Murine RNase Inhibitor

產(chǎn)品說(shuō)明：
鼠核糖核酸酶抑制劑（Murine RNase Inhibitor）能夠廣泛抑制各種 RNase (RNase A, B, C) 。它通過以 1:1 的比例以高親和力非
共價(jià)結(jié)合來(lái)抑制 RNA 酶。該抑制劑特異性抑制 RNase A、B 和 C，不抑制真核 RNase T1、T2、U1、U2、CL3 以及原核 RNase I 和RNase H。 Murine RNase Inhibitor 經(jīng)過 RT-PCR、RT-qPCR 檢驗(yàn)，能與多種商品化的如 AMV、MMLV 等逆轉(zhuǎn)錄酶以及 Taq DNAPolymerase 等 DNA 聚合酶兼容。具有更高的抗氧化活性，更適合于對(duì)高濃度 DTT 敏感的實(shí)驗(yàn)。
儲(chǔ)存條件：-20℃保存
活性單位： 1 個(gè)活性單位 (U) 定義為抑制 5 ng RNase A 活性的 50%所需要的酶量。
質(zhì)量控制：SDS-PAGE 檢測(cè)純度大于 99%，經(jīng)檢測(cè)無(wú)核酸外切酶、核酸內(nèi)切酶和核糖核酸酶活性，無(wú)細(xì)菌基因組 DNA 殘留。
應(yīng)用范圍：
1.以 RNA 為模板的 cDNA 鏈合成。
2.RT-PCR、RT-qPCR
3.體外轉(zhuǎn)錄/轉(zhuǎn)譯系統(tǒng)。
4.需要包裝 RNA 完整性的反應(yīng)體系中。
儲(chǔ)存緩沖液：20 mM HEPES-KOH，50 mM KCl，8 mM DTT，50% Glycerol，pH 7.6 @ 25°C。
注意事項(xiàng)：
1.高濃度的尿素，胍鹽等蛋白變性劑作用下，Murine RNase Inhibitor 會(huì)失活。
2.Murine RNase Inhibitor 的使用量按照終濃度 1U/μl 添加。
3.Murine RNase Inhibitor 應(yīng)在可能導(dǎo)致 RNase 污染的其他成分之前加入反應(yīng)中。
4.Murine RNase Inhibitor 應(yīng)在 50°C 以下使用。

一、模板DNA：PCR反應(yīng)需要模板DNA，如從細(xì)胞、組織、血液中提取DNA等；

二、引物：PCR反應(yīng)的兩個(gè)引物，分別與模板DNA的兩端配對(duì)擴(kuò)增所需的特定區(qū)域，引物也可以合成為TA克隆等過程中使用到的引物；

三、dNTPs：PCR反應(yīng)中需要四種dNTPs，包括脫氧腺苷酸（dATP）、脫氧胸苷酸（dCTP）、脫氧鳥苷酸（dGTP）、脫氧胞嘧啶酸（dTTP），用于細(xì)胞分裂、DNA合成         等生物學(xué)過程，用于PCR擴(kuò)增的模板DNA鏈的延伸和擴(kuò)增；

四、Taq DNA聚合酶：PCR反應(yīng)需要的聚合酶，一般使用Taq聚合酶，還有一些其他種類的聚合酶如PFU、Phusion等，用于擴(kuò)增DNA鏈；

五、PCR buffer溶液：對(duì)PCR反應(yīng)具有緩沖作用，調(diào)節(jié)反應(yīng)pH，硫代硫酸氫鹽SDS、小分子有機(jī)化合物如甲醛，可增強(qiáng)PCR反應(yīng)特異性，從而提高反應(yīng)效率；

六、酶切體系：PCR擴(kuò)增往往涉及到重組、構(gòu)建和測(cè)序等等實(shí)驗(yàn)步驟，常常需要進(jìn)行酶切操作。

七、MARK:一種分子量標(biāo)準(zhǔn)，用來(lái)判別DNA片段大小的工具。

八、DNA純化試劑盒：用于純化PCR反應(yīng)產(chǎn)物；

①Oligo dT
選擇Oligo dT時(shí)，要求RNA必須有Poly A，所以真核生物的mRNA都適用。適合長(zhǎng)鏈甚至全長(zhǎng)mRNA的RT，對(duì)RNA樣品的質(zhì)量要求較高，不要有明顯的DNA污染、RNA降解和RNA斷裂。假如想探索新的mRNA進(jìn)行RT反應(yīng)，建議推薦使用Oligo dT引物。使用Oligo dT引物要比隨機(jī)引物和特異性引物的穩(wěn)定性要好。
②隨機(jī)引物
適合各種RNA的RT，尤其適合模板豐度很低的情況（比如某個(gè)gene表達(dá)量很低）。選擇隨機(jī)引物時(shí)，鏈cDNA合成反應(yīng)中就是以所有的RNA為模板，然后進(jìn)行PCR反應(yīng)時(shí)設(shè)計(jì)引物進(jìn)行特異性擴(kuò)增。同時(shí)要注意隨機(jī)引物的量和總RNA量之間的關(guān)系，一般建議每5µg總RNA的隨機(jī)引物的用量為50ng，如果每5µg總RNA的隨機(jī)引物的用量超過250ng，可能會(huì)導(dǎo)致小片段產(chǎn)物（＜500bp）的增加和長(zhǎng)片段、全長(zhǎng)產(chǎn)物的降低。
③特異性引物
基因特異性引物（GSP）是某個(gè)基因序列的一部分，與模板互補(bǔ)的引物。該引物需要結(jié)合目標(biāo)RNA的已知序列進(jìn)行設(shè)計(jì)。由于引物和RNA序列特異性結(jié)合，每個(gè)目標(biāo)RNA都需要一套新的基因特異性引物。因此，當(dāng)分析多種目標(biāo)時(shí)，則需要適用更多的RNA樣本。而且不同引物退火溫度本來(lái)就不相同，所以一般不推薦使用。如需要使用特異性引物，建議對(duì)退火溫度進(jìn)行優(yōu)化。