胃壁細(xì)胞和腫瘤原代細(xì)胞提取物【Human Stomach MatchPair: Normal Parietal Cell Derivatives and Primary Tumor Cell Derivatives】
人胃壁細(xì)胞和腫瘤原代細(xì)胞提取物是從人胃壁細(xì)胞和腫瘤細(xì)胞中提取的，人胃壁細(xì)胞和腫瘤細(xì)胞分別從正常人胃組織和腫瘤組織中制備。正常人胃組織和腫瘤組織采集自各地方醫(yī)院，采集工作根據(jù)IRB 和 HIPAA批準(zhǔn)的方案進(jìn)行。所有的產(chǎn)品在發(fā)貨之前均經(jīng)過嚴(yán)格的QA/QC流程以確保其質(zhì)量。這些產(chǎn)品可以直接用于基因克隆，表達(dá)圖譜分析以及各種分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)的研究。
總RNA制備：利用Qiagen RNeasy Kit的Trizol試劑分離RNA，然后用Qiagen RNA Clean Kit進(jìn)行純化。公司提供的總RNA樣品附有RNA樣品總濃度、總含量、電泳照片、OD值測定結(jié)果等。

cDNA制備：純化后的總RNA來合成cDNA一鏈，以50ul總反應(yīng)體系進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄，體系中包括MMLV反轉(zhuǎn)錄酶和隨機(jī)引物以及10mg總RNA。68℃反應(yīng)10min 后終止RT反應(yīng)。利用1x RT Buffer 運(yùn)輸cDNA，1 ul cDNA 足夠做一次PCR反應(yīng)。所有cDNA產(chǎn)品在訂單發(fā)貨之前都經(jīng)過了嚴(yán)格的QA/QC分析，保證了產(chǎn)品的質(zhì)量。

蛋白制備：利用改良型RIPA Buffer (50mMTris, pH7.2, 150mM NaCl, 1mM EDTA, 1mM EGTA, 1% NP-40 , 1mM Na3VO4, 5mM NaF, 400uM PMSF, 1ug/ml of Pepstatin A, 5ug/ml of Aprotinin, 5ug/ml of Leupeptin)制備胃壁細(xì)胞和腫瘤原代組織裂解液，離心去除組織碎片，通過Bio-Rad蛋白檢測試劑盒測定蛋白濃度，組織蛋白稀釋后用非還原蛋白Buffer (50 mM Tris-HCl, pH 6.8, 5% Glycerol, 1% SDS, 0.002% Bromphenol Blue)添加5%β-巰基乙醇及PMSF，-80度保存。

潛在的應(yīng)用： <1>已知基因的PCR克隆；<2>mRNA選擇性剪接；<3>基因克隆與目標(biāo)測序；<4> Western and Northern Blot；<5>蛋白檢測與蛋白質(zhì)組學(xué)；<6>芯片研究與表達(dá)圖譜。

冷凍保存細(xì)胞之方法？
冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ （-20 ℃30 分鐘*） → -80 ℃16~18 小時（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 儲存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機(jī)中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下， 再放入液氮槽vapor phase儲存。*-20 ℃不可超過1 小時， 以防止冰晶過大，造成細(xì)胞大量死亡，亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中，惟存活率稍微降低一些。

細(xì)胞培養(yǎng)步驟：

一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1） 準(zhǔn)備DMEM-H培養(yǎng)基(GIBCO,貨號1199500bt，添加NaHCO3 1.5g/L)，90%；胎牛血清，10%。也可根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要選擇懸浮培養(yǎng)基，使293T細(xì)胞懸浮生長。
2） 培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3） 凍存液：90%*培養(yǎng)基，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲存。
二． 細(xì)胞處理：
1） 復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10cm皿中，加入約8ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2） 細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對于貼壁細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次。
2. 加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3. 按6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4. 將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3）細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。貼壁細(xì)胞凍存時，棄去培養(yǎng)基后加入少量，細(xì)胞變圓脫落后，加入約1ml含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中，再添加10%DMSO后進(jìn)行凍存。

收到細(xì)胞如何處理？

1、首先，觀察細(xì)胞培養(yǎng)瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象。若有，請拍照，（所拍照片將作為后續(xù)服務(wù)依據(jù)）。
2、用75%酒精擦拭細(xì)胞培養(yǎng)瓶表面，顯微鏡下觀察細(xì)胞狀態(tài)。因運(yùn)輸問題，部分貼壁細(xì)胞會有少量從瓶壁脫落；先不要打開培養(yǎng)瓶蓋，將細(xì)胞置于細(xì)胞培養(yǎng)箱內(nèi)靜置培養(yǎng)2-4小時，以便穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)。
3、仔細(xì)閱讀細(xì)胞說明書，了解細(xì)胞相關(guān)信息，如貼壁特性（貼壁/懸浮）、細(xì)胞形態(tài)、所用基礎(chǔ)培養(yǎng)基、血清比例、所需細(xì)胞因子、傳代比例、換液頻率等。
4、靜置完成后，取出細(xì)胞培養(yǎng)瓶，鏡檢、拍照，記錄細(xì)胞狀態(tài)（所拍照片將作為后續(xù)服務(wù)依據(jù)）；建議細(xì)胞傳代培養(yǎng)后，定期拍照、記錄細(xì)胞生長狀態(tài)。
5、貼壁細(xì)胞：若細(xì)胞生長密度超過80%，可正常傳代；若未超過80%，移除細(xì)胞培養(yǎng)瓶內(nèi)培養(yǎng)基，預(yù)留5ml左右繼續(xù)培養(yǎng)，直至細(xì)胞密度達(dá)80%左右再進(jìn)行傳代操作，瓶蓋可稍微擰松。
6、懸浮細(xì)胞：將細(xì)胞培養(yǎng)瓶內(nèi)液體全部轉(zhuǎn)移至50ml無菌離心管內(nèi)，1200rpm離心5min，離心后上清培養(yǎng)基可收集備用，管底細(xì)胞沉淀加入5ml培養(yǎng)基吹打、重懸。鏡檢時，若細(xì)胞密度超過80%，可將細(xì)胞懸液分至2個細(xì)胞培養(yǎng)瓶內(nèi)培養(yǎng)，補(bǔ)加培養(yǎng)基至5ml；若細(xì)胞密度未超過80%，將細(xì)胞懸液移至原瓶繼續(xù)培養(yǎng)，直至細(xì)胞密度達(dá)80%左右時再進(jìn)行傳代操作。
公司產(chǎn)品采用干冰運(yùn)輸，經(jīng)過逐步的降溫，冷藏在-196℃度的液氮罐中，暫時停止其生命活動，保存其活性，使您的實(shí)驗(yàn)更生動,公司代理品牌有：ATCC、sciencell、ICLC、GIBCO、IST-Banca等品牌.

OXAMIC ACID SODIUM SALT2,3-二氯酸酯 標(biāo)準(zhǔn)品anti- KLHL4 antibody熱休克轉(zhuǎn)錄因子1(HSF1)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)

Escitalopram oxalateDCAA Methyl Ester 標(biāo)準(zhǔn)品anti- KLHL9 antibody白介素18(IL18)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)

(-)-4-(4-Dimethylamino)-1-(4-fluorophenyl)-1-(hydroxybuty)-3-hydroxymethyl)-benzonitrile hemi D-(+)-di-p-toloyltartaric acid saltDCAA Methyl Ester 標(biāo)準(zhǔn)品anti- KLRF1 antibody干擾素α(IFNα)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)

COLUMBIUM OXALATEDCAA Methyl Ester 標(biāo)準(zhǔn)品anti- KLRG1 antibody抗載脂蛋白抗體(AAHA)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)

Ferrous oxalate dihydrateDCAA Methyl Ester 標(biāo)準(zhǔn)品anti- KPCA antibody淋巴細(xì)胞胞漿蛋白2(LCP2)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)

ENTERODIOLDCAA Methyl Ester 標(biāo)準(zhǔn)品anti- KPNA1 antibodyT-細(xì)胞激活連接蛋白(LAT)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)

ENTEROLACTONEDCAA Methyl Ester 標(biāo)準(zhǔn)品anti- KPNA2 antibody蛋白酸酶受體H(PTPRH)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)

SUPEROXIDE DISMUTASE FROM BOVINE ERYTHROCYTESDCAA Methyl Ester 標(biāo)準(zhǔn)品anti- KPNA4 antibody神經(jīng)氨酸酶(NEU)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)

胃壁細(xì)胞和腫瘤原代細(xì)胞提取物Saccharomyces cerevisiae Meyen ex E.C. Hans ..β內(nèi)酰胺酶樣蛋白2抗體Human RGS10(Regulator of G-protein signaling 10) ELISA KitAbl交互子2(ABI2)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)

Homo sapiens, human神經(jīng)突觸粘附樣分子4抗體Human RGS3(Regulator of G-protein signaling 3) ELISA KitAbl交互子1(ABI1)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)

Homo sapiens, human乳清蛋白α抗體Human HMGB4(High mobility group protein B4) ELISA KitAjuba蛋白(JUB)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)

Clostridium bifermentans (Weinberg and Segu ..核纖層蛋白B2抗體Human ATOH1(Protein atonal homolog 1) ELISA Kit高爾基糖蛋白1(GLG1)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)

frozen淺表層粘膜蛋白多糖抗體Human ARSA(Arylsulfatase A) ELISA Kit白介素21受體(IL21R)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)

Saccharomyces cerevisiae Meyen ex E.C. Hans ..調(diào)控胚胎干細(xì)胞分化蛋白Lhx2抗體Human HMGB3(High mobility group protein B3) ELISA KitDEK癌基因(DEK)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)

Chondrostereum purpureum (Persoon : Fries) ..富含重復(fù)跨膜神經(jīng)元蛋白1抗體Human TPSB2(Tryptase beta-2) ELISA KitPeflin蛋白(PEF1)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)

Saccharomyces cerevisiae Meyen ex E.C. Hans ..脂質(zhì)運(yùn)載蛋白1抗體Human MT1E(Metallothionein-1E) ELISA KitSyntabulin蛋白(SYBU)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)