動(dòng)物染色體標(biāo)本的制備

時(shí)間：2014/12/29閱讀：945

每一物種的細(xì)胞一般都具有一定數(shù)目、形狀和大小的染色體，在秋水仙素的作用下可使分裂細(xì)胞阻斷在中期，此時(shí)染色體形態(tài)zui典型，然后通過(guò)低滲、固定、染色等步驟，便可在顯微鏡下呈現(xiàn)出其形態(tài)。

實(shí)驗(yàn)用品
器具：顯微鏡、培養(yǎng)皿、、鑷子、冷凍載片、滴管
試劑：秋水仙素、生理鹽水、甲醇、冰醋酸、低滲液、PH6.8 磷酸緩沖液、Giemsa 染色液
材料：蟾蜍

實(shí)驗(yàn)方法步驟
1. 前處理實(shí)驗(yàn)前3－4 小時(shí)，按每克體重3ug 劑量給蟾蜍的腹腔注射秋水仙素；
2. 取材打開(kāi)蟾蜍腹腔，截取1－2cm 長(zhǎng)的一段小腸（以十二直腸為好），用見(jiàn)到剖開(kāi)成片狀，在生理鹽水中洗凈；
3. 低滲將洗凈的小腸投入到盛有5mL 低滲液的小試管中，在37℃水浴下處理30 分鐘以上；
4. 固定棄去低滲液，加入新配制的甲醇（3）：冰乙酸（1）固定液約5ml，靜止固定40分鐘左右；
5. 解離棄去固定液，加入約2ml60％的冰乙酸，輕輕搖動(dòng)，使解離的細(xì)胞充分散開(kāi)，5 分鐘后棄去小腸，即得細(xì)胞懸浮液；
6. 滴片吸取少許細(xì)胞懸浮液，在適當(dāng)?shù)母叨鹊?－4 滴于冰冷的載片上，迅速吹斜氣；
7. 干燥滴片自然風(fēng)干或吹風(fēng)機(jī)吹干；
8. 染色在載片上滴十滴磷酸緩沖液，再滴一滴Giemsa 染液，橡皮球輕輕吹均勻，染色30 分鐘左右；
9. 觀察吹干后在顯微鏡下觀察。

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