收到細(xì)胞如何處理？

1、首先，觀察細(xì)胞培養(yǎng)瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象。若有，請拍照，（所拍照片將作為后續(xù)服務(wù)依據(jù)）。
2、用75%酒精擦拭細(xì)胞培養(yǎng)瓶表面，顯微鏡下觀察細(xì)胞狀態(tài)。因運輸問題，部分貼壁細(xì)胞會有少量從瓶壁脫落；先不要打開培養(yǎng)瓶蓋，將細(xì)胞置于細(xì)胞培養(yǎng)箱內(nèi)靜置培養(yǎng)2-4小時，以便穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)。
3、仔細(xì)閱讀細(xì)胞說明書，了解細(xì)胞相關(guān)信息，如貼壁特性（貼壁/懸浮）、細(xì)胞形態(tài)、所用基礎(chǔ)培養(yǎng)基、血清比例、所需細(xì)胞因子、傳代比例、換液頻率等。
4、靜置完成后，取出細(xì)胞培養(yǎng)瓶，鏡檢、拍照，記錄細(xì)胞狀態(tài)（所拍照片將作為后續(xù)服務(wù)依據(jù)）；建議細(xì)胞傳代培養(yǎng)后，定期拍照、記錄細(xì)胞生長狀態(tài)。
5、貼壁細(xì)胞：若細(xì)胞生長密度超過80%，可正常傳代；若未超過80%，移除細(xì)胞培養(yǎng)瓶內(nèi)培養(yǎng)基，預(yù)留5ml左右繼續(xù)培養(yǎng)，直至細(xì)胞密度達(dá)80%左右再進(jìn)行傳代操作，瓶蓋可稍微擰松。
6、懸浮細(xì)胞：將細(xì)胞培養(yǎng)瓶內(nèi)液體全部轉(zhuǎn)移至50ml無菌離心管內(nèi)，1200rpm離心5min，離心后上清培養(yǎng)基可收集備用，管底細(xì)胞沉淀加入5ml培養(yǎng)基吹打、重懸。鏡檢時，若細(xì)胞密度超過80%，可將細(xì)胞懸液分至2個細(xì)胞培養(yǎng)瓶內(nèi)培養(yǎng)，補加培養(yǎng)基至5ml；若細(xì)胞密度未超過80%，將細(xì)胞懸液移至原瓶繼續(xù)培養(yǎng)，直至細(xì)胞密度達(dá)80%左右時再進(jìn)行傳代操作。

大鼠前列腺上皮細(xì)胞提取物【Rat Prostate: NormalProstate Derivatives】
大鼠前列腺上皮細(xì)胞提取物是從大鼠原代前列腺上皮細(xì)胞提取的，大鼠原代前列腺上皮細(xì)胞從正常大鼠前列腺組織制備。所有的產(chǎn)品在發(fā)貨之前均經(jīng)過嚴(yán)格的QA/QC流程以確保其質(zhì)量。這些產(chǎn)品可以直接用于基因克隆，表達(dá)圖譜分析以及各種分子生物學(xué)實驗的研究。
總RNA制備：利用Qiagen RNeasy Kit的Trizol試劑分離RNA，然后用Qiagen RNA Clean Kit進(jìn)行純化。公司提供的總RNA樣品附有RNA樣品總濃度、總含量、電泳照片、OD值測定結(jié)果等。

cDNA制備：純化后的總RNA來合成cDNA一鏈，以50ul總反應(yīng)體系進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄，體系中包括MMLV反轉(zhuǎn)錄酶和隨機引物以及10mg總RNA。68℃反應(yīng)10min 后終止RT反應(yīng)。利用1x RT Buffer 運輸cDNA，1 ul cDNA 足夠做一次PCR反應(yīng)。所有cDNA產(chǎn)品在訂單發(fā)貨之前都經(jīng)過了嚴(yán)格的QA/QC分析，保證了產(chǎn)品的質(zhì)量。

蛋白制備：利用改良型RIPA Buffer (50mMTris, pH7.2, 150mM NaCl, 1mM EDTA, 1mM EGTA, 1% NP-40 , 1mM Na3VO4, 5mM NaF, 400uM PMSF, 1ug/ml of Pepstatin A, 5ug/ml of Aprotinin, 5ug/ml of Leupeptin)制備大鼠前列腺上皮組織裂解液，離心去除組織碎片，通過Bio-Rad蛋白檢測試劑盒測定蛋白濃度，組織蛋白稀釋后用非還原蛋白Buffer (50 mM Tris-HCl, pH 6.8, 5% Glycerol, 1% SDS, 0.002% Bromphenol Blue)添加5%β-巰基乙醇及PMSF，-80度保存。

潛在的應(yīng)用： <1>已知基因的PCR克??；<2>mRNA選擇性剪接；<3>基因克隆與目標(biāo)測序；<4> Western and Northern Blot；<5>蛋白檢測與蛋白質(zhì)組學(xué)；<6>芯片研究與表達(dá)圖譜。

細(xì)胞培養(yǎng)步驟：

一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1） 準(zhǔn)備DMEM-H培養(yǎng)基(GIBCO,貨號1199500bt，添加NaHCO3 1.5g/L)，90%；胎牛血清，10%。也可根據(jù)實驗需要選擇懸浮培養(yǎng)基，使293T細(xì)胞懸浮生長。
2） 培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3） 凍存液：90%*培養(yǎng)基，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲存。
二． 細(xì)胞處理：
1） 復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10cm皿中，加入約8ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2） 細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對于貼壁細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次。
2. 加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3. 按6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4. 將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3）細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。貼壁細(xì)胞凍存時，棄去培養(yǎng)基后加入少量，細(xì)胞變圓脫落后，加入約1ml含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中，再添加10%DMSO后進(jìn)行凍存。
冷凍保存細(xì)胞之方法？
冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ （-20 ℃30 分鐘*） → -80 ℃16~18 小時（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 儲存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下， 再放入液氮槽vapor phase儲存。*-20 ℃不可超過1 小時， 以防止冰晶過大，造成細(xì)胞大量死亡，亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中，惟存活率稍微降低一些。

2,6,7-Trioxa-1-phosphabicyclo2.2.2octane-4-methanol, 1-oxideB1、B2、G1、G2混標(biāo) 標(biāo)準(zhǔn)品anti- IFRD2 antibody多效生長因子(PTN)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)

2,6-Dichlorophe2種亞硝胺混標(biāo)(EN12868：2017）標(biāo)準(zhǔn)品anti- IFT122 antibody彈性蛋白酶4(ELA4)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)

2,6-Dinitrophenol;β-Dinitrophenol7種鄰苯二酸酯 混標(biāo)anti- IFT140 antibody阿黑皮素原(POMC)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)

2,6-DIBROMOQUINONE-4-CHLOROIMIDE10種鄰苯二酸酯混標(biāo) 標(biāo)準(zhǔn)品anti- IFT20 antibody分泌性白細(xì)胞蛋白酶抑制因子(SLPI)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)

2,6-Diisopropylaniline歐盟8種多環(huán)芳烴混標(biāo) 標(biāo)準(zhǔn)品anti- IFT25 antibody還原酶(GR)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)

2 7 12 17-TETRA-TERT-BUTYL-5 10 15 20-歐盟8種多環(huán)芳烴混標(biāo) 標(biāo)準(zhǔn)品anti- IFT27 antibody前膠原C端蛋白酶增強子1(PCPE1)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)

2,7-Diaminofluorene dihydrochloride15種鄰苯二酸酯混標(biāo)（GB/T 21911 除DNP）標(biāo)準(zhǔn)品anti- IFT43 antibody穿孔素1(PRF1)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)

2',7'-DICHLOROFLUORESCEIN18種鄰苯二酸類混標(biāo)anti- IFT52 antibodycAMP應(yīng)答元件結(jié)合蛋白(CREB)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)

大鼠前列腺上皮細(xì)胞提取物frozen整合素αL抗體Integrin αLHuman CCDC3(Coiled-coil domain-containing protein 3) ELISA KitN-酰合酶(NAGS)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)

Saccharomyces cerevisiae Meyen ex E.C. Hans ..白細(xì)胞介素6受體α抗體IL-6RαHuman CD32(Receptor II for the Fc Fragment of IgG) ELISA Kit酸核糖酰脒合酶(PFAS)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)

Saccharomyces cerevisiae Meyen ex E.C. Hans ..整合素α7抗體Human GP4(Platelet Membrane Glycoprotein IV) ELISA Kit異染色質(zhì)蛋白1(HP1)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)

frozen白介素7抗體Human CD40L(Cluster of Differentiation 40 Ligand) ELISA Kit染色框同源物2(CBX2)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)

Homo sapiens, human胰島素樣生長因子結(jié)合蛋白1抗體Human CD56(Neural Cell Adhesion Molecule) ELISA Kit染色框同源物1(CBX1)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)

Homo sapiens, human胰島素樣生長因子結(jié)合蛋白4抗體Human CD80(T-lymphocyte activation antigen CD80) ELISA Kit阻抑素2(PHB2)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)

Nectria haematococca Berkeley et Broome, te ..白介素2受體β鏈抗體 IL-2RβHuman CD93(Complement component C1q receptor) ELISA KitBassoon蛋白(BSN)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)

Homo sapiens, human白介素17受體D抗體Human CEA(Carcinoembryonic Antigen) ELISA Kit小腦肽3(CBLN3)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)

公司產(chǎn)品采用干冰運輸，經(jīng)過逐步的降溫，冷藏在-196℃度的液氮罐中，暫時停止其生命活動，保存其活性，使您的實驗更生動,公司代理品牌有：ATCC、sciencell、ICLC、GIBCO、IST-Banca等品牌.

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