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標準品
培養(yǎng)基
培養(yǎng)基原料 霍亂弧菌診斷血清 大腸艾希氏菌診斷血清 志賀氏菌屬診斷血清 沙門氏菌屬診斷血清 標準血清,診斷血清 抗生素藥敏紙片 微生物配套試劑 微生物生化管 管裝培養(yǎng)基 即用型液體培養(yǎng)基 一次性培養(yǎng)基平板 顯色培養(yǎng)基 臨床培養(yǎng)基 菌種保存培養(yǎng)基 四環(huán)素檢定、厭氧亞硫酸鹽還原桿菌檢測培養(yǎng)基 維生素檢測培養(yǎng)基 一次性衛(wèi)生用品衛(wèi)生檢測培養(yǎng)基 罐頭食品商業(yè)無菌檢測培養(yǎng)基 飲用水及水源檢測培養(yǎng)基 藥品、生物制品檢測培養(yǎng)基 化妝品檢測培養(yǎng)基 動物細胞培養(yǎng)基 啤酒檢驗培養(yǎng)基 軍團菌檢測培養(yǎng)基 支原體檢測培養(yǎng)基 小腸結(jié)腸炎耶爾森氏菌檢驗培養(yǎng)基 彎曲桿菌檢驗培養(yǎng)基 產(chǎn)氣莢膜梭菌、肉毒梭菌、厭氧菌檢驗培養(yǎng)基 阪崎腸桿菌檢驗培養(yǎng)基 溶血性鏈球菌檢測培養(yǎng)基 李斯特氏菌檢測培養(yǎng)基 弧菌檢測培養(yǎng)基 乳酸菌、雙歧桿菌檢測培養(yǎng)基 酵母、霉菌檢測培養(yǎng)基 檢測培養(yǎng)基 沙門氏菌、志賀氏菌檢驗培養(yǎng)基 大腸菌群、糞大腸菌群、大腸桿菌及腸桿菌科檢測培養(yǎng)基 細菌總數(shù)檢測,增菌培養(yǎng)基
抗體
生物試劑
細胞
菌株
血清
細胞分離試劑
試劑盒

動物淋巴管內(nèi)皮細胞的分離

時間:2015/1/29閱讀:790
分享:
  實驗材料:
  
  1.哺乳動物胸導管淋巴管
  
  2.1×PBS,含100u/ml和100μg/ml,pH7.4
  
  3.0.2%Ⅰ型膠原酶
  
  4.眼科剪,
  
  5.慕絲線(7號線)、細鐵絲
  
  6.離心管(15ml、50ml)
  
  實驗方法:
  
  1.處死動物后,打開胸腔,分離胸導管,在胸導管上端結(jié)扎,切取10-15cm的一段。將胸導管放入預冷PBS中漂洗。
  
  2.在解剖顯微鏡下,用眼科剪和剝除外膜的脂肪和纖維組織,然后用PBS反復沖洗管腔。
  
  3.將胸導管移入含PBS的大培養(yǎng)皿中,清洗3次。在胸導管的遠端插入靜脈留置針,并結(jié)扎固定。用PBS沖洗管腔后,將游離端結(jié)扎。用靜脈留置針向管腔內(nèi)注入消化液,至淋巴管充盈為止。在37℃條件下,消化10min。淋巴管的管壁較薄,灌注消化時間不宜過長,以免消化過度,引起成纖維細胞的污染。
  
  4.取出胸導管,在游離端剪一小口,用離心管收集消化液,然后用培養(yǎng)液沖洗管腔,收集消化液和沖洗液,以1000r/min,離心10min。離心后吸去上清液,用培養(yǎng)液輕輕混懸細胞。
  
  5.將細胞接種于培養(yǎng)皿或培養(yǎng)板中,培養(yǎng)24h后補充培養(yǎng)液,繼續(xù)培養(yǎng)。每隔2-3d換液1次。換液時,吸去1/2-2/3培養(yǎng)液,再加入新鮮培養(yǎng)液。
  
  6.原代培養(yǎng)4-6h后,大部分細胞已貼壁生長。24h后,內(nèi)皮細胞形成由數(shù)個細胞組成的細胞群。淋巴管內(nèi)皮細胞的活性較低,原代培養(yǎng)時細胞生長緩慢。2-3周后,細胞生長形成單層。淋巴管內(nèi)皮單層呈卵石狀特征性排列,可傳代培養(yǎng)。
  
  7.PriCells-原代內(nèi)皮細胞特制基礎培養(yǎng)基
  
  8.PriCells-原代內(nèi)皮細胞培養(yǎng)特制添加劑
  
  9.PriCells-原代細胞分離試劑盒
  
  10.PriCells-原代細胞鑒定試劑盒

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