腎上皮細胞和腫瘤原代細胞提取物【Human Kidney MatchPair: Normal Renal Epithelial Cell Derivatives and Primary Tumor Cell Derivatives】
人腎上皮細胞和腫瘤原代細胞提取物是從人腎上皮細胞和腫瘤細胞中提取的，人腎上皮細胞和腫瘤細胞分別從正常人腎組織和腫瘤組織中制備。正常人腎組織和腫瘤組織采集自各地方醫(yī)院，采集工作根據(jù)IRB 和 HIPAA批準的方案進行。所有的產(chǎn)品在發(fā)貨之前均經(jīng)過嚴格的QA/QC流程以確保其質(zhì)量。這些產(chǎn)品可以直接用于基因克隆，表達圖譜分析以及各種分子生物學(xué)實驗的研究。
總RNA制備：利用Qiagen RNeasy Kit的Trizol試劑分離RNA，然后用Qiagen RNA Clean Kit進行純化。公司提供的總RNA樣品附有RNA樣品總濃度、總含量、電泳照片、OD值測定結(jié)果等。

cDNA制備：純化后的總RNA來合成cDNA一鏈，以50ul總反應(yīng)體系進行逆轉(zhuǎn)錄，體系中包括MMLV反轉(zhuǎn)錄酶和隨機引物以及10mg總RNA。68℃反應(yīng)10min 后終止RT反應(yīng)。利用1x RT Buffer 運輸cDNA，1 ul cDNA 足夠做一次PCR反應(yīng)。所有cDNA產(chǎn)品在訂單發(fā)貨之前都經(jīng)過了嚴格的QA/QC分析，保證了產(chǎn)品的質(zhì)量。

蛋白制備：利用改良型RIPA Buffer (50mMTris, pH7.2, 150mM NaCl, 1mM EDTA, 1mM EGTA, 1% NP-40 , 1mM Na3VO4, 5mM NaF, 400uM PMSF, 1ug/ml of Pepstatin A, 5ug/ml of Aprotinin, 5ug/ml of Leupeptin)制備腎上皮細胞和腫瘤原代組織裂解液，離心去除組織碎片，通過Bio-Rad蛋白檢測試劑盒測定蛋白濃度，組織蛋白稀釋后用非還原蛋白Buffer (50 mM Tris-HCl, pH 6.8, 5% Glycerol, 1% SDS, 0.002% Bromphenol Blue)添加5%β-巰基乙醇及PMSF，-80度保存。

潛在的應(yīng)用： <1>已知基因的PCR克??；<2>mRNA選擇性剪接；<3>基因克隆與目標測序；<4> Western and Northern Blot；<5>蛋白檢測與蛋白質(zhì)組學(xué)；<6>芯片研究與表達圖譜。

操作要點：
1）將培養(yǎng)基在37℃水浴鍋預(yù)熱；準備一個15mL無菌的離心管，加入8mL預(yù)熱培養(yǎng)基。
2）將凍存細胞從液氮罐中取出，快速放入37℃水浴鍋中復(fù)溫（可準備一潔凈的燒杯，裝滿37℃的水，細胞凍存管取出后迅速放入燒杯內(nèi)，再逐步轉(zhuǎn)移到水浴鍋中）。輕輕晃動凍存管，使細胞能在1~2min內(nèi)*解凍，使細胞能盡快通過易受損的溫度段（-5~0℃）。注意凍存管管口不能沒入水中，BRL(大鼠肝細胞)避免引起污染。
3）用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺內(nèi)，將管內(nèi)細胞轉(zhuǎn)移至準備好的離心管內(nèi)，輕輕吹打液體，使細胞均勻分散，降低DMSO濃度，吹打時避免產(chǎn)生氣泡。用新鮮培養(yǎng)基洗管壁2次，均轉(zhuǎn)移至離心管內(nèi)。
4）800rpm離心5min，棄上清，加入新鮮的培養(yǎng)基，吹打制成細胞懸液。
5）將細胞懸液轉(zhuǎn)移至T25細胞瓶內(nèi)，補加適量的培養(yǎng)基，輕輕晃動細胞瓶使細胞分布均勻，放入溫箱內(nèi)培養(yǎng)。
6）第二天觀察細胞貼壁生長情況，換新鮮培養(yǎng)基以去除死細胞。繼續(xù)培養(yǎng)，待細胞長至80~90%匯合時正常傳代。一般剛復(fù)蘇的細胞需經(jīng)過2~3次傳代，細胞活力恢復(fù)后才能進行后續(xù)的實驗。
注意事項：
1. 接收到細胞，肉眼觀察細胞培養(yǎng)基顏色，顯微鏡觀察細胞生長情況，并對細胞進行不同倍數(shù)拍照（建議收到時的培養(yǎng)瓶拍一張照片，顯微鏡拍收到時的細胞100X,200X各一張）。
2.用75%的酒精消毒（建議配置75%的酒精的水是滅菌過的）。
3.嚴格無菌操作，打開細胞培養(yǎng)瓶。
4.將細胞培養(yǎng)瓶內(nèi)的培養(yǎng)基用吸管*吸出（嚴禁直接傾倒），放入另一無菌容器中（建議換新的培養(yǎng)基培養(yǎng)細胞）。
5.用PBS 2-3ml/次輕輕洗細胞表面，洗3-4次遍，加入0.05%-EDTA1-1.5ml,顯微鏡下觀察細胞變圓，輕輕拍打培養(yǎng)瓶直到細胞脫落，加入終止液終止。
6.1000rpm，5min離心，重懸細胞。
7.換新的細胞培養(yǎng)瓶，37℃，5%CO2培養(yǎng)。 

FIBROBLAST GROWTH FACTOR, BASIC, HUMANDCAA Methyl Ester 標準品anti- KPNA5 antibody原鈣黏素α1(PCDHα1)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)

(17-beta)-Estra-1,3,5(10)-triene-3,17-diol 3-(bis(2-chloroethyl)carbamate) 17-(dihydrogenphosphate) disodium salt2，4-二氯苯酸酯 標準品anti- KPNA6 antibody酯酶Cγ1(PLCγ1)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)

1,3,5[10]-ESTRATRIENE-3,16ALPHA,17BETA-TRIOL 3-SULFATE SODIUM SALT庚醛-DNPH 標準品anti- KPTN antibodyRas GTP酶激活蛋白1(RASA1)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)

Estriol-16beta-D-glucopyranosiduronic acidHexanal-DNPH Solution 標準品anti- KRAP, SSFA2 antibodyGDP解離抑制因子1(GDI1)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)

1,3,5[10]-ESTRATRIEN-3-OL-17-ONE 3-GLUCURONIDE SODIUM SALT糠醛-DNPH 標準品anti- KRAS antibody二胺酶(DAO)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)

ESTRONE 3-SULFATE SODIUM SALT異戊醛-DNPH 標準品anti- KRAS-2A-specific antibody細胞間粘附分子5(ICAM5)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)

Sodium hypophosphite monohydrateCrotonaldehyde-DNPH Solution 標準品anti- KRAS-2B-specific antibody血栓素B2(TXB2)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)

HYPOCHLOROUS ACID TERT-BUTYL ESTERGluteraldehyde-DNPH Solution 標準品anti- KRBP antibody10(KLK10)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)

腎上皮細胞和腫瘤原代細胞提取物freeze-dried淋巴細胞趨化因子抗體Human PLD2(Phospholipase D2) ELISA Kit蒼白蛋白(PLDN)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)

freeze-dried層粘連相關(guān)多肽蛋白1抗體Human GPT2(Alanine aminotransferase 2) ELISA Kit黑色素A(MLANA)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)

Saccharomyces cerevisiae Meyen ex E.C. Hans ..酸化淋巴增強因子-1抗體Human SERPINH1(Serpin H1) ELISA Kit平滑肌蛋白3(LMOD3)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)

freeze-dried腫瘤抑制基因LATS1抗體Human CTSK(Cathepsin K) ELISA Kit鉀蛋白(KALRN)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)

Fusarium moniliforme Sheldon, anamorph酸化單蛋白激酶1/2抗體Human ITGAV(Integrin alpha-V) ELISA KitAPEX核酸酶1(APEX1)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)

Phialophora verrucosa Medlar, anamorph酸化腫瘤抑制基因LATS1抗體Human DEFB103A(Beta-defensin 103) ELISA Kit肌肽合酶1(CARNS1)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)

Hygrophoropsis aurantiaca (Wulfen : Fries) ..酸化/蛋白激酶抗體Human KLK2(Kallikrein-2) ELISA KitN-α-酰轉(zhuǎn)移酶10(NαA10)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)

Saccharomyces cerevisiae Meyen ex E.C. Hans ..黃體激素釋放激素類似物抗體Human PENK(Proenkephalin-A) ELISA KitClarin 1蛋白(CLRN1)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)

培養(yǎng)步驟：

對于貼壁細胞，傳代可參考以下方法：
1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。
2. 加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察Ⅱ型肺泡上皮細胞|細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3. 按6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4. 將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。對于懸浮細胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細胞，1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
方法二：可選擇半數(shù)換液方式，棄去半數(shù)培養(yǎng)基后，將剩余細胞懸起，將細胞懸液按1：2到1：3的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。