操作要點：
1）將培養(yǎng)基在37℃水浴鍋預(yù)熱；準(zhǔn)備一個15mL無菌的離心管，加入8mL預(yù)熱培養(yǎng)基。
2）將凍存細胞從液氮罐中取出，快速放入37℃水浴鍋中復(fù)溫（可準(zhǔn)備一潔凈的燒杯，裝滿37℃的水，細胞凍存管取出后迅速放入燒杯內(nèi)，再逐步轉(zhuǎn)移到水浴鍋中）。輕輕晃動凍存管，使細胞能在1~2min內(nèi)*解凍，使細胞能盡快通過易受損的溫度段（-5~0℃）。注意凍存管管口不能沒入水中，BRL(大鼠肝細胞)避免引起污染。
3）用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺內(nèi)，將管內(nèi)細胞轉(zhuǎn)移至準(zhǔn)備好的離心管內(nèi)，輕輕吹打液體，使細胞均勻分散，降低DMSO濃度，吹打時避免產(chǎn)生氣泡。用新鮮培養(yǎng)基洗管壁2次，均轉(zhuǎn)移至離心管內(nèi)。
4）800rpm離心5min，棄上清，加入新鮮的培養(yǎng)基，吹打制成細胞懸液。
5）將細胞懸液轉(zhuǎn)移至T25細胞瓶內(nèi)，補加適量的培養(yǎng)基，輕輕晃動細胞瓶使細胞分布均勻，放入溫箱內(nèi)培養(yǎng)。
6）第二天觀察細胞貼壁生長情況，換新鮮培養(yǎng)基以去除死細胞。繼續(xù)培養(yǎng)，待細胞長至80~90%匯合時正常傳代。一般剛復(fù)蘇的細胞需經(jīng)過2~3次傳代，細胞活力恢復(fù)后才能進行后續(xù)的實驗。

大鼠卵巢成纖維細胞提取物【Rat Ovaries: Normal Ovaries Derivatives】
大鼠卵巢成纖維細胞提取物是從大鼠原代卵巢成纖維細胞提取的，大鼠原代卵巢成纖維細胞從正常大鼠卵巢組織制備。所有的產(chǎn)品在發(fā)貨之前均經(jīng)過嚴(yán)格的QA/QC流程以確保其質(zhì)量。這些產(chǎn)品可以直接用于基因克隆，表達圖譜分析以及各種分子生物學(xué)實驗的研究。
總RNA制備：利用Qiagen RNeasy Kit的Trizol試劑分離RNA，然后用Qiagen RNA Clean Kit進行純化。公司提供的總RNA樣品附有RNA樣品總濃度、總含量、電泳照片、OD值測定結(jié)果等。

cDNA制備：純化后的總RNA來合成cDNA一鏈，以50ul總反應(yīng)體系進行逆轉(zhuǎn)錄，體系中包括MMLV反轉(zhuǎn)錄酶和隨機引物以及10mg總RNA。68℃反應(yīng)10min 后終止RT反應(yīng)。利用1x RT Buffer 運輸cDNA，1 ul cDNA 足夠做一次PCR反應(yīng)。所有cDNA產(chǎn)品在訂單發(fā)貨之前都經(jīng)過了嚴(yán)格的QA/QC分析，保證了產(chǎn)品的質(zhì)量。

蛋白制備：利用改良型RIPA Buffer (50mMTris, pH7.2, 150mM NaCl, 1mM EDTA, 1mM EGTA, 1% NP-40 , 1mM Na3VO4, 5mM NaF, 400uM PMSF, 1ug/ml of Pepstatin A, 5ug/ml of Aprotinin, 5ug/ml of Leupeptin)制備大鼠卵巢成纖維組織裂解液，離心去除組織碎片，通過Bio-Rad蛋白檢測試劑盒測定蛋白濃度，組織蛋白稀釋后用非還原蛋白Buffer (50 mM Tris-HCl, pH 6.8, 5% Glycerol, 1% SDS, 0.002% Bromphenol Blue)添加5%β-巰基乙醇及PMSF，-80度保存。

潛在的應(yīng)用： <1>已知基因的PCR克?。?lt;2>mRNA選擇性剪接；<3>基因克隆與目標(biāo)測序；<4> Western and Northern Blot；<5>蛋白檢測與蛋白質(zhì)組學(xué)；<6>芯片研究與表達圖譜。

注意事項：
1. 接收到細胞，肉眼觀察細胞培養(yǎng)基顏色，顯微鏡觀察細胞生長情況，并對細胞進行不同倍數(shù)拍照（建議收到時的培養(yǎng)瓶拍一張照片，顯微鏡拍收到時的細胞100X,200X各一張）。
2.用75%的酒精消毒（建議配置75%的酒精的水是滅菌過的）。
3.嚴(yán)格無菌操作，打開細胞培養(yǎng)瓶。
4.將細胞培養(yǎng)瓶內(nèi)的培養(yǎng)基用吸管*吸出（嚴(yán)禁直接傾倒），放入另一無菌容器中（建議換新的培養(yǎng)基培養(yǎng)細胞）。
5.用PBS 2-3ml/次輕輕洗細胞表面，洗3-4次遍，加入0.05%-EDTA1-1.5ml,顯微鏡下觀察細胞變圓，輕輕拍打培養(yǎng)瓶直到細胞脫落，加入終止液終止。
6.1000rpm，5min離心，重懸細胞。
7.換新的細胞培養(yǎng)瓶，37℃，5%CO2培養(yǎng)。

培養(yǎng)步驟：

對于貼壁細胞，傳代可參考以下方法：
1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。
2. 加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察Ⅱ型肺泡上皮細胞|細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3. 按6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4. 將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。對于懸浮細胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細胞，1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
方法二：可選擇半數(shù)換液方式，棄去半數(shù)培養(yǎng)基后，將剩余細胞懸起，將細胞懸液按1：2到1：3的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

N,N-Dimethylpiperidin-4-amine19種鄰苯二酸酯混標(biāo)（煙草行業(yè)適用）（含DNP單峰和DINP異構(gòu)體）anti- INT11 antibody細胞角蛋白19片段抗原21-1(CYFRA21-1)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)

Pyridinium toluene-4-sulphonate10種混標(biāo)anti- Integrin alpha 6 antibody上皮細胞粘附分子(EPCAM)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)

Hexahydro-4-methylphthalic anhydride12種鄰苯二酸酯混標(biāo)（SN/T 2249-2009塑料及其制品中鄰苯二anti- Integrin alpha-1 antibody酰羧化酶α(ACACα)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)

4-METHYL-1,3-DIOXOLANE18種鄰苯二酸酯混標(biāo)（煙草行業(yè)適用）（含DNP單峰和DNP異構(gòu)體混合物anti- Integrin alpha-3 antibody纖維蛋白肽B(FPB)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)

4-MethyliMidazole;4-Methylglyoxaline14種酚類混標(biāo)（HJ744-2015 水質(zhì) 酚類化合物的測定 氣相色譜-anti- Integrin alpha-3 antibody含血管性血友病因子A域蛋白2(vWA2)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)

4-Methyl-1-pentene;1-Isohexene; Isobutylethylene; 3-Isopropylpropene;3種 8270 App. IX Calibration Mix 標(biāo)準(zhǔn)品anti- Integrin alpha-4 antibody腺苷脫氨酶(ADA)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)

2,6-Dinitrobenzaldehyde36種 8270 App. IX Calibration Mix 標(biāo)準(zhǔn)品anti- Integrin alpha-5 antibody肌動蛋白γ1(ACTγ1)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)

4-Methylphthalic acid13種酚類混標(biāo)（HJ 676-2013 水質(zhì) 酚類化合物的測定 液液萃取anti- Integrin alpha-9 antibody轉(zhuǎn)錄激活因子5(ATF5)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)

大鼠卵巢成纖維細胞提取物Saccharomyces cerevisiae Meyen ex E.C. Hans ..脊柱側(cè)后凸畸形肽酶抗體Human TLR2(Toll-like receptor 2) ELISA Kit旋轉(zhuǎn)蛋白(RTTN)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)

Listeria welshimeri Rocourt and Grimont離子通道蛋白Kv4.3抗體Human TLR3(Toll-like receptor 3) ELISA Kit濕結(jié)合蛋白(RTBDN)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)

Saccharomyces cerevisiae Meyen ex E.C. Hans ..Killin-p53調(diào)節(jié)復(fù)制抑制蛋白抗體Human TNF-α(Tumor Necrosis Factor Alpha) ELISA Kit休眠蛋白(RSN)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)

Cyberlindnera mississippiensis (Kurtzman et ..鉀通道多聚體結(jié)構(gòu)域KCTD18抗體Human TNFβ(Tumor Necrosis Factor Beta) ELISA KitRepetin蛋白(RPTN)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)

frozen肝果糖激酶抗體Human TNFRSF11A/RANK(Tumor necrosis factor receptor superfamily member 11A) ELISA KitRNA基轉(zhuǎn)移酶(RNMT)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)

Saprolegnia sp.細胞性受體NK-p80抗體Human TNFRSF13B/TACI(Tumor necrosis factor receptor superfamily member 13B) ELISA Kit核黃素激酶(RFK)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)

Homo sapiens, human角質(zhì)細胞生長因子調(diào)節(jié)蛋白2抗體Human TNFRSF13C/BAFFR(Tumor necrosis factor receptor superfamily member 13C) ELISA Kit飽和酶(RETSAT)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)

Mus musculus, mouse embryo組蛋白基化KMT3B抗體（雄激素受體激活蛋白）Human TNFRSF14/HVEM(Tumor necrosis factor receptor superfamily member 14) ELISA Kit脫酶12(RDH12)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)