收到細(xì)胞如何處理？

1、首先，觀察細(xì)胞培養(yǎng)瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象。若有，請(qǐng)拍照，（所拍照片將作為后續(xù)服務(wù)依據(jù)）。
2、用75%酒精擦拭細(xì)胞培養(yǎng)瓶表面，顯微鏡下觀察細(xì)胞狀態(tài)。因運(yùn)輸問題，部分貼壁細(xì)胞會(huì)有少量從瓶壁脫落；先不要打開培養(yǎng)瓶蓋，將細(xì)胞置于細(xì)胞培養(yǎng)箱內(nèi)靜置培養(yǎng)2-4小時(shí)，以便穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)。
3、仔細(xì)閱讀細(xì)胞說明書，了解細(xì)胞相關(guān)信息，如貼壁特性（貼壁/懸?。?、細(xì)胞形態(tài)、所用基礎(chǔ)培養(yǎng)基、血清比例、所需細(xì)胞因子、傳代比例、換液頻率等。
4、靜置完成后，取出細(xì)胞培養(yǎng)瓶，鏡檢、拍照，記錄細(xì)胞狀態(tài)（所拍照片將作為后續(xù)服務(wù)依據(jù)）；建議細(xì)胞傳代培養(yǎng)后，定期拍照、記錄細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)。
5、貼壁細(xì)胞：若細(xì)胞生長(zhǎng)密度超過80%，可正常傳代；若未超過80%，移除細(xì)胞培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)培養(yǎng)基，預(yù)留5ml左右繼續(xù)培養(yǎng)，直至細(xì)胞密度達(dá)80%左右再進(jìn)行傳代操作，瓶蓋可稍微擰松。
6、懸浮細(xì)胞：將細(xì)胞培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)液體全部轉(zhuǎn)移至50ml無菌離心管內(nèi)，1200rpm離心5min，離心后上清培養(yǎng)基可收集備用，管底細(xì)胞沉淀加入5ml培養(yǎng)基吹打、重懸。鏡檢時(shí)，若細(xì)胞密度超過80%，可將細(xì)胞懸液分至2個(gè)細(xì)胞培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)培養(yǎng)，補(bǔ)加培養(yǎng)基至5ml；若細(xì)胞密度未超過80%，將細(xì)胞懸液移至原瓶繼續(xù)培養(yǎng)，直至細(xì)胞密度達(dá)80%左右時(shí)再進(jìn)行傳代操作。

人體食管癌組織提取物【Cancer: Human Esophageal Cancer Derivatives】
食管癌是發(fā)生在食管上皮組織的惡性腫瘤，按組織學(xué)可以分為鱗狀細(xì)胞癌、腺癌和未分化癌三種。公司科技提供來自新鮮或冷凍人體食管癌組織中高質(zhì)量的總RNA，PCR準(zhǔn)備的一條cDNA鏈，蛋白質(zhì)及其亞組分。這些臨床定義的正常人體組織標(biāo)本采集自各地方醫(yī)院，采集工作根據(jù)IRB和HIPAA批準(zhǔn)的方案進(jìn)行。所有的產(chǎn)品在發(fā)貨之前均經(jīng)過嚴(yán)格的QA/QC流程以確保其質(zhì)量。這些產(chǎn)品可以直接用于基因克隆，表達(dá)圖譜分析以及各種分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)的研究。
總RNA制備：利用Qiagen RNeasy Kit的Trizol試劑分離RNA，然后用Qiagen RNA Clean Kit進(jìn)行純化。公司提供的總RNA樣品附有RNA樣品總濃度、總含量、電泳照片、OD值測(cè)定結(jié)果等。

cDNA制備：純化后的總RNA來合成cDNA一鏈，以50ul總反應(yīng)體系進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄，體系中包括MMLV反轉(zhuǎn)錄酶和隨機(jī)引物以及10mg總RNA。68℃反應(yīng)10min 后終止RT反應(yīng)。利用1x RT Buffer 運(yùn)輸cDNA，1 ul cDNA 足夠做一次PCR反應(yīng)。所有cDNA產(chǎn)品在訂單發(fā)貨之前都經(jīng)過了嚴(yán)格的QA/QC分析，保證了產(chǎn)品的質(zhì)量。

蛋白制備：利用改良型RIPA Buffer (50mMTris, pH7.2, 150mM NaCl, 1mM EDTA, 1mM EGTA, 1% NP-40 , 1mM Na3VO4, 5mM NaF, 400uM PMSF, 1ug/ml of Pepstatin A, 5ug/ml of Aprotinin, 5ug/ml of Leupeptin)制備人體食管癌組織裂解液，離心去除組織碎片，通過Bio-Rad蛋白檢測(cè)試劑盒測(cè)定蛋白濃度，組織蛋白稀釋后用非還原蛋白Buffer (50 mM Tris-HCl, pH 6.8, 5% Glycerol, 1% SDS, 0.002% Bromphenol Blue)添加5%β-巰基乙醇及PMSF，-80度保存。

潛在的應(yīng)用： <1>已知基因的PCR克??；<2>mRNA選擇性剪接；<3>基因克隆與目標(biāo)測(cè)序；<4> Western and Northern Blot；<5>蛋白檢測(cè)與蛋白質(zhì)組學(xué)；<6>芯片研究與表達(dá)圖譜。

細(xì)胞培養(yǎng)步驟：

一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1） 準(zhǔn)備DMEM-H培養(yǎng)基(GIBCO,貨號(hào)1199500bt，添加NaHCO3 1.5g/L)，90%；胎牛血清，10%。也可根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要選擇懸浮培養(yǎng)基，使293T細(xì)胞懸浮生長(zhǎng)。
2） 培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3） 凍存液：90%*培養(yǎng)基，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲(chǔ)存。
二． 細(xì)胞處理：
1） 復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10cm皿中，加入約8ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2） 細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對(duì)于貼壁細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤(rùn)洗細(xì)胞1-2次。
2. 加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3. 按6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4. 將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3）細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。貼壁細(xì)胞凍存時(shí)，棄去培養(yǎng)基后加入少量，細(xì)胞變圓脫落后，加入約1ml含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中，再添加10%DMSO后進(jìn)行凍存。
冷凍保存細(xì)胞之方法？
冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ （-20 ℃30 分鐘*） → -80 ℃16~18 小時(shí)（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 儲(chǔ)存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機(jī)中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下， 再放入液氮槽vapor phase儲(chǔ)存。*-20 ℃不可超過1 小時(shí)， 以防止冰晶過大，造成細(xì)胞大量死亡，亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中，惟存活率稍微降低一些。

1H-Imidazole-4-carbaldehydeALKB蛋白抗體anti- MAT1A antibodyⅧ(F8)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)

BONGKREKIC ACID酰?；D(zhuǎn)移酶1抗體anti- MAT2A antibody載脂蛋白F(APOF)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)

BLASTICIDIN S HYDROCHLORIDE酸化β-肌動(dòng)蛋白抗體anti- MAT2B antibody載脂蛋白F(APOF)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)

Monensin sodium salt酸化酰羧化酶抗體anti- MATK antibody脂酰(PS)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)

LIGNOCERIC ACID酸化腺苷三酸結(jié)合盒轉(zhuǎn)運(yùn)體A1抗體anti- MATK antibody脂酰(PS)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)

LIGNOSULFONIC ACID, CALCIUM SALT酸化鐵調(diào)節(jié)蛋白1抗體anti- MATR3 antibody成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子10(FGF10)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)

Sodium lignosulfonate酸化促腎上腺皮質(zhì)激素ACTH抗體anti- Matrilin 2 antibody白介素2(IL2)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)

Hexaammonium molybdate酸化內(nèi)收蛋白抗體anti- MAVS antibody白介素4(IL4)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)

人體食管癌組織提取物Saccharomyces cerevisiae Meyen ex E.C. Hans ..多藥耐藥相關(guān)蛋白1抗體Human CYP7A1(Cholesterol 7-alpha-monooxygenase) ELISA Kit受體1(FOLR1)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)

Hafnia alvei Moller多藥耐藥相關(guān)蛋白2抗體Human MYB(Transcriptional activator Myb) ELISA Kit跨膜蛋白酶6(TMPRSS6)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)

Mus musculus, mouse線粒體核糖體蛋白L28抗體Human KYNU(Kynureninase) ELISA Kit神經(jīng)肽Y受體Y5(NPY5R)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)

Acytostelium singulare Cavender et al.錯(cuò)配修復(fù)蛋白2抗體Human OAT(Ornithine aminotransferase, mitochondrial) ELISA Kit活化T-細(xì)胞核因子2(NFATC2)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)

Phytophthora infestans (Montagne) de Bary褪黑素受體1A/松果體素受體1A抗體Human PRG2(Bone marrow proteoglycan) ELISA KitTERF1相互作用核因子2(TINF2)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)

Gibberella fujikuroi (Sawada) Wollenweber, ..髓樣分化蛋白抗體Human DPP3(Dipeptidyl peptidase 3) ELISA Kit溶質(zhì)載體家族30成員10(SLC30A10)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)

frozen粘蛋白-2/上皮膜抗原2抗體Human RPS19(Ribosomal protein S19) ELISA Kit內(nèi)β-N-?；被咸烟擒彰?ENGASE)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)

Methylobacterium zatmanii Green et al.粘蛋白4抗體Human SIGLEC10(Sialic acid-binding Ig-like lectin 10) ELISA Kit孕酮免疫調(diào)節(jié)結(jié)合因子1(PIBF1)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)

公司產(chǎn)品采用干冰運(yùn)輸，經(jīng)過逐步的降溫，冷藏在-196℃度的液氮罐中，暫時(shí)停止其生命活動(dòng)，保存其活性，使您的實(shí)驗(yàn)更生動(dòng),公司代理品牌有：ATCC、sciencell、ICLC、GIBCO、IST-Banca等品牌.

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