目前構(gòu)建重組腺病毒系統(tǒng)的策略,主要有三種
1)體外直接連接(clontech的ADENO-X系統(tǒng))
2)在細(xì)菌中重組的策略(adeasy系統(tǒng))
3)在293細(xì)胞中重組的策略(AdMax系統(tǒng))
國家人類基因組北方研究中心通過與美國Vector Biolab公司合作開發(fā)出了一套不同于以上策略的新的重組腺病毒系統(tǒng)。通過這套系統(tǒng),實現(xiàn)了重組腺病毒載體構(gòu)建,包裝的高通量化。在不到一年的時間里,成功構(gòu)建,包裝了500多個腺病毒。通過對穿梭載體,骨架載體,包裝細(xì)胞系的改進(jìn),提高了病毒的滴度,比目前其它腺病毒系統(tǒng)得到的滴度都高。而且可以包裝比較大的有毒性作用的基因。這套系統(tǒng)的建立無疑是對國內(nèi)基因治療領(lǐng)域的促進(jìn),提高了科研效率,降低了科研成本。
這套系統(tǒng)的解決了目前重組腺病毒系統(tǒng)的很多技術(shù)難題:
1. 提高了病毒的滴度。一次大規(guī)模擴增,純化得到的病毒量可以滿足上百只裸鼠實驗或幾十只大鼠實驗。
2. 可以包裝任何有細(xì)胞毒性的基因。針對腫瘤的基因治療經(jīng)常會選擇有細(xì)胞毒性的凋亡相關(guān)基因來實現(xiàn)殺傷腫瘤細(xì)胞的目的。這套系統(tǒng)解決了這樣的難題。
3. 可以包裝內(nèi)部有PacI位點的插入基因。大多系統(tǒng)都選擇PacI酶切線性化viral DNA,如果基因內(nèi)部有PacI位點往往給研究者帶來困難。
4. 縮短了重組腺病毒載體的構(gòu)建周期,而且可以開展大規(guī)模的載體構(gòu)建,病毒包裝項目。為研究者開展后續(xù)的實驗項目或者進(jìn)行更大,更具規(guī)?;目蒲许椖抗?jié)約了時間和成本。
5. 滴度測定更快,更準(zhǔn)確。一般的滴度測定方法,兩次重復(fù)實驗都會有很大的偏差,該系統(tǒng)優(yōu)化了滴度測定的條件,使得滴度測定工作只需要三天時間,兩次重復(fù)滴度測定偏差不超過40%。
6. 的包裝成功率。穿梭載體系統(tǒng)命名為pDual系列穿梭載體,Dual代表可與兩套病毒骨架載體兼容,用其中一套的包裝成功率為99%以上,在包裝500個腺病毒過程中只有一個沒有包裝成功。剩下的1%不好包的,不用再重新構(gòu)建穿梭載體就可以馬上換另一套系統(tǒng)。這樣降低了風(fēng)險,節(jié)省了客戶的時間。