RnaseOUT-RNase Inhibitor(80U/ul), 無甘油

描述：本酶為采用電子重構架技術重組表達的 RNase Inhibitor, 可高效的與 RNase A/B/C 形成 1：1 的復合物，從 而保護 RNA 免受降解。與野生型人源（human）、鼠源 (murine)、豬源(porcine) Inhibitor 比較來看，其在如下幾方 面得到明顯提升：（1）抗氧化/抗巰基類性能的提升，在 0-10mM DTT 濃度下，活性無明顯差異，因此不僅適用于 PCR，也可適用于轉錄等高濃度 DTT 體系。（2）親和力得 到明顯提升，在特定條件下可以抑制 RNase，從而長效 保護體系中的 RNA 分子。（3）耐熱性顯著提高，在 55°C 條件下加熱 10min 后，仍然保留 90%以上活性。 

單位定義：抑制 5 ng RNase A 的 50%活性所需的 RNaseInhibitor 量定義為一個活性單位。
熱失活：65°C， 10min
應用：
cDNA 合成反應體外無細胞系統(tǒng)轉錄或翻譯提高多聚核糖體的產(chǎn)量和活性
儲存：-80°C 可保存 3 年，-20°C 可保存 2 年。
由于該制品不含甘油成分，反復凍融 10 次的情況下，活性損失<5%。如制品經(jīng)常使用，融化后建議儲存于 2-8°C（2個月），或分裝后凍存。
使用方法
1. 按以下組分配制反應體系
Golden MLV Reverse Transcriptase 0.5-1 μl
10×RT Buffer 2 μl
dNTP Mixture (10 mM each) 1 μl
Total RNA or Poly(A) RNA 0.1-2 μg
20×Oligo dT(25)&Random Primer * 1 μl
RNase Inhibitor (80 U/μl) 0.25 μl
RNase Free H2O Up to 20 μl
*注：Oligo dT(15)使用濃度為 20~50μM, 如使用 Random9隨機引物可使用 125μM，基因特異性引物可使用 5μM。
2．在 PCR 儀上按下列條件進行反轉錄反應
 30°C 15 min
 55°C 30~60 min
 85°C 10 min
 4°C
3. 反轉錄所得的 cDNA 可直接用于 PCR 反應或儲存于-20°C。

一、模板DNA：PCR反應需要模板DNA，如從細胞、組織、血液中提取DNA等；

二、引物：PCR反應的兩個引物，分別與模板DNA的兩端配對擴增所需的特定區(qū)域，引物也可以合成為TA克隆等過程中使用到的引物；

三、dNTPs：PCR反應中需要四種dNTPs，包括脫氧腺苷酸（dATP）、脫氧胸苷酸（dCTP）、脫氧鳥苷酸（dGTP）、脫氧胞嘧啶酸（dTTP），用于細胞分裂、DNA合成         等生物學過程，用于PCR擴增的模板DNA鏈的延伸和擴增；

四、Taq DNA聚合酶：PCR反應需要的聚合酶，一般使用Taq聚合酶，還有一些其他種類的聚合酶如PFU、Phusion等，用于擴增DNA鏈；

五、PCR buffer溶液：對PCR反應具有緩沖作用，調節(jié)反應pH，硫代硫酸氫鹽SDS、小分子有機化合物如甲醛，可增強PCR反應特異性，從而提高反應效率；

六、酶切體系：PCR擴增往往涉及到重組、構建和測序等等實驗步驟，常常需要進行酶切操作。

七、MARK:一種分子量標準，用來判別DNA片段大小的工具。

八、DNA純化試劑盒：用于純化PCR反應產(chǎn)物；

①Oligo dT
選擇Oligo dT時，要求RNA必須有Poly A，所以真核生物的mRNA都適用。適合長鏈甚至全長mRNA的RT，對RNA樣品的質量要求較高，不要有明顯的DNA污染、RNA降解和RNA斷裂。假如想探索新的mRNA進行RT反應，建議推薦使用Oligo dT引物。使用Oligo dT引物要比隨機引物和特異性引物的穩(wěn)定性要好。
②隨機引物
適合各種RNA的RT，尤其適合模板豐度很低的情況（比如某個gene表達量很低）。選擇隨機引物時，鏈cDNA合成反應中就是以所有的RNA為模板，然后進行PCR反應時設計引物進行特異性擴增。同時要注意隨機引物的量和總RNA量之間的關系，一般建議每5µg總RNA的隨機引物的用量為50ng，如果每5µg總RNA的隨機引物的用量超過250ng，可能會導致小片段產(chǎn)物（＜500bp）的增加和長片段、全長產(chǎn)物的降低。
③特異性引物
基因特異性引物（GSP）是某個基因序列的一部分，與模板互補的引物。該引物需要結合目標RNA的已知序列進行設計。由于引物和RNA序列特異性結合，每個目標RNA都需要一套新的基因特異性引物。因此，當分析多種目標時，則需要適用更多的RNA樣本。而且不同引物退火溫度本來就不相同，所以一般不推薦使用。如需要使用特異性引物，建議對退火溫度進行優(yōu)化。