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上海西格生物科技有限公司
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小鼠晶狀體上皮細(xì)胞提取物

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產(chǎn)品型號(hào)

品       牌其他品牌

廠(chǎng)商性質(zhì)生產(chǎn)商

所  在  地上海市

更新時(shí)間:2020-10-23 13:22:40瀏覽次數(shù):202次

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小鼠晶狀體上皮細(xì)胞提取物
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3 -(3,4-二氧基苯基)- 2,3,4,5,10,11-hexahydro-11 -(3-phenoxyphenyl)-1H-苯并[ b,e ] [1,4] diazepin-1-one

公司產(chǎn)品采用干冰運(yùn)輸,經(jīng)過(guò)逐步的降溫,冷藏在-196℃度的液氮罐中,暫時(shí)停止其生命活動(dòng),保存其活性,使您的實(shí)驗(yàn)更生動(dòng),公司代理品牌有:ATCC、sciencell、ICLC、GIBCO、IST-Banca等品牌.

 產(chǎn)品名稱(chēng)

 規(guī)格

 貨號(hào)

 小鼠晶狀體上皮細(xì)胞提取物

 詳見(jiàn)說(shuō)明書(shū)

XG-X6812

小鼠晶狀體上皮細(xì)胞提取物【Mouse Eye: Normal Lens Epithelial Cells Derivatives】
小鼠晶狀體上皮細(xì)胞提取物是從小鼠原代晶狀體上皮細(xì)胞提取的,小鼠原代晶狀體上皮細(xì)胞從正常小鼠眼組織制備。所有的產(chǎn)品在發(fā)貨之前均經(jīng)過(guò)嚴(yán)格的QA/QC流程以確保其質(zhì)量。這些產(chǎn)品可以直接用于基因克隆,表達(dá)圖譜分析以及各種分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)的研究。
總RNA制備:利用Qiagen RNeasy Kit的Trizol試劑分離RNA,然后用Qiagen RNA Clean Kit進(jìn)行純化。公司提供的總RNA樣品附有RNA樣品總濃度、總含量、電泳照片、OD值測(cè)定結(jié)果等。

cDNA制備:純化后的總RNA來(lái)合成cDNA一鏈,以50ul總反應(yīng)體系進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄,體系中包括MMLV反轉(zhuǎn)錄酶和隨機(jī)引物以及10mg總RNA。68℃反應(yīng)10min 后終止RT反應(yīng)。利用1x RT Buffer 運(yùn)輸cDNA,1 ul cDNA 足夠做一次PCR反應(yīng)。所有cDNA產(chǎn)品在訂單發(fā)貨之前都經(jīng)過(guò)了嚴(yán)格的QA/QC分析,保證了產(chǎn)品的質(zhì)量。

蛋白制備:利用改良型RIPA Buffer (50mMTris, pH7.2, 150mM NaCl, 1mM EDTA, 1mM EGTA, 1% NP-40 , 1mM Na3VO4, 5mM NaF, 400uM PMSF, 1ug/ml of Pepstatin A, 5ug/ml of Aprotinin, 5ug/ml of Leupeptin)制備小鼠晶狀體上皮組織裂解液,離心去除組織碎片,通過(guò)Bio-Rad蛋白檢測(cè)試劑盒測(cè)定蛋白濃度,組織蛋白稀釋后用非還原蛋白Buffer (50 mM Tris-HCl, pH 6.8, 5% Glycerol, 1% SDS, 0.002% Bromphenol Blue)添加5%β-巰基乙醇及PMSF,-80度保存。

潛在的應(yīng)用: <1>已知基因的PCR克??;<2>mRNA選擇性剪接;<3>基因克隆與目標(biāo)測(cè)序;<4> Western and Northern Blot;<5>蛋白檢測(cè)與蛋白質(zhì)組學(xué);<6>芯片研究與表達(dá)圖譜。

 

細(xì)胞培養(yǎng)步驟:

一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:
1) 準(zhǔn)備DMEM-H培養(yǎng)基(GIBCO,貨號(hào)1199500bt,添加NaHCO3 1.5g/L),90%;胎牛血清,10%。也可根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要選擇懸浮培養(yǎng)基,使293T細(xì)胞懸浮生長(zhǎng)。
2) 培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37攝氏度,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3) 凍存液:90%*培養(yǎng)基,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲(chǔ)存。
二. 細(xì)胞處理:
1) 復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過(guò)夜(或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10cm皿中,加入約8ml培養(yǎng)基,培養(yǎng)過(guò)夜)。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2) 細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對(duì)于貼壁細(xì)胞,傳代可參考以下方法:
1. 棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤(rùn)洗細(xì)胞1-2次。
2. 加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中,置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘,然后在顯微鏡下觀(guān)察細(xì)胞消化情況,若細(xì)胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺(tái),輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3. 按6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基,輕輕打勻后吸出,在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4. 將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3)細(xì)胞凍存:待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí),可進(jìn)行細(xì)胞凍存。貼壁細(xì)胞凍存時(shí),棄去培養(yǎng)基后加入少量,細(xì)胞變圓脫落后,加入約1ml含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中,再添加10%DMSO后進(jìn)行凍存。
冷凍保存細(xì)胞之方法?
冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ (-20 ℃30 分鐘*) → -80 ℃16~18 小時(shí)(或隔夜) → 液氮槽vaporphase 儲(chǔ)存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機(jī)中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下, 再放入液氮槽vapor phase儲(chǔ)存。*-20 ℃不可超過(guò)1 小時(shí), 以防止冰晶過(guò)大,造成細(xì)胞大量死亡,亦可跳過(guò)此步驟直接放入-80℃ 冰箱中,惟存活率稍微降低一些。

Tributyl phosphate;Phosphoric acid tributyl ester;TBP24組分半揮發(fā)性有機(jī)物混標(biāo) 標(biāo)準(zhǔn)品anti- HDGF antibodyV-Rel網(wǎng)狀內(nèi)皮增生病癌基因同源物A(RELA)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)

TDX-02B定制磺胺類(lèi)混標(biāo)(9組份) 標(biāo)準(zhǔn)品anti- HDGF antibodyV-Rel網(wǎng)狀內(nèi)皮增生病癌基因同源物A(RELA)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)

Telluric;Trihydrated telluric oxide;Hydrogentellurate;Orthotelluric acid19種有機(jī)氯混標(biāo)(GB 2763-2014 生乳、奶類(lèi)相關(guān)項(xiàng)目)標(biāo)準(zhǔn)anti- HDGFRP3 antibody纖維膠凝蛋白1(FCN1)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)

TelluriuM dioxide;Tellurous anhydride;TelluriuM(IV) oxide30種半揮發(fā)性有機(jī)物混標(biāo)(茶葉出口歐盟農(nóng)殘檢測(cè)30項(xiàng))標(biāo)準(zhǔn)品anti- HDHD3 antibody蛋白激酶Cγ(PKCγ)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)

Terpinolene531.1氨基酸酯混標(biāo)(10組分)標(biāo)準(zhǔn)品anti- HDLBP antibody抗低密度脂蛋白抗體(OLAb)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)

tert-AMyl alcohol;tert-Pentyl alcohol;DiMethylethyl carbinol;EthyldiMethyl carbinol;tert-Pentanol;AMylen hydrate;氯化基汞和氯化基汞混標(biāo) 標(biāo)準(zhǔn)品anti- HE4 antibody凝集素樣低密度脂蛋白受體1(LOX1)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)

tert-Butanol;2-Methyl-2-propanol;tert-Butyl alcohol氯化基汞和氯化基汞混標(biāo) 標(biāo)準(zhǔn)品anti- HEATR2 antibody凝集素樣低密度脂蛋白受體1(LOX1)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)

tert-Butyl carbazate混標(biāo)(26組份,套裝)標(biāo)準(zhǔn)品anti- HEATR4 antibody凝集素樣低密度脂蛋白受體1(LOX1)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)

小鼠晶狀體上皮細(xì)胞提取物Homo sapiens, human巨細(xì)胞病UL23抗體Bovine TFF3(Trefoil factor 3) ELISA Kit鞘氨醇激酶1(SPHK1)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)

Homo sapiens, humanP1抗體Bovine ACTG2(Actin Gamma 2, Smooth Muscle) ELISA Kit鞘氨醇激酶2(SPHK2)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)

Athelia rolfsii (Curzi) Tu et Kimbrough, te ..E3連接酶抑制素受體3抗體Bovine ALPI(Alkaline Phosphatase, Intestinal) ELISA Kit軸突生長(zhǎng)誘向因子G1(NtnG1)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)

freeze-dried酰肝素酶抗體Bovine CLDN3(Claudin 3) ELISA Kit軸突生長(zhǎng)誘向因子3(Ntn3)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)

Starmera amethionina (Starmer et al.) Yamad ..聚抗體g標(biāo)簽抗體(C端)Bovine NOS3/eNOS(Nitric oxide synthase, endothelial) ELISA Kit軸突生長(zhǎng)誘向因子G2(NtnG2)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)

Corollospora maritima Werdermann, teleomorph型肝炎核心抗原單克隆抗體Bovine IgE(Immunoglobulin E) ELISA Kit微管蛋白β1(TUBβ1)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)

Paenibacillus larvae (White) Ash et al.單純皰疹病1型DNA聚合酶催化亞單位抗體Bovine PAP(Plasmin-Antiplasmin Complex) ELISA Kit微管蛋白β3(TUBβ3)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)

Rhizobium radiobacter (Beijerinck and van D ..A型流感病H1N1-M2蛋白抗體Bovine TL-3(Interleukin-3) ELISA Kit微管蛋白β6(TUBβ6)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)

收到細(xì)胞如何處理?

1、首先,觀(guān)察細(xì)胞培養(yǎng)瓶是否完好,培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象。若有,請(qǐng)拍照,(所拍照片將作為后續(xù)服務(wù)依據(jù))。
2、用75%酒精擦拭細(xì)胞培養(yǎng)瓶表面,顯微鏡下觀(guān)察細(xì)胞狀態(tài)。因運(yùn)輸問(wèn)題,部分貼壁細(xì)胞會(huì)有少量從瓶壁脫落;先不要打開(kāi)培養(yǎng)瓶蓋,將細(xì)胞置于細(xì)胞培養(yǎng)箱內(nèi)靜置培養(yǎng)2-4小時(shí),以便穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)。
3、仔細(xì)閱讀細(xì)胞說(shuō)明書(shū),了解細(xì)胞相關(guān)信息,如貼壁特性(貼壁/懸?。⒓?xì)胞形態(tài)、所用基礎(chǔ)培養(yǎng)基、血清比例、所需細(xì)胞因子、傳代比例、換液頻率等。
4、靜置完成后,取出細(xì)胞培養(yǎng)瓶,鏡檢、拍照,記錄細(xì)胞狀態(tài)(所拍照片將作為后續(xù)服務(wù)依據(jù));建議細(xì)胞傳代培養(yǎng)后,定期拍照、記錄細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)。
5、貼壁細(xì)胞:若細(xì)胞生長(zhǎng)密度超過(guò)80%,可正常傳代;若未超過(guò)80%,移除細(xì)胞培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)培養(yǎng)基,預(yù)留5ml左右繼續(xù)培養(yǎng),直至細(xì)胞密度達(dá)80%左右再進(jìn)行傳代操作,瓶蓋可稍微擰松。
6、懸浮細(xì)胞:將細(xì)胞培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)液體全部轉(zhuǎn)移至50ml無(wú)菌離心管內(nèi),1200rpm離心5min,離心后上清培養(yǎng)基可收集備用,管底細(xì)胞沉淀加入5ml培養(yǎng)基吹打、重懸。鏡檢時(shí),若細(xì)胞密度超過(guò)80%,可將細(xì)胞懸液分至2個(gè)細(xì)胞培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)培養(yǎng),補(bǔ)加培養(yǎng)基至5ml;若細(xì)胞密度未超過(guò)80%,將細(xì)胞懸液移至原瓶繼續(xù)培養(yǎng),直至細(xì)胞密度達(dá)80%左右時(shí)再進(jìn)行傳代操作。

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