材料與試劑:
鑷子、剪子、培養(yǎng)皿
離心管、培養(yǎng)瓶、吸管、滴管
200目篩網(wǎng)
膠原酶(10ml)(20mg膠原酶、200mg牛血清白蛋白、10毫升雙蒸水)國外也用培養(yǎng)基配.
方法:
1、取無菌條件下新鮮切除的人腹部皮下脂肪組織約5-10克,放入培養(yǎng)皿,用1×PBS沖洗2-3次,充分洗去血污,剔除結(jié)締組織和可見血管。
2、充分剪碎脂肪組織為1mm×1mm的小塊。
3、將其加入到含有5毫升膠原酶的離心管里,37度水浴振蕩消化1小時。
4、將含有組織的消化液加入到有10毫升DMEM/F12培養(yǎng)基的離心管中,并且使用吸管反復(fù)吹打使組織塊分散,然后通過孔徑25μM(200目)的篩網(wǎng)過濾,收集濾液和未過濾的組織塊。
5、將濾液以600g離心5分鐘棄上清,加入原代培養(yǎng)的基礎(chǔ)培養(yǎng)基制成細胞懸液。
6、將未濾過的組織按照上述過程再處理一次,將倆次獲得的細胞懸液混勻計數(shù),按照104個/cm2的密度接種于培養(yǎng)瓶里,于37度,5%CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。
接種12-16小時基本貼壁。在增殖狀態(tài)下的前脂肪細胞可以使用消化的方法傳代,并且可以凍存和復(fù)蘇。