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細胞株的培養(yǎng)、凍存和復蘇技術講解

時間:2014/10/27閱讀:787
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1、細胞株的培養(yǎng)和傳代

培養(yǎng):

用于檢測細胞因子的細胞株通常培養(yǎng)于含10%小牛血清和抗生素的培養(yǎng)液中,培養(yǎng)細胞因子依賴細胞株還有加入適量細胞因子。在37℃ 5% CO2的飽和水汽二氧化碳培養(yǎng)箱中培養(yǎng),3~4天傳代一次。

懸浮生長細胞的傳代:

直接直接吸去或離心后吸去培養(yǎng)上清液,用新鮮培養(yǎng)液懸浮細胞,1:3或1:5稀釋細胞后,分瓶繼續(xù)培養(yǎng)。

帖壁生長細胞的傳代:

吸去培養(yǎng)液,用PBS洗滌細胞一次,加入消化液,在37℃中消化約3~10分鐘,待細胞開始脫落時,倒去消化液,加入新鮮培養(yǎng)液,懸浮和吹打分散細胞。也可以待細胞*消化脫落,500×g離心5分鐘,去除消化液,用新鮮培養(yǎng)液懸浮細胞。1:3或1:5稀釋細胞后,分瓶繼續(xù)培養(yǎng)。

2、細胞株的凍存:

(1)取培養(yǎng)2~3天生長旺盛的細胞,用細胞培養(yǎng)液將細胞配成2×106~2×107/ml。

(2)在1ml細胞凍存管中加入0.5ml細胞懸液,0.4ml小牛血清和0.1ml二甲基亞砜(或甘油),混勻后密封。置4℃ 1小時,-20℃ 2小時,然后直接放入液氮中或置液氮蒸汽上過夜后浸入液氮中。

3、細胞株的復蘇:

復蘇時,從液氮中取出凍存管,立即置37℃水浴中融化細胞。將細胞直接加入10ml含15%小牛血清的RPMI-1640培養(yǎng)液中,置37℃ 5%CO2飽和水汽二氧化碳培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。懸浮細胞待細胞全部沉降后小心吸去上清液,更換新鮮的上述培養(yǎng)液,繼續(xù)培養(yǎng);帖壁細胞則培養(yǎng)2~3實驗。

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