1.概 述 
mRNA差異顯示技術(shù)（mRNA differetial display）是一種快速有效的克隆差異性表達(dá)基因的方法。 

方法建立：1992年 Liang P和Pardee應(yīng)用DD技術(shù)對比人類乳腺癌細(xì)胞與正常細(xì)胞所表達(dá)的mRNA，以此來克隆癌細(xì)胞所*的基因 

目前已應(yīng)用于個各領(lǐng)域： 
農(nóng)業(yè)、植物 
動物 
醫(yī)學(xué) 
? 胚胎發(fā)育 
? 遺傳病 
? 藥物 
? 腫瘤 

2.mRNA差異顯示原理 
是分離差異表達(dá)基因的一個重要方法。人類大約含有三萬個不同的基因。在不同的單個細(xì)胞中只有10％的基因處于表達(dá)狀態(tài)。 
生物體在不同的生理，病理狀態(tài)下，基因的表達(dá)水平不同。 
生命過程中選擇性表達(dá)的基因主要有：發(fā)育與分化、體內(nèi)平衡、對攻擊的應(yīng)答、細(xì)胞周期調(diào)節(jié)、老化和程序性細(xì)胞死亡等。 
差異顯示獲得的只是某個基因的片段，而不是直接獲得全長cDNA克隆。 

3.基本程序 
選擇表型特性差異顯著對象 
展示mRNA的差異 
基因差異 
克隆與表型差異高度相關(guān)的新基因 
4.技術(shù) 
? 基本技術(shù) 
逆轉(zhuǎn)錄（ RT ） 
聚合酶鏈反應(yīng)（PCR） 
凝膠電泳 
5.RT-PCR 
? 錨定引物 T12-MN，含有12個T可以結(jié)合于mRNA 3`端 poly（A）尾，M為A、C、G 3種堿基之一，N為A、T、C、G 4種堿基之一。 
? 熒光錨定引物 ，引物5`端加入T7 RNA多聚酶啟動子并帶有熒光分子 

----------- AAAAAAAAAA –3` mRNA 

------------XAAAAAAAAAAA–3` 1/3 mRNA 
MTTTTTTTTTTTT（12T） Prime 

---------YXAAAAAAAAAAAAA –3` 1/12 mRNA 
NMTTTTTTTTTTTT（12T）Anchor Prime 

?熒光錨定引物： 
NMTTTTTTTTTTTT-T7 RNA多聚酶啟動子-熒光分子 
（Genomyx company） 

因此共有12種錨定引物 
?同位素標(biāo)記錨定引物 

?隨機引物 （Arbitrary Prime） 
可以隨機地與cDNA不同位置多個位點結(jié)合，擴增出不同長度的cDNA片段混合物。 
共20種隨機引物，隨機引物-M13 
?隨機和錨定引物的多種組合可以展示10000-15000種mRNA