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大鼠膀胱平滑肌細胞提取物

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產(chǎn)品型號

品       牌其他品牌

廠商性質(zhì)生產(chǎn)商

所  在  地上海市

更新時間:2020-10-25 13:51:37瀏覽次數(shù):151次

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操作要點:
1)將培養(yǎng)基在37℃水浴鍋預熱;準備一個15mL無菌的離心管,加入8mL預熱培養(yǎng)基。
2)將凍存細胞從液氮罐中取出,快速放入37℃水浴鍋中復溫(可準備一潔凈的燒杯,裝滿37℃的水,細胞凍存管取出后迅速放入燒杯內(nèi),再逐步轉移到水浴鍋中)。輕輕晃動凍存管,使細胞能在1~2min內(nèi)*解凍,使細胞能盡快通過易受損的溫度段(-5~0℃)。注意凍存管管口不能沒入水中,BRL(大鼠肝細胞)避免引起污染。
3)用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺內(nèi),將管內(nèi)細胞轉移至準備好的離心管內(nèi),輕輕吹打液體,使細胞均勻分散,降低DMSO濃度,吹打時避免產(chǎn)生氣泡。用新鮮培養(yǎng)基洗管壁2次,均轉移至離心管內(nèi)。
4)800rpm離心5min,棄上清,加入新鮮的培養(yǎng)基,吹打制成細胞懸液。
5)將細胞懸液轉移至T25細胞瓶內(nèi),補加適量的培養(yǎng)基,輕輕晃動細胞瓶使細胞分布均勻,放入溫箱內(nèi)培養(yǎng)。
6)第二天觀察細胞貼壁生長情況,換新鮮培養(yǎng)基以去除死細胞。繼續(xù)培養(yǎng),待細胞長至80~90%匯合時正常傳代。一般剛復蘇的細胞需經(jīng)過2~3次傳代,細胞活力恢復后才能進行后續(xù)的實驗。

 產(chǎn)品名稱

 規(guī)格

 貨號

 大鼠膀胱平滑肌細胞提取物

 詳見說明書

XG-X6851

大鼠膀胱平滑肌細胞提取物【Rat Bladder:Normal Bladder Derivatives】
大鼠膀胱平滑肌細胞提取物是從大鼠原代膀胱平滑肌細胞提取的,大鼠原代膀胱平滑肌細胞從正常大鼠膀胱組織制備。所有的產(chǎn)品在發(fā)貨之前均經(jīng)過嚴格的QA/QC流程以確保其質(zhì)量。這些產(chǎn)品可以直接用于基因克隆,表達圖譜分析以及各種分子生物學實驗的研究。
總RNA制備:利用Qiagen RNeasy Kit的Trizol試劑分離RNA,然后用Qiagen RNA Clean Kit進行純化。公司提供的總RNA樣品附有RNA樣品總濃度、總含量、電泳照片、OD值測定結果等。

cDNA制備:純化后的總RNA來合成cDNA一鏈,以50ul總反應體系進行逆轉錄,體系中包括MMLV反轉錄酶和隨機引物以及10mg總RNA。68℃反應10min 后終止RT反應。利用1x RT Buffer 運輸cDNA,1 ul cDNA 足夠做一次PCR反應。所有cDNA產(chǎn)品在訂單發(fā)貨之前都經(jīng)過了嚴格的QA/QC分析,保證了產(chǎn)品的質(zhì)量。

蛋白制備:利用改良型RIPA Buffer (50mMTris, pH7.2, 150mM NaCl, 1mM EDTA, 1mM EGTA, 1% NP-40 , 1mM Na3VO4, 5mM NaF, 400uM PMSF, 1ug/ml of Pepstatin A, 5ug/ml of Aprotinin, 5ug/ml of Leupeptin)制備大鼠膀胱平滑肌組織裂解液,離心去除組織碎片,通過Bio-Rad蛋白檢測試劑盒測定蛋白濃度,組織蛋白稀釋后用非還原蛋白Buffer (50 mM Tris-HCl, pH 6.8, 5% Glycerol, 1% SDS, 0.002% Bromphenol Blue)添加5%β-巰基乙醇及PMSF,-80度保存。

潛在的應用: <1>已知基因的PCR克??;<2>mRNA選擇性剪接;<3>基因克隆與目標測序;<4> Western and Northern Blot;<5>蛋白檢測與蛋白質(zhì)組學;<6>芯片研究與表達圖譜。

 

注意事項:
1. 接收到細胞,肉眼觀察細胞培養(yǎng)基顏色,顯微鏡觀察細胞生長情況,并對細胞進行不同倍數(shù)拍照(建議收到時的培養(yǎng)瓶拍一張照片,顯微鏡拍收到時的細胞100X,200X各一張)。
2.用75%的酒精消毒(建議配置75%的酒精的水是滅菌過的)。
3.嚴格無菌操作,打開細胞培養(yǎng)瓶。
4.將細胞培養(yǎng)瓶內(nèi)的培養(yǎng)基用吸管*吸出(嚴禁直接傾倒),放入另一無菌容器中(建議換新的培養(yǎng)基培養(yǎng)細胞)。
5.用PBS 2-3ml/次輕輕洗細胞表面,洗3-4次遍,加入0.05%-EDTA1-1.5ml,顯微鏡下觀察細胞變圓,輕輕拍打培養(yǎng)瓶直到細胞脫落,加入終止液終止。
6.1000rpm,5min離心,重懸細胞。
7.換新的細胞培養(yǎng)瓶,37℃,5%CO2培養(yǎng)。

培養(yǎng)步驟:

對于貼壁細胞,傳代可參考以下方法:
1. 棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。
2. 加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中,置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘,然后在顯微鏡下觀察Ⅱ型肺泡上皮細胞|細胞消化情況,若細胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3. 按6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基,輕輕打勻后吸出,在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4. 將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。對于懸浮細胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細胞,1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
方法二:可選擇半數(shù)換液方式,棄去半數(shù)培養(yǎng)基后,將剩余細胞懸起,將細胞懸液按1:2到1:3的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

2,2-Dimethoxy-2-phenylacetophenone六種苯系物混標(GB 18582-2008室內(nèi)裝飾裝修材料內(nèi)墻涂料中有害anti- ICP27 antibody8(KLK8)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)

Valproic Acid8260氣體混標(6組份) 標準品anti- ICT1 antibody晚期糖基化終末產(chǎn)物受體(AGER)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)

2,2-BIS(4-CARBOXYPHENYL)HEXAFLUOROPROPANE8260氣體混標(6組份) 標準品anti- ID1 antibodyATP結合盒轉運蛋白G1(ABCG1)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)

2,2-Bis(bromomethyl)propane-1,3-diol烯醛/烯腈混標 標準品anti- ID1 antibody調(diào)節(jié)激活正常T-細胞表達分泌因子(RANTES)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)

BisoctrizoleEPA M-603 混標anti- ID3 antibody胸腺激活調(diào)節(jié)趨化因子(TARC)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)

2',3',4'-TRIMETHOXYACETOPHENONE烯醛/烯腈混標 標準品anti- IDE antibody蛋白激酶D1(PRKD1)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)

2,3-BIS(BROMOMETHYL)QUINOXALINE8260 Matrix Spike Solution 標準品anti- IDE antibody蛋白激酶D1(PRKD1)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)

Phthalazine3種替代物混標(8260B-M/HJ 639/HJ 605 4-溴氟苯anti- IDH1 antibodyV-Myc骨髓細胞瘤病癌基因同源物(MYC)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)

大鼠膀胱平滑肌細胞提取物Rhizopus oryzae Went et Prinsen Geerligs, t ..腸型脂肪酸結合蛋白抗體Human AZU1(Azurocidin) ELISA Kit網(wǎng)狀蛋白4(RTN4)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)

Saccharomyces cerevisiae Meyen ex E.C. Hans ..γ干擾素誘導蛋白202抗體Human BAFF(B-Cell Activating Factor) ELISA Kit神經(jīng)肽B(NPB)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)

freeze-dried整合素連接激酶-1抗體Human BDNF(Brain Derived Neurotrophic Factor) ELISA Kit受體2(SSTR2)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)

Spirochaeta caldaria Pohlschroeder et al.生長抑制因子基因1抗體Human BTC(Betacellulin) ELISA Kit受體3(SSTR3)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)

Mus musculus, mouse干擾素alpha 7蛋白抗體Human BMP-2(Bone Morphogenetic Protein 2) ELISA Kit受體4(SSTR4)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)

Mus musculus (B cell); Mus musculus (myeloma ..干擾素β抗體Human BMP-4(Bone Morphogenetic Protein 4) ELISA Kit受體5(SSTR5)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)

Aspergillus nidulans (Eidam) Winter, anamor ..小腸型脂肪酸結合蛋白抗體Human BMP-5(Bone Morphogenetic Protein 5) ELISA Kit視蛋白5(OPN5)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)

Mucor circinelloides f.circinelloides Sc ..擬南芥IKI3抗體Human BMP-7(Bone Morphogenetic Protein 7) ELISA Kit視蛋白4(OPN4)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)

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