二、實(shí)驗(yàn)安排

第1次   菌體超聲破壁、離心、包涵體復(fù)性、 裝離子交換柱

第2次   測酶活、定蛋白離子交換層析  層析樣品進(jìn)行濃縮、透析 

第3次    濃縮、透析前、后樣品測活、定蛋白  裝分子篩柱   

第4次    分子篩層析，并對收集樣品進(jìn)行測活、定蛋白等 

第5次    對分離純化各樣品進(jìn)行蛋白電泳分析，并繪出分離純化表 

三、實(shí)驗(yàn)操作    

第1次：  菌體超聲破壁、離心、包涵體復(fù)性、裝離子交換柱  

實(shí)驗(yàn)順序：超聲破壁→離心→裝離子交換柱→平衡→包涵體復(fù)性  

掌握要點(diǎn)：破壁原理 

裝離子交換柱方法  

包涵體復(fù)性原理及方法

第2 次：測酶活、定蛋白、  離子交換層析分析 、 層析樣品進(jìn)行濃縮、透析 

實(shí)驗(yàn)順序：測酶活→上柱→梯度洗脫→定蛋白→紫外吸收測蛋白峰→酶活曲線測定→收集樣品→ 濃縮 →透析 涉及單元實(shí)驗(yàn)：測酶活、定蛋白、  離子交換層析、濃縮、透析  

掌握要點(diǎn)：堿性磷酸單酯酶測活原理 

          紫外吸收法繪蛋白濃度曲線方法 

          離子交換層析原理及方法 

          濃縮及透析常用方法

第3次：濃縮、透析前、后樣品測活、定蛋白、裝分子篩柱  

實(shí)驗(yàn)順序：濃縮透析前、后樣品測活→考馬斯亮藍(lán)法定蛋白→裝分子篩柱→平衡  

涉及單元實(shí)驗(yàn)：測活、定蛋白、裝分子篩柱  

掌握要點(diǎn)：考馬斯亮藍(lán)法測蛋白濃度方法  

                  裝分子篩柱方法 

第4次：分子篩層析，并對收集樣品進(jìn)行分析  

實(shí)驗(yàn)順序：測活樣品進(jìn)行分子篩層析→紫外吸收測蛋白峰--酶活曲線測定→考馬斯亮藍(lán)法定蛋白  

涉及單元實(shí)驗(yàn)：破壁、離心、分子篩層析、復(fù)性 

掌握要點(diǎn)：分子篩層析原理  

                  對分離純化各樣品計(jì)算比活

第5次：對分離純化各樣品進(jìn)行蛋白電泳分析， 并繪出分離純化表 

 實(shí)驗(yàn)順序：蛋白電泳，同時(shí)進(jìn)行數(shù)據(jù)分析 

涉及單元實(shí)驗(yàn)：蛋白電泳

掌握要點(diǎn)：掌握蛋白電泳方法 

                  了解分離純化樣品純度鑒定的各種方法 

                  繪制酶的分離純化表