他們提出使用一種試劑，這種試劑能夠使兩種同位素在形式上具有明顯的區(qū)別，即同位素標(biāo)記的親和標(biāo)簽(isotopicallycodedaffinitytag，ICAT)試劑。ICAT試劑的結(jié)構(gòu)包含一個(gè)頭部、一個(gè)連接部分和一個(gè)碘激活的羰基基團(tuán)，這個(gè)羰基基團(tuán)能夠特異性地與半側(cè)鏈反應(yīng)。重同位素的形態(tài)與輕同位素的形態(tài)的差別相當(dāng)于在連接區(qū)部分的8個(gè)氫原子被8個(gè)氘原子取代。

ICAT方法

這種方法的設(shè)計(jì)目的是比較一對生物樣品。兩個(gè)蛋白質(zhì)樣品(細(xì)胞狀態(tài)I和細(xì)胞狀態(tài)Ⅱ)分別單獨(dú)用d₀ ―ICAT和d₈―ICAT試劑標(biāo)記，然后混合，并用水解。然后將肽混合物送至―親和色譜柱分析。這一步驟通過分離和對含半殘基肽的洗脫來完成對肽混合物的簡化。洗脫步驟與能夠進(jìn)行質(zhì)譜和串聯(lián)質(zhì)譜的儀器偶聯(lián)。一對不同標(biāo)記的肽幾乎在相同的時(shí)間洗脫，可以通過兩個(gè)距離為8kDa的質(zhì)譜信號識(shí)別出來。因?yàn)轭A(yù)計(jì)d₀ 修飾的肽和d₈修飾的肽的電離性質(zhì)是相同的，所以在每一個(gè)肽上都可以完成相對定量。一旦發(fā)現(xiàn)一對呈現(xiàn)“差別表達(dá)"的肽，就可以明確地進(jìn)行串聯(lián)質(zhì)譜來鑒定此肽。

這種技術(shù)產(chǎn)生的數(shù)據(jù)比MuDPIT方法得到的數(shù)據(jù)少，能夠直接相對定位二元比較的肽。由于14％的真核蛋白質(zhì)沒有半殘基，這使得這項(xiàng)技術(shù)不適用于這些蛋白質(zhì)。對于基于2D―PAGE的方法難以處理的小的、大的、酸性的、堿性的和疏水的蛋白質(zhì)，這項(xiàng)技術(shù)與MuDPIT方法比基于2D―PAGE的方法有相似的優(yōu)勢。它們也有某些共同的劣勢，如不能獲得*蛋白質(zhì)的信息、處理過程的信息、翻譯后修飾的信息以及混合物中翻譯后修飾的蛋白質(zhì)的相對豐度的信息。

為了整合這項(xiàng)技術(shù)和2D―PAGE方法的優(yōu)勢，現(xiàn)在開發(fā)了一種新的試劑，這種試劑稱為可裂解的ICAT。此試劑可以與用于2D―PAGE的二元混合物的試劑兼容。這種試劑已由應(yīng)用生物系統(tǒng)公司投放市場。