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小鼠骨骼肌組織提取物

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品       牌其他品牌

廠商性質生產商

所  在  地上海市

更新時間:2020-10-26 20:24:37瀏覽次數:131次

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公司產品采用干冰運輸,經過逐步的降溫,冷藏在-196℃度的液氮罐中,暫時停止其生命活動,保存其活性,使您的實驗更生動,公司代理品牌有:ATCC、sciencell、ICLC、GIBCO、IST-Banca等品牌.

 產品名稱

 規(guī)格

 貨號

 小鼠骨骼肌組織提取物

 詳見說明書

XG-X7018

小鼠骨骼肌組織提取物 【Mouse Muscle: Normal Skeletal Derivatives】
骨骼肌借肌腱附著于骨,每塊肌均由平行排列、細長的肌纖維束構成。公司科技提供來自新鮮或冷凍小鼠骨骼肌組織中高質量的總RNA,PCR準備的條cDNA鏈,蛋白質及其亞組分。所有的產品在發(fā)貨之前均經過嚴格的QA/QC流程以確保其質量。這些產品可以直接用于基因克隆,表達圖譜分析以及各種分子生物學實驗的研究。
總RNA制備:利用Qiagen RNeasy Kit的Trizol試劑分離RNA,然后用Qiagen RNA Clean Kit進行純化。公司提供的總RNA樣品附有RNA樣品總濃度、總含量、電泳照片、OD值測定結果等。

cDNA制備:純化后的總RNA來合成cDNA鏈,以50ul總反應體系進行逆轉錄,體系中包括MMLV反轉錄酶和隨機引物以及10mg總RNA。68℃反應10min 后終止RT反應。利用1x RT Buffer 運輸cDNA,1 ul cDNA 足夠做一次PCR反應。所有cDNA產品在訂單發(fā)貨之前都經過了嚴格的QA/QC分析,保證了產品的質量。

蛋白制備:利用改良型RIPA Buffer (50mMTris, pH7.2, 150mM NaCl, 1mM EDTA, 1mM EGTA, 1% NP-40 , 1mM Na3VO4, 5mM NaF, 400uM PMSF, 1ug/ml of Pepstatin A, 5ug/ml of Aprotinin, 5ug/ml of Leupeptin)制備小鼠骨骼肌 組織裂解液,離心去除組織碎片,通過Bio-Rad蛋白檢測試劑盒測定蛋白濃度,組織蛋白稀釋后用非還原蛋白Buffer (50 mM Tris-HCl, pH 6.8, 5% Glycerol, 1% SDS, 0.002% Bromphenol Blue)添加5%β-巰基乙醇及PMSF,-80度保存。

潛在的應用: <1>已知基因的PCR克?。?lt;2>mRNA選擇性剪接;<3>基因克隆與目標測序;<4> Western and Northern Blot;<5>蛋白檢測與蛋白質組學;<6>芯片研究與表達圖譜。

 

細胞培養(yǎng)步驟:

一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備:
1) 準備DMEM-H培養(yǎng)基(GIBCO,貨號1199500bt,添加NaHCO3 1.5g/L),90%;胎牛血清,10%。也可根據實驗需要選擇懸浮培養(yǎng)基,使293T細胞懸浮生長。
2) 培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37攝氏度,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3) 凍存液:90%*培養(yǎng)基,10%DMSO,現用現配。液氮儲存。
二. 細胞處理:
1) 復蘇細胞:將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜(或將細胞懸液加入10cm皿中,加入約8ml培養(yǎng)基,培養(yǎng)過夜)。第二天換液并檢查細胞密度。
2) 細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養(yǎng)。
對于貼壁細胞,傳代可參考以下方法:
1. 棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。
2. 加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中,置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘,然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況,若細胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3. 按6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基,輕輕打勻后吸出,在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4. 將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3)細胞凍存:待細胞生長狀態(tài)良好時,可進行細胞凍存。貼壁細胞凍存時,棄去培養(yǎng)基后加入少量,細胞變圓脫落后,加入約1ml含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中,再添加10%DMSO后進行凍存。
冷凍保存細胞之方法?
冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ (-20 ℃30 分鐘*) → -80 ℃16~18 小時(或隔夜) → 液氮槽vaporphase 儲存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設定程序之可程序降溫機中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下, 再放入液氮槽vapor phase儲存。*-20 ℃不可超過1 小時, 以防止冰晶過大,造成細胞大量死亡,亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中,惟存活率稍微降低一些。

DI-N-DODECYL ETHER腦鈉通道蛋白2抗體anti- MTM1 antibody干擾素γ(IFNγ)檢測試劑盒(酶聯免疫吸附試驗法)

1-HEXADECANESULFONIC ACID SODIUM SALT腦鈉通道蛋白4抗體anti- MTMR12 antibody基質金屬蛋白酶9(MMP9)檢測試劑盒(酶聯免疫吸附試驗法)

Direct Black 38小腸鈉通道蛋白5抗體anti- MTMR14 antibody內皮素1(EDN1)檢測試劑盒(酶聯免疫吸附試驗法)

Zinc PhytateAPXL蛋白抗體anti- MTMR15 antibody腦鈉素(BNP)檢測試劑盒(酶聯免疫吸附試驗法)

Nystatin酸敏感離子通道蛋白3抗體anti- MTMR2 antibody生長激素(GH)檢測試劑盒(酶聯免疫吸附試驗法)

Aluminium tri-sec-butoxide天β羥化酶抗體anti- MTMR3 antibody(SST)檢測試劑盒(酶聯免疫吸附試驗法)

Acid blue 1加壓素受體2抗體anti- MTMR4 antibody瘦素(LEP)檢測試劑盒(酶聯免疫吸附試驗法)

EC 2.3.2.13細胞骨架肌動蛋白樣蛋白3抗體anti- MTMR6 antibodyβ-內啡肽(βEP)檢測試劑盒(酶聯免疫吸附試驗法)

小鼠骨骼肌組織提取物 Saccharomyces cerevisiae Meyen ex E.C. Hans ..硝基化α-突觸核蛋白Human NAGA(Alpha-N-acetylgalactosaminidase) ELISA Kit核因子I/X(NFIX)檢測試劑盒(酶聯免疫吸附試驗法)

Saccharomyces cerevisiae Meyen ex E.C. Hans ..EGR1結合蛋白2抗體Human MYOM3(Myomesin-3) ELISA Kit配對框基因6(PAX6)檢測試劑盒(酶聯免疫吸附試驗法)

Marasmiellus praeacutus (Ellis) HallingNK2轉錄樣蛋白B抗體Human PIEZO1(Piezo-type mechanosensitive ion channel component 1) ELISA Kit血小板膜糖蛋白Ⅰbα多肽(GP1Ba)檢測試劑盒(酶聯免疫吸附試驗法)

frozen或半蛋白水解酶抑制蛋白1抗體Human DNASE2(Deoxyribonuclease-2-alpha) ELISA Kit抑制素βE(INHβE)檢測試劑盒(酶聯免疫吸附試驗法)

Neodeightonia subglobosa Booth跨膜蛋白聚糖C抗體Human LCMT1(Leucine carboxyl methyltransferase 1) ELISA Kit左右不對稱發(fā)育因子2試劑盒

Escherichia coli (Migula) Castellani and Ch ..神經腫瘤Nova1抗原抗體Human SEPTIN7(septin-7) ELISA Kit組織因子途徑抑制物-2試劑盒

Saccharomyces cerevisiae Meyen ex E.C. Hans ..蛋白多糖4/黑色素瘤相關蛋白抗體Human CACNA1A(Voltage-dependent P/Q-type calcium channel subunit alpha-1A) ELISA Kit組織因子途徑抑制物試劑盒

Saccharomyces cerevisiae Meyen ex E.C. Hans ..突觸細胞粘附分子3抗體Human LAMA3(Laminin subunit alpha-3) ELISA Kit組織相容性復合體Ⅰ類相關基因A試劑盒

收到細胞如何處理?

1、首先,觀察細胞培養(yǎng)瓶是否完好,培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現象。若有,請拍照,(所拍照片將作為后續(xù)服務依據)。
2、用75%酒精擦拭細胞培養(yǎng)瓶表面,顯微鏡下觀察細胞狀態(tài)。因運輸問題,部分貼壁細胞會有少量從瓶壁脫落;先不要打開培養(yǎng)瓶蓋,將細胞置于細胞培養(yǎng)箱內靜置培養(yǎng)2-4小時,以便穩(wěn)定細胞狀態(tài)。
3、仔細閱讀細胞說明書,了解細胞相關信息,如貼壁特性(貼壁/懸?。⒓毎螒B(tài)、所用基礎培養(yǎng)基、血清比例、所需細胞因子、傳代比例、換液頻率等。
4、靜置完成后,取出細胞培養(yǎng)瓶,鏡檢、拍照,記錄細胞狀態(tài)(所拍照片將作為后續(xù)服務依據);建議細胞傳代培養(yǎng)后,定期拍照、記錄細胞生長狀態(tài)。
5、貼壁細胞:若細胞生長密度超過80%,可正常傳代;若未超過80%,移除細胞培養(yǎng)瓶內培養(yǎng)基,預留5ml左右繼續(xù)培養(yǎng),直至細胞密度達80%左右再進行傳代操作,瓶蓋可稍微擰松。
6、懸浮細胞:將細胞培養(yǎng)瓶內液體全部轉移至50ml無菌離心管內,1200rpm離心5min,離心后上清培養(yǎng)基可收集備用,管底細胞沉淀加入5ml培養(yǎng)基吹打、重懸。鏡檢時,若細胞密度超過80%,可將細胞懸液分至2個細胞培養(yǎng)瓶內培養(yǎng),補加培養(yǎng)基至5ml;若細胞密度未超過80%,將細胞懸液移至原瓶繼續(xù)培養(yǎng),直至細胞密度達80%左右時再進行傳代操作。

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