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當(dāng)前位置:上海西格生物科技有限公司>>細(xì)胞培養(yǎng)>>細(xì)胞、組織提取物>> 大鼠淋巴組織提取物
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所 在 地上海市
更新時間:2020-10-26 20:48:20瀏覽次數(shù):188次
聯(lián)系我時,請告知來自 環(huán)保在線大鼠淋巴組織提取物【Lymph: Normal Rat Lymphatic Derivatives】
淋巴組織,又稱免疫組織,是以網(wǎng)狀組織為基礎(chǔ),網(wǎng)孔中充滿大量的淋巴細(xì)胞和一些巨噬細(xì)胞、漿細(xì)胞等。公司科技提供來自新鮮或冷凍大鼠淋巴組織中高質(zhì)量的總RNA,PCR準(zhǔn)備的條cDNA鏈,蛋白質(zhì)及其亞組分。所有的產(chǎn)品在發(fā)貨之前均經(jīng)過嚴(yán)格的QA/QC流程以確保其質(zhì)量。這些產(chǎn)品可以直接用于基因克隆,表達圖譜分析以及各種分子生物學(xué)實驗的研究。
總RNA制備:利用Qiagen RNeasy Kit的Trizol試劑分離RNA,然后用Qiagen RNA Clean Kit進行純化。公司提供的總RNA樣品附有RNA樣品總濃度、總含量、電泳照片、OD值測定結(jié)果等。
cDNA制備:純化后的總RNA來合成cDNA鏈,以50ul總反應(yīng)體系進行逆轉(zhuǎn)錄,體系中包括MMLV反轉(zhuǎn)錄酶和隨機引物以及10mg總RNA。68℃反應(yīng)10min 后終止RT反應(yīng)。利用1x RT Buffer 運輸cDNA,1 ul cDNA 足夠做一次PCR反應(yīng)。所有cDNA產(chǎn)品在訂單發(fā)貨之前都經(jīng)過了嚴(yán)格的QA/QC分析,保證了產(chǎn)品的質(zhì)量。
蛋白制備:利用改良型RIPA Buffer (50mMTris, pH7.2, 150mM NaCl, 1mM EDTA, 1mM EGTA, 1% NP-40 , 1mM Na3VO4, 5mM NaF, 400uM PMSF, 1ug/ml of Pepstatin A, 5ug/ml of Aprotinin, 5ug/ml of Leupeptin)制備大鼠淋巴組織裂解液,離心去除組織碎片,通過Bio-Rad蛋白檢測試劑盒測定蛋白濃度,組織蛋白稀釋后用非還原蛋白Buffer (50 mM Tris-HCl, pH 6.8, 5% Glycerol, 1% SDS, 0.002% Bromphenol Blue)添加5%β-巰基乙醇及PMSF,-80度保存。
潛在的應(yīng)用: <1>已知基因的PCR克?。?lt;2>mRNA選擇性剪接;<3>基因克隆與目標(biāo)測序;<4> Western and Northern Blot;<5>蛋白檢測與蛋白質(zhì)組學(xué);<6>芯片研究與表達圖譜。
產(chǎn)品名稱 | 大鼠淋巴組織提取物 |
規(guī)格 | 詳見說明書 |
貨號 | XG-X7075 |
培養(yǎng)步驟:
對于貼壁細(xì)胞,傳代可參考以下方法:
1. 棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次。
2. 加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中,置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘,然后在顯微鏡下觀察Ⅱ型肺泡上皮細(xì)胞|細(xì)胞消化情況,若細(xì)胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3. 按6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基,輕輕打勻后吸出,在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4. 將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。對于懸浮細(xì)胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細(xì)胞,1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
方法二:可選擇半數(shù)換液方式,棄去半數(shù)培養(yǎng)基后,將剩余細(xì)胞懸起,將細(xì)胞懸液按1:2到1:3的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
注意事項:
1. 接收到細(xì)胞,肉眼觀察細(xì)胞培養(yǎng)基顏色,顯微鏡觀察細(xì)胞生長情況,并對細(xì)胞進行不同倍數(shù)拍照(建議收到時的培養(yǎng)瓶拍一張照片,顯微鏡拍收到時的細(xì)胞100X,200X各一張)。
2.用75%的酒精消毒(建議配置75%的酒精的水是滅菌過的)。
3.嚴(yán)格無菌操作,打開細(xì)胞培養(yǎng)瓶。
4.將細(xì)胞培養(yǎng)瓶內(nèi)的培養(yǎng)基用吸管*吸出(嚴(yán)禁直接傾倒),放入另一無菌容器中(建議換新的培養(yǎng)基培養(yǎng)細(xì)胞)。
5.用PBS 2-3ml/次輕輕洗細(xì)胞表面,洗3-4次遍,加入0.05%-EDTA1-1.5ml,顯微鏡下觀察細(xì)胞變圓,輕輕拍打培養(yǎng)瓶直到細(xì)胞脫落,加入終止液終止。
6.1000rpm,5min離心,重懸細(xì)胞。
7.換新的細(xì)胞培養(yǎng)瓶,37℃,5%CO2培養(yǎng)。
操作要點:
1)將培養(yǎng)基在37℃水浴鍋預(yù)熱;準(zhǔn)備一個15mL無菌的離心管,加入8mL預(yù)熱培養(yǎng)基。
2)將凍存細(xì)胞從液氮罐中取出,快速放入37℃水浴鍋中復(fù)溫(可準(zhǔn)備一潔凈的燒杯,裝滿37℃的水,細(xì)胞凍存管取出后迅速放入燒杯內(nèi),再逐步轉(zhuǎn)移到水浴鍋中)。輕輕晃動凍存管,使細(xì)胞能在1~2min內(nèi)*解凍,使細(xì)胞能盡快通過易受損的溫度段(-5~0℃)。注意凍存管管口不能沒入水中,BRL(大鼠肝細(xì)胞)避免引起污染。
3)用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺內(nèi),將管內(nèi)細(xì)胞轉(zhuǎn)移至準(zhǔn)備好的離心管內(nèi),輕輕吹打液體,使細(xì)胞均勻分散,降低DMSO濃度,吹打時避免產(chǎn)生氣泡。用新鮮培養(yǎng)基洗管壁2次,均轉(zhuǎn)移至離心管內(nèi)。
4)800rpm離心5min,棄上清,加入新鮮的培養(yǎng)基,吹打制成細(xì)胞懸液。
5)將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移至T25細(xì)胞瓶內(nèi),補加適量的培養(yǎng)基,輕輕晃動細(xì)胞瓶使細(xì)胞分布均勻,放入溫箱內(nèi)培養(yǎng)。
6)第二天觀察細(xì)胞貼壁生長情況,換新鮮培養(yǎng)基以去除死細(xì)胞。繼續(xù)培養(yǎng),待細(xì)胞長至80~90%匯合時正常傳代。一般剛復(fù)蘇的細(xì)胞需經(jīng)過2~3次傳代,細(xì)胞活力恢復(fù)后才能進行后續(xù)的實驗。
MoMetasone FuroateBEND6蛋白抗體anti- NR3C2 antibody抑制素βA(INHβA)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)
MONO-TERT-BUTYL SUCCINATE 97%立即早期癌基因BRLF1抗體(鼻咽癌基因)anti- NR5A1 antibody抑制素βA(INHβA)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)
Moxifloxacin Hydrochloride染色體相關(guān)蛋白H抗體anti- NR5A2 antibody釋放激素(GnRH)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)
Moxifloxacin Related CoMpound A;1-cyclopropyl-6,8-difluoro-7-[(4aS,7aS)-octahydro-6H-pyrrolo[3,4-b]pyridin-6-yl]-4-oxo-1,4-dihydroquinoline-3-carboxylic acid鼻咽癌相關(guān)轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)蛋白抗體anti- NRAS antibody促微管蛋白聚合蛋白(TPPP)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)
Mycophenolate Mofetil細(xì)胞分裂周期蛋白8抗體anti- NRBF2 antibody促微管蛋白聚合蛋白(TPPP)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)
N-(2-Hydroxyethyl)ethylenediaMine -N,N′,N′-triacetic acid;(2-Hydroxyethyl)ethylenedinitrilotriacetic acid;HEDTA有絲分裂蛋白BUB3抗體anti- NRBP2 antibody促微管蛋白聚合蛋白(TPPP)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)
Nafcillin SodiuM骨形態(tài)發(fā)生蛋白9抗體anti- NRCAM antibody核因子κB受體激活因子配基(RANκL)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)
Naproxen骨形態(tài)發(fā)生蛋白1/膠原C蛋白肽鏈內(nèi)切酶抗體anti- NRD1 antibody核因子κB受體激活因子配基(RANκL)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)
大鼠淋巴組織提取物REPO PR-GFP報告基因原鈣粘蛋白12抗體Human MASP1(Mannan-binding lectin serine protease 1) ELISA Kit胃泌素細(xì)胞抗體試劑盒
REPO RBP-JK-GFP報告基因造血干細(xì)胞抗原CD133相關(guān)蛋白抗體Human IDE(Insulin-degrading enzyme) ELISA Kit胃泌素釋放肽前體試劑盒
REPO RAR-GFP報告基因原鈣粘蛋白1抗體Human LSS(Lanosterol synthase) ELISA Kit胃泌素釋放多肽試劑盒
REPO Sox2-GFP報告基因缺陷性分配同源物α抗體Human IFI16(Gamma-interferon-inducible protein 16) ELISA Kit胃泌素試劑盒
REPO SP1-GFP報告基因表觀抑制因子Polycomb家族成員PCGFl蛋白抗體Human ACAN(Aggrecan core protein) ELISA Kit胃動素試劑盒
REPO SREBP-GFP報告基因原鈣粘蛋白介導(dǎo)的PCDHαC2受體抗體Human KLK7(Kallikrein-7) ELISA Kit胃動蛋白2試劑盒
REPO STAT1-GFP報告基因小鼠抗p21激活激酶4抗體Human FPR2(N-formyl peptide receptor 2) ELISA Kit原II elisa試劑盒
Thiourea 硫脲蛋白質(zhì)酸酶2A亞基3抗體Human BTK(Tyrosine-protein kinase BTK) ELISA Kit原I elisa試劑盒
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