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標(biāo)準(zhǔn)品
培養(yǎng)基
培養(yǎng)基原料 霍亂弧菌診斷血清 大腸艾希氏菌診斷血清 志賀氏菌屬診斷血清 沙門氏菌屬診斷血清 標(biāo)準(zhǔn)血清,診斷血清 抗生素藥敏紙片 微生物配套試劑 微生物生化管 管裝培養(yǎng)基 即用型液體培養(yǎng)基 一次性培養(yǎng)基平板 顯色培養(yǎng)基 臨床培養(yǎng)基 菌種保存培養(yǎng)基 四環(huán)素檢定、厭氧亞硫酸鹽還原桿菌檢測培養(yǎng)基 維生素檢測培養(yǎng)基 一次性衛(wèi)生用品衛(wèi)生檢測培養(yǎng)基 罐頭食品商業(yè)無菌檢測培養(yǎng)基 飲用水及水源檢測培養(yǎng)基 藥品、生物制品檢測培養(yǎng)基 化妝品檢測培養(yǎng)基 動物細(xì)胞培養(yǎng)基 啤酒檢驗培養(yǎng)基 軍團(tuán)菌檢測培養(yǎng)基 支原體檢測培養(yǎng)基 小腸結(jié)腸炎耶爾森氏菌檢驗培養(yǎng)基 彎曲桿菌檢驗培養(yǎng)基 產(chǎn)氣莢膜梭菌、肉毒梭菌、厭氧菌檢驗培養(yǎng)基 阪崎腸桿菌檢驗培養(yǎng)基 溶血性鏈球菌檢測培養(yǎng)基 李斯特氏菌檢測培養(yǎng)基 弧菌檢測培養(yǎng)基 乳酸菌、雙歧桿菌檢測培養(yǎng)基 酵母、霉菌檢測培養(yǎng)基 檢測培養(yǎng)基 沙門氏菌、志賀氏菌檢驗培養(yǎng)基 大腸菌群、糞大腸菌群、大腸桿菌及腸桿菌科檢測培養(yǎng)基 細(xì)菌總數(shù)檢測,增菌培養(yǎng)基
抗體
生物試劑
細(xì)胞
菌株
血清
細(xì)胞分離試劑
試劑盒

士鋒PPO活性測定

時間:2015/7/10閱讀:755
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一、原理與方法

PPO催化各種酚與O2氧化為醌。本實驗是采用鄰苯二酚為底物,在0.2M-0.1M檸檬酸緩沖液PH5.8的反應(yīng)體系中,PPO催化鄰苯二酚形成褐色的醌,在分光光度計410nm處使反應(yīng)體系的OD值產(chǎn)生變化,通過OD值上升的讀數(shù)變化確定PPO的酶活大小。

其方法是:在含有4mlPH5.8的0.2M-0.1M檸檬酸緩沖液試管中加入0.05ml0.05M鄰苯二酚溶液,在30℃恒溫水浴中預(yù)熱后加入0.05ml酶液,反應(yīng)5分鐘,在分光光度計410nm處讀取吸光值。在上述條件下,以A410讀數(shù),以每分鐘增加0.01O.D.值定義為一個酶活性單位(U)。

二、儀器與試劑

(1)樣品:

多酚氧化酶粗酶液

硫酸銨沉淀組分

DE-52洗脫組分

葡聚糖凝膠洗脫組分

(2)底物:

鄰苯二酚:O.01M鄰苯二酚溶液

(3)反應(yīng)體系:

0.2M鄰酸二氫鈉-0.1M檸檬酸緩沖液PH5.8

(4)器皿與儀器:

試管、恒溫水浴等

分光光度計

三、酶蛋白的比活性

比活性=酶活單位(U)/mg蛋白質(zhì)

四、實驗結(jié)果與分析

1. Sephadex G-200的洗脫組分的相對濃度(OD590)和相對酶活(OD410)

結(jié)果列表

試管號 蛋白質(zhì)濃度 PPO酶活 試管號 蛋白質(zhì)濃度 PPO酶活

空白 0 0 3 0.16 0.09

粗酶液 0.20 0.14 4 0.03 0.03

1 0.00 0.01 5 0.03 0.01

2 0.13 0.09 6 0.02 0.02

分析:2和3試管中含絕大部分所需蛋白,保存進(jìn)行下一步純化。

2. DE-52的洗脫組分的相對濃度(OD590)和相對酶活(OD410)

結(jié)果列表

試管號 蛋白質(zhì)濃度 PPO酶活 試管號 蛋白質(zhì)濃度 PPO酶活

空白 0 0 3 0.03 0.05

粗酶液 0.22 0.16 4 0.09 0.05

1 0.00 0.00 5 0.07 0.02

2 0.03 0.02 6 0.03 0.00

分析:酶活性高低不一定與蛋白含量高低成正比,3和4試管中含較多所需蛋白。

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