平板涂布玻璃珠（無菌）

保存條件：室溫干燥保存
產(chǎn)品介紹：
平板涂布玻璃珠提供了一種高效快速的菌液（大腸桿菌、酵母菌液等）涂布方法。平板涂布玻璃珠（直徑4 mm）光滑均勻，無菌包裝，表面經(jīng)特殊工藝處理，不殘留菌液。與傳統(tǒng)方法比較，使用平板涂布玻璃珠，菌液涂布更加均勻，并能夠覆蓋傳統(tǒng)涂菌方法不能達到的平板邊緣。同時，可實現(xiàn)多板同時涂布，大大提高實驗效率。平板涂布玻璃珠可經(jīng)反復滅菌，多次使用。
特點：
1. 均勻：菌液涂布均勻。
2. 高效：可實現(xiàn)多板同時涂布。
3. 經(jīng)濟：可反復滅菌，多次使用。
滅菌方法：
玻璃珠經(jīng)70%的乙醇洗滌后，高溫高壓滅菌，晾干后使用。
使用方法：
1. 向已加入菌液的固體瓊脂平板加入無菌玻璃珠數(shù)顆，如9 cm平板每板建議加10粒玻璃珠。
2. 蓋好板蓋，于超凈臺表面水平前后、左右各快速晃動平板約10 sec，以達到更佳涂板效果。
注意：當板蓋有冷凝水時，應(yīng)倒掉或晾干板蓋上的冷凝水，以防止涂板時污染平板。如需同時涂布多板，可將加有玻璃珠的平板疊在一起，同時晃動涂板。
3. 待瓊脂表面菌液干燥時，倒出玻璃珠，蓋好板蓋，以備后續(xù)培養(yǎng)。
注意：平板涂布玻璃珠為無菌包裝，請在無菌環(huán)境下使用。玻璃珠可反復滅菌，多次使用。

一、模板DNA：PCR反應(yīng)需要模板DNA，如從細胞、組織、血液中提取DNA等；

二、引物：PCR反應(yīng)的兩個引物，分別與模板DNA的兩端配對擴增所需的特定區(qū)域，引物也可以合成為TA克隆等過程中使用到的引物；

三、dNTPs：PCR反應(yīng)中需要四種dNTPs，包括脫氧腺苷酸（dATP）、脫氧胸苷酸（dCTP）、脫氧鳥苷酸（dGTP）、脫氧胞嘧啶酸（dTTP），用于細胞分裂、DNA合成         等生物學過程，用于PCR擴增的模板DNA鏈的延伸和擴增；

四、Taq DNA聚合酶：PCR反應(yīng)需要的聚合酶，一般使用Taq聚合酶，還有一些其他種類的聚合酶如PFU、Phusion等，用于擴增DNA鏈；

五、PCR buffer溶液：對PCR反應(yīng)具有緩沖作用，調(diào)節(jié)反應(yīng)pH，硫代硫酸氫鹽SDS、小分子有機化合物如甲醛，可增強PCR反應(yīng)特異性，從而提高反應(yīng)效率；

六、酶切體系：PCR擴增往往涉及到重組、構(gòu)建和測序等等實驗步驟，常常需要進行酶切操作。

七、MARK:一種分子量標準，用來判別DNA片段大小的工具。

八、DNA純化試劑盒：用于純化PCR反應(yīng)產(chǎn)物；

①Oligo dT
選擇Oligo dT時，要求RNA必須有Poly A，所以真核生物的mRNA都適用。適合長鏈甚至全長mRNA的RT，對RNA樣品的質(zhì)量要求較高，不要有明顯的DNA污染、RNA降解和RNA斷裂。假如想探索新的mRNA進行RT反應(yīng)，建議推薦使用Oligo dT引物。使用Oligo dT引物要比隨機引物和特異性引物的穩(wěn)定性要好。
②隨機引物
適合各種RNA的RT，尤其適合模板豐度很低的情況（比如某個gene表達量很低）。選擇隨機引物時，鏈cDNA合成反應(yīng)中就是以所有的RNA為模板，然后進行PCR反應(yīng)時設(shè)計引物進行特異性擴增。同時要注意隨機引物的量和總RNA量之間的關(guān)系，一般建議每5µg總RNA的隨機引物的用量為50ng，如果每5µg總RNA的隨機引物的用量超過250ng，可能會導致小片段產(chǎn)物（＜500bp）的增加和長片段、全長產(chǎn)物的降低。
③特異性引物
基因特異性引物（GSP）是某個基因序列的一部分，與模板互補的引物。該引物需要結(jié)合目標RNA的已知序列進行設(shè)計。由于引物和RNA序列特異性結(jié)合，每個目標RNA都需要一套新的基因特異性引物。因此，當分析多種目標時，則需要適用更多的RNA樣本。而且不同引物退火溫度本來就不相同，所以一般不推薦使用。如需要使用特異性引物，建議對退火溫度進行優(yōu)化。