小鼠腦成纖維細胞提取物【Mouse Brain: Normal Brain Fibroblasts Derivatives】
小鼠腦成纖維細胞提取物是從小鼠原代腦成纖維細胞提取的，小鼠原代腦成纖維細胞從正常小鼠腦組織制備。所有的產(chǎn)品在發(fā)貨之前均經(jīng)過嚴格的QA/QC流程以確保其質(zhì)量。這些產(chǎn)品可以直接用于基因克隆，表達圖譜分析以及各種分子生物學(xué)實驗的研究。
總RNA制備：利用Qiagen RNeasy Kit的Trizol試劑分離RNA，然后用Qiagen RNA Clean Kit進行純化。公司提供的總RNA樣品附有RNA樣品總濃度、總含量、電泳照片、OD值測定結(jié)果等。

cDNA制備：純化后的總RNA來合成cDNA一鏈，以50ul總反應(yīng)體系進行逆轉(zhuǎn)錄，體系中包括MMLV反轉(zhuǎn)錄酶和隨機引物以及10mg總RNA。68℃反應(yīng)10min 后終止RT反應(yīng)。利用1x RT Buffer 運輸cDNA，1 ul cDNA 足夠做一次PCR反應(yīng)。所有cDNA產(chǎn)品在訂單發(fā)貨之前都經(jīng)過了嚴格的QA/QC分析，保證了產(chǎn)品的質(zhì)量。

蛋白制備：利用改良型RIPA Buffer (50mMTris, pH7.2, 150mM NaCl, 1mM EDTA, 1mM EGTA, 1% NP-40 , 1mM Na3VO4, 5mM NaF, 400uM PMSF, 1ug/ml of Pepstatin A, 5ug/ml of Aprotinin, 5ug/ml of Leupeptin)制備小鼠腦成纖維組織裂解液，離心去除組織碎片，通過Bio-Rad蛋白檢測試劑盒測定蛋白濃度，組織蛋白稀釋后用非還原蛋白Buffer (50 mM Tris-HCl, pH 6.8, 5% Glycerol, 1% SDS, 0.002% Bromphenol Blue)添加5%β-巰基乙醇及PMSF，-80度保存。

潛在的應(yīng)用： <1>已知基因的PCR克??；<2>mRNA選擇性剪接；<3>基因克隆與目標(biāo)測序；<4> Western and Northern Blot；<5>蛋白檢測與蛋白質(zhì)組學(xué)；<6>芯片研究與表達圖譜。

培養(yǎng)步驟：

對于貼壁細胞，傳代可參考以下方法：
1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。
2. 加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察Ⅱ型肺泡上皮細胞|細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3. 按6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4. 將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。對于懸浮細胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細胞，1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
方法二：可選擇半數(shù)換液方式，棄去半數(shù)培養(yǎng)基后，將剩余細胞懸起，將細胞懸液按1：2到1：3的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

注意事項：
1. 接收到細胞，肉眼觀察細胞培養(yǎng)基顏色，顯微鏡觀察細胞生長情況，并對細胞進行不同倍數(shù)拍照（建議收到時的培養(yǎng)瓶拍一張照片，顯微鏡拍收到時的細胞100X,200X各一張）。
2.用75%的酒精消毒（建議配置75%的酒精的水是滅菌過的）。
3.嚴格無菌操作，打開細胞培養(yǎng)瓶。
4.將細胞培養(yǎng)瓶內(nèi)的培養(yǎng)基用吸管*吸出（嚴禁直接傾倒），放入另一無菌容器中（建議換新的培養(yǎng)基培養(yǎng)細胞）。
5.用PBS 2-3ml/次輕輕洗細胞表面，洗3-4次遍，加入0.05%-EDTA1-1.5ml,顯微鏡下觀察細胞變圓，輕輕拍打培養(yǎng)瓶直到細胞脫落，加入終止液終止。
6.1000rpm，5min離心，重懸細胞。
7.換新的細胞培養(yǎng)瓶，37℃，5%CO2培養(yǎng)。 
操作要點：
1）將培養(yǎng)基在37℃水浴鍋預(yù)熱；準備一個15mL無菌的離心管，加入8mL預(yù)熱培養(yǎng)基。
2）將凍存細胞從液氮罐中取出，快速放入37℃水浴鍋中復(fù)溫（可準備一潔凈的燒杯，裝滿37℃的水，細胞凍存管取出后迅速放入燒杯內(nèi)，再逐步轉(zhuǎn)移到水浴鍋中）。輕輕晃動凍存管，使細胞能在1~2min內(nèi)*解凍，使細胞能盡快通過易受損的溫度段（-5~0℃）。注意凍存管管口不能沒入水中，BRL(大鼠肝細胞)避免引起污染。
3）用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺內(nèi)，將管內(nèi)細胞轉(zhuǎn)移至準備好的離心管內(nèi)，輕輕吹打液體，使細胞均勻分散，降低DMSO濃度，吹打時避免產(chǎn)生氣泡。用新鮮培養(yǎng)基洗管壁2次，均轉(zhuǎn)移至離心管內(nèi)。
4）800rpm離心5min，棄上清，加入新鮮的培養(yǎng)基，吹打制成細胞懸液。
5）將細胞懸液轉(zhuǎn)移至T25細胞瓶內(nèi)，補加適量的培養(yǎng)基，輕輕晃動細胞瓶使細胞分布均勻，放入溫箱內(nèi)培養(yǎng)。
6）第二天觀察細胞貼壁生長情況，換新鮮培養(yǎng)基以去除死細胞。繼續(xù)培養(yǎng)，待細胞長至80~90%匯合時正常傳代。一般剛復(fù)蘇的細胞需經(jīng)過2~3次傳代，細胞活力恢復(fù)后才能進行后續(xù)的實驗。

Toluidine blue;ToluniuM chloride;Basic blue 17;Blutene chloride;Tolazul;Klot;DiMethyltoluthionine chloride;Methylene blue T 50;Methylene blue T extra8種硝基苯混標(biāo)（592-2010 水質(zhì) 硝基苯類化合物的測定）標(biāo)準品anti- HIBCH antibody中期因子(MK)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)

TRANS-1,2-DICHLOROETHYLENE定制混標(biāo)（HJ620-2011水質(zhì)揮發(fā)性鹵代烴的測定）標(biāo)準品anti- HIC1 antibody胰島素樣生長因子1(IGF1)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)

trans-2-Hexene;14種鹵代烴混標(biāo)（HJ620-2011水質(zhì)揮發(fā)性鹵代烴的測定） 標(biāo)準品anti- HIC5 antibody同型半(HA)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)

trans-2-Hexenoic acid7種氯苯混合物混標(biāo)anti- HIF1a antibody細胞間粘附分子1(ICAM1)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)

D(+)-Trehalose dihydrate定制混標(biāo)74 標(biāo)準品anti- HIF1a antibodyS轉(zhuǎn)移酶α1(GSTα1)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)

Triacontane;Alkane C3018種煙包/平板印刷品中VOC混標(biāo) 標(biāo)準品anti- HIF1AN antibodyS轉(zhuǎn)移酶α1(GSTα1)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)

2,4,6-Triallyloxy-1,3,5-triazi18種煙包/平板印刷品中VOC混標(biāo) 標(biāo)準品anti- HIGD1A antibodyS轉(zhuǎn)移酶α5(GSTα5)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)

TriaMMoniuM citrate18種VOC混標(biāo) 標(biāo)準品anti- HIGD1B antibodyC-型鈉尿肽(CNP)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)

小鼠腦成纖維細胞提取物frozen組蛋白H3抗體Bovine IL12A(Interleukin-12 subunit alpha) ELISA Kit醇脫酶3(ADH3)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)

Streptomyces griseus subsp.griseus (Krai ..熱休克蛋白93抗體Bovine IL-13(Interleukin-13) ELISA Kit醇脫酶4(ADH4)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)

Saccharomyces cerevisiae Meyen ex E.C. Hans ..雞新城疫血凝素－神經(jīng)氨酸酶抗體Bovine IL-5(Interleukin-5) ELISA Kit醇脫酶5(ADH5)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)

Pseudomonas sp.tRNA連接酶抗體Bovine IFN-γ(Interferon Gamma) ELISA Kit醇脫酶6(ADH6)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)

freeze-dried熱休克蛋白-47抗體Bovine IL-17A(Interleukin-17) ELISA Kit醇脫酶7(ADH7)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)

Saccharomyces cerevisiae Meyen ex E.C. Hans ..熱休克蛋白75抗體Bovine cTn-I(Cardiac Troponin-I) ELISA Kit分揀連接蛋白2(SNX2)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)

Homo sapiens, human異染色質(zhì)蛋白1-γ抗體Bovine FBP2(Fructose-1,6-bisphosphatase isozyme 2) ELISA Kit分揀連接蛋白3(SNX3)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)

Borrelia burgdorferi Johnson et al. emend. ..組蛋白H1抗體Bovine Histon H3 ELISA Kit分揀連接蛋白4(SNX4)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)