收到細(xì)胞如何處理？

1、首先，觀察細(xì)胞培養(yǎng)瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象。若有，請拍照，（所拍照片將作為后續(xù)服務(wù)依據(jù)）。
2、用75%酒精擦拭細(xì)胞培養(yǎng)瓶表面，顯微鏡下觀察細(xì)胞狀態(tài)。因運(yùn)輸問題，部分貼壁細(xì)胞會有少量從瓶壁脫落；先不要打開培養(yǎng)瓶蓋，將細(xì)胞置于細(xì)胞培養(yǎng)箱內(nèi)靜置培養(yǎng)2-4小時，以便穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)。
3、仔細(xì)閱讀細(xì)胞說明書，了解細(xì)胞相關(guān)信息，如貼壁特性（貼壁/懸浮）、細(xì)胞形態(tài)、所用基礎(chǔ)培養(yǎng)基、血清比例、所需細(xì)胞因子、傳代比例、換液頻率等。
4、靜置完成后，取出細(xì)胞培養(yǎng)瓶，鏡檢、拍照，記錄細(xì)胞狀態(tài)（所拍照片將作為后續(xù)服務(wù)依據(jù)）；建議細(xì)胞傳代培養(yǎng)后，定期拍照、記錄細(xì)胞生長狀態(tài)。
5、貼壁細(xì)胞：若細(xì)胞生長密度超過80%，可正常傳代；若未超過80%，移除細(xì)胞培養(yǎng)瓶內(nèi)培養(yǎng)基，預(yù)留5ml左右繼續(xù)培養(yǎng)，直至細(xì)胞密度達(dá)80%左右再進(jìn)行傳代操作，瓶蓋可稍微擰松。
6、懸浮細(xì)胞：將細(xì)胞培養(yǎng)瓶內(nèi)液體全部轉(zhuǎn)移至50ml無菌離心管內(nèi)，1200rpm離心5min，離心后上清培養(yǎng)基可收集備用，管底細(xì)胞沉淀加入5ml培養(yǎng)基吹打、重懸。鏡檢時，若細(xì)胞密度超過80%，可將細(xì)胞懸液分至2個細(xì)胞培養(yǎng)瓶內(nèi)培養(yǎng)，補(bǔ)加培養(yǎng)基至5ml；若細(xì)胞密度未超過80%，將細(xì)胞懸液移至原瓶繼續(xù)培養(yǎng)，直至細(xì)胞密度達(dá)80%左右時再進(jìn)行傳代操作。

大鼠腎小球組織提取物【Kidney:Normal Rat Glomerular Derivatives】
腎小球為血液過濾器，腎小球毛細(xì)血管壁構(gòu)成過濾膜。公司科技提供來自新鮮或冷凍大鼠腎小球組織中高質(zhì)量的總RNA，PCR準(zhǔn)備的條cDNA鏈，蛋白質(zhì)及其亞組分。所有的產(chǎn)品在發(fā)貨之前均經(jīng)過嚴(yán)格的QA/QC流程以確保其質(zhì)量。這些產(chǎn)品可以直接用于基因克隆，表達(dá)圖譜分析以及各種分子生物學(xué)實驗的研究。
總RNA制備：利用Qiagen RNeasy Kit的Trizol試劑分離RNA，然后用Qiagen RNA Clean Kit進(jìn)行純化。公司提供的總RNA樣品附有RNA樣品總濃度、總含量、電泳照片、OD值測定結(jié)果等。

cDNA制備：純化后的總RNA來合成cDNA鏈，以50ul總反應(yīng)體系進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄，體系中包括MMLV反轉(zhuǎn)錄酶和隨機(jī)引物以及10mg總RNA。68℃反應(yīng)10min 后終止RT反應(yīng)。利用1x RT Buffer 運(yùn)輸cDNA，1 ul cDNA 足夠做一次PCR反應(yīng)。所有cDNA產(chǎn)品在訂單發(fā)貨之前都經(jīng)過了嚴(yán)格的QA/QC分析，保證了產(chǎn)品的質(zhì)量。

蛋白制備：利用改良型RIPA Buffer (50mMTris, pH7.2, 150mM NaCl, 1mM EDTA, 1mM EGTA, 1% NP-40 , 1mM Na3VO4, 5mM NaF, 400uM PMSF, 1ug/ml of Pepstatin A, 5ug/ml of Aprotinin, 5ug/ml of Leupeptin)制備大鼠腎小球組織裂解液，離心去除組織碎片，通過Bio-Rad蛋白檢測試劑盒測定蛋白濃度，組織蛋白稀釋后用非還原蛋白Buffer (50 mM Tris-HCl, pH 6.8, 5% Glycerol, 1% SDS, 0.002% Bromphenol Blue)添加5%β-巰基乙醇及PMSF，-80度保存。

潛在的應(yīng)用： <1>已知基因的PCR克??；<2>mRNA選擇性剪接；<3>基因克隆與目標(biāo)測序；<4> Western and Northern Blot；<5>蛋白檢測與蛋白質(zhì)組學(xué)；<6>芯片研究與表達(dá)圖譜。

細(xì)胞培養(yǎng)步驟：

一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1） 準(zhǔn)備DMEM-H培養(yǎng)基(GIBCO,貨號1199500bt，添加NaHCO3 1.5g/L)，90%；胎牛血清，10%。也可根據(jù)實驗需要選擇懸浮培養(yǎng)基，使293T細(xì)胞懸浮生長。
2） 培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3） 凍存液：90%*培養(yǎng)基，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲存。
二． 細(xì)胞處理：
1） 復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10cm皿中，加入約8ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2） 細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對于貼壁細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次。
2. 加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3. 按6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4. 將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3）細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。貼壁細(xì)胞凍存時，棄去培養(yǎng)基后加入少量，細(xì)胞變圓脫落后，加入約1ml含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中，再添加10%DMSO后進(jìn)行凍存。
冷凍保存細(xì)胞之方法？
冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ （-20 ℃30 分鐘*） → -80 ℃16~18 小時（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 儲存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機(jī)中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下， 再放入液氮槽vapor phase儲存。*-20 ℃不可超過1 小時， 以防止冰晶過大，造成細(xì)胞大量死亡，亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中，惟存活率稍微降低一些。

Human FGF19 (Fibroblast Growth Factor 19) ELISA KitBax抗體anti- NUPL1 antibody脂酰受體(PSR)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)

Human FGF21 (Fibroblast Growth Factor 21) ELISA Kit性成纖維細(xì)胞生長因子抗體anti- NUPL2 antibody免疫缺陷伴血小板減少綜合征蛋白(WASP)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)

Human Flt3L (FMS Like Tyrosine Kinase 3 Ligand) ELISA Kit BH3結(jié)構(gòu)域凋亡誘導(dǎo)蛋白抗體anti- NUR77 antibody成纖維細(xì)胞生長因子7(FGF7)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)

Human FST (Follistatin) ELISA Kit鈣激活鉀通道蛋白 α 1抗體anti- Nurr1/NR4A2 antibody環(huán)加氧酶2(PTGS2)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)

Human Hepc (Hepcidin) ELISA Kit TNF家族B細(xì)胞激活因子抗體anti- NUSAP1 antibody轉(zhuǎn)錄激活因子5(ATF5)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)

Human Gas6 (Growth Arrest Specific Protein 6) ELISA Kit多聚合苷酸激酶3酸化酶抗體anti- NVL antibody膽酰轉(zhuǎn)移酶(ChAT)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)

Human G-CSF (Granulocyte Colony Stimulating Factor 3) ELISA Kit 布氏桿菌菌體蛋白抗體anti- NWD1 antibody前列腺素D2(PGD2)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)

Human GDF15 (Growth Differentiation Factor 15) ELISA Kit 紅細(xì)胞2,3 - 二酸甘油酸合成酶抗體anti- NXF1 antibody酮酸脫酶β(PDHβ)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)

大鼠腎小球組織提取物NFAT luciferase reporter plasmid （NFAT-Luc熒光素酶報告基因質(zhì)粒） 神經(jīng)叢蛋白A3抗體Human ALAD(Delta-aminolevulinic acid dehydRatase) ELISA Kit糖類抗原19-9試劑盒

PPARγ luciferase reporter plasmid （PPARγ-Luc熒光素酶報告基因質(zhì)粒） ATP酶鈣離子轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白PMCA3抗體Human FECH(Ferrochelatase, mitochondrial) ELISA Kit糖類抗原125試劑盒

Progesterone receptor luciferase reporter plasmid (PR螢火蟲熒光素酶報告基因質(zhì)粒） 蛋白質(zhì)酸酶2調(diào)節(jié)亞基5C/PP2A-B56-γ抗體Human QPCT(Glutaminyl-peptide cyclotransferase) ELISA Kit糖基化依賴的細(xì)胞黏附分子試劑盒

RBP-JK luciferase reporter plasmid (RBP-JK螢火蟲熒光素酶報告基因質(zhì)粒） 蛋白質(zhì)酸酶2調(diào)節(jié)亞基5D/PP2A-B56-δ抗體Human DDOST(Dolichyl-diphosphooligosaccharide--protein glycosyltransferase 48 kDa subunit) ELISA Kit糖化血紅蛋白A1c試劑盒

RAR luciferase reporter plasmid (RAR螢火蟲熒光素酶報告基因質(zhì)粒） 酸化/抗體Human PDPN(Podoplanin) ELISA Kit糖化低密度脂蛋白試劑盒

Sox2 luciferase reporter plasmid （Sox2 螢火蟲熒光素酶報告基因質(zhì)粒) 細(xì)胞膜調(diào)控蛋白Paralemmin 1抗體Human MCL1(Induced myeloid leukemia cell differentiation protein Mcl-1) ELISA Kit糖化白蛋白試劑盒

SP1 luciferase reporter plasmid （SP1螢火蟲熒光素酶報告基因質(zhì)粒） 端粒酶抑制因子PinX-1抗體Human ADAMTS5(A disintegrin and metalloproteinase with thrombospondin motifs 5) ELISA Kit糖蛋白130試劑盒

SREBP luciferase reporter plasmid （SREBP熒光素酶報告基因質(zhì)粒） 泌乳素受體抗體Human MEFV(Pyrin) ELISA Kit羰基還原酶[NADPH] 1試劑盒

公司產(chǎn)品采用干冰運(yùn)輸，經(jīng)過逐步的降溫，冷藏在-196℃度的液氮罐中，暫時停止其生命活動，保存其活性，使您的實驗更生動,公司代理品牌有：ATCC、sciencell、ICLC、GIBCO、IST-Banca等品牌.

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