody骨成型蛋白受體1A(BMPR1A)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)
Fast dark blue R salt;Azoic diazo No.51;Diazo fast dark blue R;4-AMino-2,5-diMethoxy-4′-nitroazodichlorobenzene diazoniuM salt;C.I.37195;用于裂變徑跡技術(shù)刻度的鈾玻璃標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)anti- Galectin 9 antibody骨成型蛋白受體Ⅱ(BMPRⅡ)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)
brilliant blue G226Ra/228Ra的活度比溶液標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)anti- Galectin-1 antibody骨成型蛋白受體Ⅱ(BMPRⅡ)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)
Fast red GG salt;Fast red 2G salt;p-NitrophenyldiazoniuM fluoborate;p-NitrobenzenediazoniuM tetrafluoroborate;p-Nitroaniline diazoniuM salt;Azoic diazo No.37;C.I. 37035226Ra/228Ra的活度比溶液標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)anti- Galectin-1 antibody骨成型蛋白受體Ⅱ(BMPRⅡ)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)
Fast red RC salt;DiazoniuM salt of 4-chloro-2-aMinoanisole;Diazotized 4-chloro-o-anisidine;2-AMino-4-chloroanisole diazotated zinc double salt;Diazo red RC;Azoic diazo No10;C.I. 37120230Th/232Th的活度比溶液標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)anti- Galectin-3 antibody上皮性鈣黏附蛋白(CDHE)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)
Ferrocene;Biscyclopentadienyl iron;Di-2,4-cyclopentadien-1-yl iron230Th/232Th的活度比溶液標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)anti- Galectin-3 antibody上皮性鈣黏附蛋白(CDHE)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)
Ferulic acid;3-Methoxy-4-hydroxy cinnaMic acid;Caffeic acid 3-Methyl ether;3-(4-Hydroxy-3-Methoxyphenyl)-2-propenoic acid234U/238U的活度比溶液標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)anti- Galectin-7 antibody二級淋巴組織趨化因子(SLC)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)
小鼠小腸平滑肌細(xì)胞提取物frozen生長抑制DNA損傷基因45γ抗體 GADD45γanti- VPS45 antibody氨基?;?(ACY1)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)
Saccharomyces cerevisiae Meyen ex E.C. Hans ..生長停滯特異性蛋白2家族3抗體anti- VPS4A antibody內(nèi)收蛋白1(ADD1)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)
Trametes rigida Montagne et Berkeley, teleo ..生長停滯特異性蛋白2家族1抗體anti- VPS4B antibody腺苷激酶(ADK)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)
Antrodia sinuosa (Fries : Fries) Karsten糖皮質(zhì)激素誘導(dǎo)拉鏈蛋白抗體anti- VPS52 antibody腺苷酸激酶2(AK2)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)
Neurospora crassa Shear et DodgeG蛋白偶聯(lián)受體65抗體anti- VPS53 antibody無羊膜蛋白(AMN)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)
Plasmodium cynomolgi Mayer神經(jīng)節(jié)肽抗體anti- VPS54 antibody血管抑素結(jié)合蛋白(AMOT)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)
Saccharomyces cerevisiae Meyen ex E.C. Hans ..gamma氨基酸B型受體1抗體anti- VPS72 antibodyAttractin蛋白(ATRN)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)
Saccharomyces cerevisiae Meyen ex E.C. Hans ..GDNF家族受體α4抗體 GDNFRα4anti- VPS8 antibody失調(diào)蛋白2(ATXN2)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)
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