琥珀酸脫氫酶是三羧酸循環(huán)中的一個重要的酶,測定細胞中有無這種酶可以初步鑒定三羧酸循環(huán)途徑是否存在。
琥珀酸脫氫酶可使其底物脫氫,產生的氫可通過一系列傳遞體zui后遞給氧而生成水。
在缺氧的情況下,若有適當?shù)氖軞潴w也可顯示出脫氫酶的作用。如心肌中的琥珀酸脫氫酶在缺氧的情況下,可使琥珀酸脫氫生成延胡索酸,脫下之氫可將藍色的甲烯藍還原成無色的甲烯白。
這樣,便可以顯示琥珀酸脫氫酶的作用。
琥珀酸脫氫酶的作用及競爭性抑制的觀察
丙二酸的化學結構與琥珀酸相似,它能與琥珀酸競爭而和琥珀酸脫氫酶結合。若琥珀酸脫氫酶已與丙二酸結合,則不能再催化琥珀酸脫氫,這種現(xiàn)象稱為競爭性抑制。如相對地增加琥珀酸的濃度,則可減輕丙二酸的抑制作用。
(二)試 劑
1.1.5%琥珀酸鈉溶液:稱取琥珀酸鈉1.5g,用蒸餾水溶解并稀釋至100ml。如無琥珀酸鈉可用琥珀酸配成水溶液后,以氫氧化鈉溶液中和至pH7~8。
2.1%丙二酸鈉溶液:稱取丙二酸鈉1g,用蒸餾水溶解并稀釋至100ml。
3.0.02%甲烯藍溶液。
4.1/15mol/LNa2HPO4溶液:取Na2HPO4 · 2H2O 11.8g,用蒸餾水溶解并稀釋至1 000ml。
5.液體石蠟。
(三)操 作
1.豬心臟制備液:稱取新鮮豬心1.5~2.0g放組織搗碎機中,加入等體積的石英砂及1/15mol/LNa2HPO4溶液3~4ml,搗碎成漿,再加入6~7ml1/15mol/LNa2HPO4溶液,放置1小時,不時搖動,離心取上清液備用。
2.取4支試管,編號并按下表操作:
3.各管溶液混勻后,每管各加液體石蠟一薄層(約5~10滴)。為什么?
4.各管置于37℃水浴中,半小時內觀察各管顏色變化,比較其速度并說明原因。然后將第1管用力搖動,觀察其有何變化?為什么?