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培養(yǎng)基
培養(yǎng)基原料 霍亂弧菌診斷血清 大腸艾希氏菌診斷血清 志賀氏菌屬診斷血清 沙門氏菌屬診斷血清 標準血清,診斷血清 抗生素藥敏紙片 微生物配套試劑 微生物生化管 管裝培養(yǎng)基 即用型液體培養(yǎng)基 一次性培養(yǎng)基平板 顯色培養(yǎng)基 臨床培養(yǎng)基 菌種保存培養(yǎng)基 四環(huán)素檢定、厭氧亞硫酸鹽還原桿菌檢測培養(yǎng)基 維生素檢測培養(yǎng)基 一次性衛(wèi)生用品衛(wèi)生檢測培養(yǎng)基 罐頭食品商業(yè)無菌檢測培養(yǎng)基 飲用水及水源檢測培養(yǎng)基 藥品、生物制品檢測培養(yǎng)基 化妝品檢測培養(yǎng)基 動物細胞培養(yǎng)基 啤酒檢驗培養(yǎng)基 軍團菌檢測培養(yǎng)基 支原體檢測培養(yǎng)基 小腸結(jié)腸炎耶爾森氏菌檢驗培養(yǎng)基 彎曲桿菌檢驗培養(yǎng)基 產(chǎn)氣莢膜梭菌、肉毒梭菌、厭氧菌檢驗培養(yǎng)基 阪崎腸桿菌檢驗培養(yǎng)基 溶血性鏈球菌檢測培養(yǎng)基 李斯特氏菌檢測培養(yǎng)基 弧菌檢測培養(yǎng)基 乳酸菌、雙歧桿菌檢測培養(yǎng)基 酵母、霉菌檢測培養(yǎng)基 檢測培養(yǎng)基 沙門氏菌、志賀氏菌檢驗培養(yǎng)基 大腸菌群、糞大腸菌群、大腸桿菌及腸桿菌科檢測培養(yǎng)基 細菌總數(shù)檢測,增菌培養(yǎng)基
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小鼠成骨細胞的培養(yǎng)和傳代

時間:2014/11/7閱讀:792
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原代培養(yǎng)

1.取新生3d以內(nèi)BALB/c小鼠,斷頸處死后立即投入75%酒精中消毒5min(雖有頭部皮膚保護,但時間不要過長,所以事先要把準備工作做好之后再去殺老鼠)。

2.D-Hank’s液漂洗后分離顱蓋骨,刮除骨膜和結(jié)締組織,DMEM清洗顱骨骨片并剪碎。(自我感覺碎一點好一些)

3.加入0.25%(含0.02EDTA),37°恒溫消化20min,吸出消化液,之后1mg/1mlI型膠原酶37°恒溫消化20min后離心(1000r/min,5min),棄上清液。(消化時間自己摸索,之前我消化30分鐘,但zui后發(fā)現(xiàn)消化30min后懸浮未貼壁細胞較多,于是降低了消化時間,增加了膠原酶消化時間),

4.加入含15%血清的DMEN培養(yǎng)基,吹打骨片(力氣不要過大,但要吹打次數(shù)多一下,盡量使細胞從松解得骨片上脫落),將細胞懸液接種于培養(yǎng)瓶中,置于37℃ CO2恒溫孵育箱中培養(yǎng)。

傳代培養(yǎng)步驟

1.棄除舊的培養(yǎng)液(可以吸,可以倒,倒的時候小心)

2.用PBS沖洗一遍(加PBS清洗或換液時,主要反拿培養(yǎng)瓶加液,不要將細胞沖刷下來)

3.用0.25%的消化液消化30-45s,在顯微鏡下觀察,細部變圓,間距增大時,可用手拍打瓶側(cè)壁與底壁,會發(fā)現(xiàn)細胞很快懸?。ㄈ绻拇虻脑?,下一步注意千萬不要棄去消化液,如果不拍打,可以棄去)

4.加入含15%的牛血清培養(yǎng)液終止消化

5.用吸管反復細心吹打瓶底,置離心管中后,可以用PBS或D-HANKS再吹打,可以反復幾次,目的是將細胞盡可能的洗刷干凈(用PBS或D-HANKS目的是省錢,呵呵培養(yǎng)基也可以,不過money多,而且易產(chǎn)生氣泡)

6.離心

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